山风组培苗生产技术规程（征求意见稿）

ICS65.020.20B 38DB 45广 西 壮 族 自 治 区 地 方 标 准DB 45/T XXXXX2017山风组培苗生产技术规程The somaclone production technology procedures of Blumea aromatica（征求意见稿）2017 - XX - XX 发布 2017 - XX - XX 实施广 西 壮 族 自 治 区 质 量 技 术 监 督 局 发 布DB45/T XXXXX2017I前 言本标准按照GB/T 1.12009  给出的规则起草。本标准由广西壮族自治区卫生和计划生育委员会提出。本标准由广西卫生标准化技术委员会归口。本标准起草单位：广西壮族自治区药用植物园。本标准主要起草人： DB45/T XXXXX20171山风组培苗生产技术规程1范围本标准规定了山风（ Blumea aromatica DC.）组培苗生产的术语与定义、组培苗生产技术、营养袋（杯）苗生产技术、包装与运输和生产档案。本标准适用于广西壮族自治区境内中药材山风组培苗的生产。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB 3095  环境空气质量标准GB 4285  农药安全使用标准GB 5084  农田灌溉水质标准国家药品监督管理局第 32 号令（2002  年） 中药材生产质量管理规范（试行）3术语与定义下列术语与定义适用于本标准。 3.1组培（瓶）苗应用植物组织培养技术，以植物组织或器官为外植体，无菌接种于培养基，在适宜的光温条件下，依次经一定时间的无菌丛生芽诱导、继代和生根培养，再经过一段时间的炼苗移栽而生成的幼苗。3.2继代苗将诱导产生的芽、苗、愈伤组织或胚状体等培养物重新分割，接种到新鲜培养基上进一步扩大培养而生成的幼苗。3.3营养袋（杯）苗将组培苗经炼苗后移栽于营养袋（杯）中，经过一段时间的生长而生成具有完整根茎叶结构的幼苗。4组培苗生产技术4.1外植体来源DB45/T XXXXX20172选择物种鉴定准确、来源清楚、健壮、无病虫危害、性状稳定的山风植株。4.2外植体采集4.2.1时间连续晴天2  d以上，上午9时11时。4.2.2部位带顶芽或腋芽的嫩茎，长5  cm10  cm。4.2.3记录填写采集记录表，记录采集号、采集地点、生长环境、采集时间、采集人，建立外植体采集信息档案，见附录A。4.3外植体保存通常即采即用。保存时间超过1  h，用干净湿润的纸或纱布包裹保湿或置于冰壶保存。4.4外植体灭菌4.4.1预处理将外植体剪成2  cm3  cm带腋芽或顶芽的茎段，置于烧杯中，用0.05洗洁精溶液浸泡10  min，期间用毛笔轻轻刷洗，流水冲洗15  min后即可进行灭菌。4.4.2灭菌在超净工作台上，用75酒精浸泡外植体5  s10  s后，用无菌水清洗1次，再用0.1氯化汞浸泡，搅拌8  min，然后用无菌水清洗3次4次，用无菌滤纸吸干表面水分后，将材料切成带顶芽或一个腋芽的茎段(约长0.5  cm)，注意切去接触过氯化汞溶液的带伤口茎段。4.5外植体接种在超净工作台上，将已灭菌的带顶芽或一个腋芽的茎段斜插入诱导培养基中，见附录C的C.1。4.6组培苗培养4.6.1培养条件初代和继代增殖培养的基本培养基为 MS，生根培养的基本培养基为 1/2 MS，培养基均附加 3.0蔗糖和 0.5琼脂，pH  6.0，配制分装后，于 121 灭菌 20 min。培养条件为 26 、光照强度 2 000 lx、光照时间 10 h/d。