亚麻籽中α-亚麻酸的测定 液相色谱法

ICS DB 15内 蒙 古 自 治 区 地 方 标 准DB XX/ XXXXXXXXX亚麻籽中 -亚麻酸的测定 液相色谱法Determination of -linolenic acid in flaxseed HPLC（征求意见稿）XXXX - XX - XX 发布 XXXX - XX - XX 实施内 蒙 古 自 治 区 技 术 监 督 局 发 布DBXX/ XXXXXXXXXI前言本标准按GB/T 1.1-2009进行编写。本标准由内蒙古农牧业科学院资源环境与检测技术研究所提出出并归口。本标准由内蒙古农牧业科学院资源环境与检测技术研究所负责起草。本标准主要起草人：任超、姚一萍、郝星、崔艳、刘建平DBXX/ XXXXXXXXXII引言亚麻是我区的优势农作物，亚麻籽中-亚麻酸的含量非常高，-亚麻酸是一种多不饱和脂肪酸，是一种必需脂肪酸，是一种生命核心物质，是构成人体脑细胞和组织细胞的重要成分。-亚麻酸是人体自身不能合成的，也无法由其他营养来合成的，必须要依靠膳食来获得。为实现亚麻籽中-亚麻酸含量的准确检测，内蒙古农牧业科学院资源环境与检测技术研究所起草并制定了“亚麻籽中-亚麻酸的测定 液相色谱法”标准。DBXX/ XXXXXXXXX1亚麻籽中 -亚麻酸的测定 液相色谱法1范围本标准规定了-亚麻酸含量检测的制样和高效液相色谱测定方法。本标准适用于亚麻籽中-亚麻酸含量的测定。本方法检出限为0.0250g/100g2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法3原理样品经石油醚提取，减压蒸馏后得到亚麻籽油脂。取油脂经碱化甲醇处理后，调节酸碱度制成甲醇溶液，注入高效液相色谱分析，根据保留时间定性，依据峰面积定量。4试剂除非另有说明，在分析中仅使用经确认的分析纯试剂和GB/T 6682中规定的至少二级水。4.1石油醚：60-904.2甲醇：色谱级4.3氢氧化钠4.4盐酸4.5磷酸：优级纯4.6去离子水4.7酚酞4.895%乙醇4.9酚酞指示剂：称取 1.0 g 酚酞（4.7）用 95%乙醇（4.8）定容至 100.0 mL4.10碱性甲醇：称取 2.0 g 氢氧化钠（4.3）用甲醇（4.2）定容至 100.0 mL4.11盐酸水溶液：量取 1.0 mL 盐酸（4.4）用水（4.6）定容至 10.0 mLDBXX/ XXXXXXXXX24.12磷酸水溶液：吸取 1.0 mL 磷酸（4.5）用水（4.6）定容至 1000 mL，用真空抽滤器（5.11）过微孔滤膜（5.12）封口备用。4.13-亚麻酸标准储备液：精密称取 -亚麻酸标准品 100 .0 mg，用甲醇（4.2）定容至10.00 mL，得到浓度 10.00 mg/mL -亚麻酸标准储备液，于-20条件下贮存，备用。4.14-亚麻酸标准工作液：准确吸取储备液（4.13）用甲醇（4.2）稀释成浓度为 20.0 g/mL、50.0g/mL、100.0 g/mL、150g/mL、200g/mL、400g/mL 的工作曲线，备用。5仪器及材料5.1样品粉碎机，研钵5.2电子天平：感量 0.1 mg5.3磨口具塞三角瓶：250 mL5.4超声波振荡器5.5滤纸：直径 11 cm5.6旋转蒸发仪，配 250 mL 茄形瓶（用前称量干重）5.7容量瓶：10 mL、50 mL、100 mL、1000 mL5.8恒温水浴振荡器5.9一次性注射器5.10针筒滤膜：有机系，0.45m5.11真空抽滤器：配 1000 mL 接收瓶5.12微孔滤膜：有机系，0.45 m5.13高效液相色谱仪：配紫外检测器6分析步骤6.1样品预处理取除去杂质的干净样品至少50 g，磨碎，通过孔径1mm圆孔筛，装入广口瓶中密封，备用。试样应研磨至适当粒度，以保证连续测定时的误差要求。6.2提取称取经6.1预处理好的样品10.00 g 于具塞三角瓶（5.3）中，加60 mL石油醚（4.1），在超声波震荡器（5.4）中提取30 min。过滤提取液，收集滤液于茄形瓶（5.6）中。滤纸及残渣放回原三角瓶，加50 mL石油醚（4.1），超声波震荡提取30 min。过滤提取液，合并滤液于之前茄形瓶中。使用旋转蒸发仪（5.6），45减压蒸馏石油醚，得到亚麻籽油脂。茄形瓶擦干外壁水分后称重。DBXX/ XXXXXXXXX36.3试样制备精密称取茄形瓶中亚麻籽油脂200 mg于50 mL容量瓶中，加30 mL碱性甲醇（4.10）摇匀，密封后在60恒温水浴震荡器（5.8）中震荡30分钟。取出冷却至室温，加三滴酚酞指示剂（4.9），用盐酸水溶液（4.11）调至中性，即刚好变色，如调过可用碱性甲醇（4.10）调回，之后用甲醇（4.2）定容至刻度备用。准确吸取1.00 mL 上述备用的甲醇溶液于10 mL容量瓶中，用甲醇（4.2）定容至刻度。用一次性注射器(5.9)从10 mL容量瓶中取适量溶液过膜（5.10）后装入进样瓶，待测。6.4测定6.4.1色谱条件色 谱 柱：C18，250 mm4.6 mm，5m柱 温：35 流 动 相：甲醇 + 磷酸水溶液（4.12） = 95 + 5流 速：1.0 mL /min进 样 量：10 L检测波长：205 nm6.4.2色谱分析取-亚麻酸标准工作液（4.14）与制备好的待测液（6.3），分别注入高效液相色谱仪（5.13）进行测定，根据保留时间定性，外标法峰面积定量。7结果计算样品中-亚麻酸的含量按式（1）进行计算。.(1)10322mVCX式中：X样品中-亚麻酸的含量，单位为克每百克（g/100g）C样液中-亚麻酸的检出浓度，由液相色谱外标定量得到，单位为微克每毫升（g/mL）m称取研磨好的亚麻籽重量，单位克（g）m1茄形瓶干重，单位克（g）m2经6.2提取后茄形瓶与亚麻籽油脂的总重，单位克（g）m36.3中称取亚麻籽油脂的重量，单位毫克（mg）V1调至中性的定容体积，单位毫升（mL）V2调至中性定容后从中吸取样液的体积，单位毫升（mL）V3吸取样液后定容体积，单位毫