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文档简介
专题2微生物的利用 知识梳理 一 微生物的实验室培养1 培养基 1 概念 人们按照微生物对 的不同需求 配制出供其 的营养基质 2 成分 3 分类 按照物理性质可以分为 和固体培养基 一般都含有水 和无机盐 还要满足微生物生长对ph 以及氧气的要求 营养物质 生长繁殖 碳源 氮源 特殊营养物质 液体培养基 2 无菌技术 1 含义 培养微生物的操作中 所有 的方法 2 关键 防止外来杂菌的污染 3 请将无菌技术的方法 类型和对象进行连线 防止杂菌污染 3 大肠杆菌的纯化培养 1 制备牛肉膏蛋白胨固体培养基 最常用的细菌培养基 牛肉膏蛋白胨培养基 配制步骤 计算 溶化 倒平板 2 纯化大肠杆菌 方法 平板划线法和 关键 接种 原理 在培养基上得到由 的肉眼可见的菌落 即可获得纯种 3 菌种的保存 对于 的菌种 临时低温保藏对于需要长期保存的菌种 稀释涂布平板法 一个细胞繁殖而来 频繁使用 甘油管藏 二 分解纤维素的微生物的分离1 实验原理 2 实验流程 纤维素 选择培养 纤维 素分解菌 涂布平板 透 明圈 盲点判断 1 2012 新课标全国卷t5b 常用液体培养基分离获得细菌单菌落 2 2012 北京高考t5c 将转基因植物的叶片接种到无菌培养基上 应该进行严格的无菌操作 3 2012 北京高考t5d 将土壤浸出液涂布在无菌的选择培养基上接种时 未进行严格的无菌操作影响较小 4 筛选分解尿素的细菌应以尿素作为培养基中的唯一碳源 5 筛选分解纤维素的微生物的培养基中是以纤维素为唯一碳源的选择培养基 6 2013 重庆高考t5a 消毒的原则是既杀死材料表面的微生物 又减少消毒剂对细胞的伤害 7 在富含纤维素的培养基中加入刚果红染色剂 若出现周围存在透明圈的菌落 则说明筛选到了分解纤维素的微生物 盲点判断点拨 1 在液体培养基中不能形成单个 稳定形态的菌落 常用液体培养基培养细菌获得代谢产物 用固体培养基获得单菌落 2 转基因植物叶片接种过程必须执行无菌操作 若培养过程中有杂菌污染 会导致培养的幼苗生长缓慢甚至培育失败 3 土壤浸出液中本来就存在多种微生物 接种后在选择培养基的作用下 所有杂菌包括浸出液中原有的和操作过程中掺入的杂菌 都会被抑制生长 4 筛选分解尿素的细菌应以尿素作为培养基的唯一氮源 而非唯一碳源 5 筛选分解纤维素的微生物的培养基是刚果红鉴别培养基 该培养基并不能阻止或抑制微生物的生长 但可以通过刚果红的显色反应 将能够分解纤维素的微生物筛选出来 6 选择无菌技术方法原则是既要考虑效果 又要考虑被操作对象的承受能力 7 刚果红染色剂能与纤维素结合发生颜色反应 形成红色复合物 分解纤维素的细菌产生纤维素酶分解纤维素 在分解纤维素的细菌的周围出现透明圈 网络概览 考点一培养基成分及种类1 培养基的成分 2 培养基的种类 1 按物理状态分类 2 按功能分类 高考警示 1 并不是所有培养基的营养成分都相同 自养微生物能够利用空气中的co2合成有机物 培养基中不需加入有机碳源 可加入无机碳源 固氮微生物能够固定空气中的n2 合成氨态氮 培养基中不需添加氮源 2 培养基中的不同营养成分不一定是不同物质提供 培养基中不同的营养成分可以由同一物质提供 有些物质 如nh4hco3 既是氮源也是某些自养生物的碳源 通关题组 1 培养基的种类和功能 2014 马鞍山模拟 下表为某培养基的配方 下列叙述正确的是 a 从物理性质看该培养基属于液体培养基 从用途看该培养基属于选择培养基b 该培养基中属于碳源的物质主要是葡萄糖 属于氮源的物质是蛋白胨c 该培养基缺少提供生长因子的物质d 该培养基调节合适的ph后就可以接种使用 解题指南 解答本题的切入点 1 明确表格中各种物质的组成特点及功能 2 掌握伊红 美蓝所起作用 解析 选b 分析表中成分可知 该培养基中没有凝固剂 为液体培养基 该培养基的营养成分齐全 但存在伊红 美蓝等鉴别物质 属于鉴别培养基 a项错误 该培养基中的蛋白胨既是唯一的氮源 也是碳源 而葡萄糖是绝大多数生物最常利用的碳源 b项正确 该培养基中存在的无机盐和蛋白胨中的某些物质可以看作是生长因子 c项错误 培养基调节完ph还要进行灭菌等操作后 