4.6.2初代诱导培养在超净工作台上，将已灭菌的外植体接种到诱导培养基中，见附录C的C.1。每瓶接种3个外植体。培养7  d15  d后，待外植体诱导出的丛生芽长至约5  cm时进行继代转接。4.6.3继代培养DB45/T XXXXX20173在超净工作台上，将初代诱导培养长出的丛生芽分割成含顶芽或一个腋芽的茎段，转接到增殖培养基上，见附录C的C.2。每瓶接种3个5个茎段。继代培养周期20  d。4.6.4生根培养在超净工作台上，挑选继代苗中叶片展开、生长健壮、株高2  cm以上的单芽转接于生根培养基上，见附录C的C.3。每瓶接种2株5株，15  d后（根系长1.0  cm以上）可开盖炼苗。5营养袋（杯）苗生产技术5.1苗地要求环境空气质量应符合 GB 3095 的规定，灌溉水的使用应符合 GB 5084 的规定。5.2基质选取pH  4.5pH  6.5的泥炭土-细河沙（3:1）为基质。移栽前24  h48  h用0.5高锰酸钾溶液进行消毒。5.3容器规格营养袋（杯），规格为7  cm10 cm或8  cm12 cm。5.4移栽前炼苗将组培瓶苗移至大棚或温室内炼苗3  d5  d后，打开瓶盖继续炼苗2  d3  d，打开瓶盖后注意早晚喷雾以防止组培苗萎蔫。5.5组培苗移栽 5.5.1移栽时间春季、初夏或秋季。5.5.2洗苗用自来水漂洗干净组培瓶苗根部残留的培养基。5.5.3移栽将组培苗栽入营养袋（杯）基质中间，轻压根部，淋透定根水，应确保根不外露，根土密接，植株固定不倒。5.5.4日常管护5.5.4.1温湿度条件温度 20 28  。移栽后 30 d 内，空气相对湿度保持在 8590，以后保持在6570，晴天需用遮光度 50的遮阳网遮荫。5.5.4.2施肥DB45/T XXXXX20174组培苗长出新叶起，每隔7  d10  d喷施0.10.5的含氮叶面肥1次。遵循先稀后浓，勤施薄施的原则。5.5.4.3主要病虫害防治按GB  4285的规定执行，移栽初期每隔20  d30  d喷施百菌清或多菌灵等杀菌剂1次，并根据病虫害状况针对性防治。5.5.4.4出圃苗规格当幼苗长出5片以上新叶，且生长健壮、无检疫对象范围内病虫为害即符合出圃要求。6包装与运输6.1组培瓶苗将经过开盖炼苗的组培瓶苗清洗干净根部培养基后，整齐装入保鲜盒或塑料泡沫箱内，并加胶带密封。长途运输应有保湿、降温、防风、防晒、防雨措施。运输环境温度15  30  ，避免阳光直射和剧烈颠簸，装运时间不超过48  h。6.2营养袋（杯）苗将营养袋（杯）苗装入竹筐或塑料筐内，装运时应有序叠放。长途运输应有保湿、降温、防风、防晒、防雨措施，宜在阴天或夜间运输，装运时间不超过3  d。6.3包装标识外包装上应有清晰、牢固的标识，标识的内容含生产单位、产地、品种名称、经营许可证编号、检疫证书、数量、包装日期、联系方式等。7生产档案参照国家药品监督管理局第32  号令（2002  年）中药材生产质量管理规范（试行）中  “第九章 文件管理”相关规定执行，并对组培苗生产的各环节进行记录，见附录B。DB45/T XXXXX20175A A附录A（规范性附录）采集记录表编号：序号 采集号 采集地点 生长环境 采集时间 采集人 备注附录B（规范性附录）生产记录表编号：日期 施肥 病虫害防治 负责人员序号/批次数量（株） 炼苗移栽出圃种类 施用时间浓度 方法 种类 施用时间浓度 方法DB45/T XXXXX20176B B附录C（资料性附录）培养基配方C.1诱导培养基配方MS6-BA  2.0 mgL1NAA  0.2 mgL1L白糖  30 gL1琼脂  4.5 gL1，pH  6.0。C.2继代培养基配方