才能使用 d项错误 互动探究 1 蛋白胨能够为微生物的生长提供哪些营养成分 提示 蛋白胨可以为微生物的生长提供碳源 氮源 维生素等营养成分 2 蛋白胨在不同培养基中起的主要作用是否相同 为什么 提示 不相同 在不同的培养基中 由于与其他成分的相对含量不同 导致其所主要提供的营养成分不同 2 培养基的成分及培养条件 2014 连云港模拟 在农田土壤的表层自生固氮菌较多 用表层土制成的稀泥浆接种到特制的培养基上培养 可将自生固氮菌与其他细菌分开 对培养基的要求是 加抗生素 不加抗生素 加氮素 不加氮素 加葡萄糖 不加葡萄糖 37 恒温箱中培养 28 30 温度下培养a b c d 解题指南 解答本题需明确 1 抗生素的作用是杀死细菌 包括自生固氮菌 2 自生固氮菌能够固氮 但不属于自养生物 解析 选c 细菌对抗生素敏感 故培养基中应不加抗生素 自生固氮菌有固氮功能 故培养基中不需要加氮素 自生固氮菌是异养的 故培养基中应该加葡萄糖 其生长繁殖的适宜温度是28 30 解题金手指 根据培养基变化筛选微生物 1 在培养基中加入某种化学物质 例如 加入青霉素可以分离出酵母菌和霉菌 加入高浓度的食盐可以得到金黄色葡萄球菌 2 改变培养基的营养成分 例如 缺乏氮源时可以分离出固氮微生物 石油作为唯一碳源时 可以分离出能分解石油的微生物 3 改变微生物的培养条件 例如 将培养基放在高温环境下培养 可以得到耐高温的微生物 加固训练 2014 黄山模拟 现有两种固体培养基 已知其配制时所加的成分和含量如下表 用这两种培养基分别去分离土壤中的两种微生物 你认为它们适于分离 a 甲培养基适于分离自养型自生固氮菌 乙培养基适于分离异养型自生固氮菌b 甲培养基适于分离异养型自生固氮菌 乙培养基适于分离自养型自生固氮菌c 甲培养基适于分离酵母菌 乙培养基适于分离真菌d 甲培养基适于分离自养型共生细菌 乙培养基适于分离异养型共生固氮菌 解析 选b 固氮菌中能独立生存的是自生固氮菌 甲培养基中含有的葡萄糖和淀粉是有机物 则该培养基适于分离异养型的自生固氮菌 乙培养基中不含有机碳源 故可用来分离自养型的自生固氮菌 考点二微生物的纯化培养技术1 原理 在培养基上将细菌稀释或分散成单个细胞 使其长成单个的菌落 这个菌落就是纯化的细菌菌落 2 微生物的接种方法 1 平板划线法 接种环的灼烧 a 第一次划线前 杀死接种环上的微生物 避免污染培养物 b 每次划线前 杀死残留菌种 保证每次划线菌种来自上次划线末端 c 划线结束后 杀死残留菌种 避免污染环境和感染操作者 灼烧接种环之后 要冷却后再进行操作 以免温度太高杀死菌种 划线时最后一区域不要与第一区域相连 划线用力要大小适当 不能用力过大将培养基划破 2 稀释涂布平板法 稀释操作时 每支试管及其中的9ml水 移液管等均需灭菌 操作时 试管口和移液管应在离火焰1 2cm处 涂布平板时 a 涂布器用体积分数为70 的酒精消毒 取出时 让多余酒精在烧杯中滴尽 然后将沾有少量酒精的涂布器在酒精灯火焰上引燃 b 不要将过热的涂布器放在盛有酒精的烧杯中 以免引燃其中的酒精 c 酒精灯与培养皿距离要合适 移液管管头不要接触任何物体 通关题组 1 微生物的接种方法 2014 马鞍山模拟 下列在微生物的实验室培养过程中 关于平板划线操作的叙述正确的是 a 使用已灭菌的接种环 培养皿 操作过程中不再灭菌b 打开含菌种的试管需要通过火焰灭菌 取出菌种后需马上塞好棉塞c 将沾有菌种的接种环迅速伸入平板内 划三至五条平行线即可d 最后应将平板倒置 放入培养箱中培养 解题指南 解答本题的突破口 1 明确平板划线法的操作过程 2 明确消毒 灭菌的对象 解析 选d 使用已灭菌的接种环 培养皿 操作过程仍要灭菌 打开含菌种的试管需要通过火焰灭菌 取出菌种后含菌种的试管需要通过火焰灭菌后再塞好棉塞 将沾有菌种的接种环迅速伸入平板内 划三至五条平行线后盖上皿盖 最后应将平板倒置 放入培养箱中培养 2 无菌技术与接种方法 2014 南京模拟 从自然菌样中筛选较理想生产菌种的一般步骤是 采集菌样 选择培养 纯种分离 性能测定 1 不同微生物的生存环境不同 获得理想微生物的第一步是从适合的环境采集菌样 然后再按一定的方法分离 纯化 培养嗜盐菌的菌样应从环境采集 2 选择培养指创设仅适合待分离微生物旺盛生长的特定环境条件 使其在群落中的数量大大增加 从而分离出所需微生物的培养方法 对产耐高温淀粉酶微生物的选择培养应选择 的培养基 并在条件下培养 3 下面两组图是采用纯化微生物培养的两种接种方法接种后培养的效果图解 请分析接种的具体方法 获得图a效果的接种方法是 获得图b效果的接种方法是 4 配制培养基时各种成分在溶化后分装前必须进行 接种前要进行 在整个微生物的分离和培养中 一定要注意在条件下进行 解题指南 解题关键 1 明确选择培养的含义及相应的措施 2 掌握两种接种方法在实验结果上的异同 解析 1 嗜盐菌的菌样应从高盐环境中采集 2 微生物产生淀粉酶 说明其碳源是淀粉 应选择以淀粉为唯一碳源的培养基 并在高温条件下培养 3 图a菌落分布较均匀 接种方法是稀释涂布平板法 图b菌落集中呈线状 接种方法是平板划线法 4 配制培养基时 各种成分在溶化后分装前 必须调整ph 接种前要进行高压蒸汽灭菌 实验中要注意在无菌条件下进行 答案 1 海滩等高盐 2 以淀粉为唯一碳源高温 3 稀释涂布平板法平板划线法 4 调整ph高压蒸汽灭菌无菌 资源平台 消毒与灭菌 思维拓展 根据灭菌原理判断灭菌方法的适用范围 1 灼烧灭菌是通过火焰灼烧物体表面达到灭菌目的 适用于 干燥物品的局部灭菌 2 干热灭菌是通过干热灭菌箱的操作达到灭菌目的 适用于 干燥物品的整体灭菌 3 高压蒸汽灭菌是通过高压蒸汽灭菌锅的操作达到灭菌目的 主要适用于 潮湿物品的整体灭菌 典例 2014 镇江模拟 细菌培养过程中分别采用了高压蒸汽灭菌 酒精 火焰灼烧等几种不同的处理 这些方法依次用于杀灭哪些部位的杂菌 a 接种环 手 培养基b 高压锅 手 接种环c 培养基 手 接种环d 接种环 手 高压锅 解析 选c 接种环适用灼烧灭菌 培养基适用高压蒸汽灭菌 手适用酒精消毒 c项正确 a d项错误 高压锅在高压蒸汽灭菌的过程中其内部杂菌也会被消灭 也属于高压蒸汽灭菌方法灭菌的结果之一 但这不是采用此方法进行灭菌的本来目的 故不选b项 1 2014 滁州模拟 三个培养皿中分别加入10ml不同的培养基 然后接种相同的大肠杆菌样液 培养36h后 统计菌落数 结果如下表 下列选项正确的是 a 该实验采用的是液体培养基b 该实验所用的培养基属于选择培养基c 和 对照 说明大肠杆菌的生长不需要生长因子d 和 对照 说明大肠杆菌的生长需要葡萄糖 解析 选d 该培养基加入了琼脂 故为固体培养基 a项错误 该培养基中没有加入可以对微生物的生长起到选择作用的特定物质 b项错误 与 对照 说明大肠杆菌生长需要葡萄糖 但不能证明是否需要生长因子 c项错误 和 对照 自变量是有无葡萄糖 说明大肠杆菌的生长需要碳源 如葡萄糖 d项正确 2 2014 安庆模拟 下列有关细菌培养的叙述 正确的是 a 在琼脂固体培养基上长出的单个菌落含有多种细菌b 在培养基中加入青霉素可抑制真菌而促进细菌生长c 向液体培养基中通入氧气能促进破伤风杆菌的生长d 在半固体培养基中接种细菌培养后可以观察其运动 解析 选d 单个菌落中只含有一种细菌 青霉素能抑制细菌生长 而对真菌没有影响 破伤风杆菌是厌氧型细菌 通入氧气会抑制其生长 3 2013 江苏高考 某研究小组从有机废水中分离微生物用于废水处理 下列叙述正确的是 a 培养基分装到培养皿后进行灭菌b 转换划线角度后需灼烧接种环再进行划线c 接种后的培养皿须放在光照培养箱中培养d 培养过程中每隔一周观察一次 解题指南 解答本题 需要注意以下两点 1 明确处理有机废水的微生物类型是异养型 不需要进行光照 2 明确培养皿是在倒平板的时候使用 解析 选b 本题考查微生物的分离和培养 a项中 培养基分装到培养皿前进行灭菌 故错误 b项中 从前一区域划线的末端开始往后一区域内划线之前 需要灼烧接种环 故正确 c项中 有机废水中的微生物只能利用现成的有机物 不能进行光合作用 没有必要放在光照培养箱中培养 故错误 d项中 微生物的繁殖速度很快 应培养24h后观察和记录结果 故错误 延伸探究 制备培养基过程中的调ph操作在灭菌之前还是灭菌之后 为什么 提示 溶化之后灭菌之前 要进行调ph操作 目的是防止灭菌后再调ph时对培养基造成污染 4 2014 宣城模拟 某学者欲研究被石油污染过的土壤中的细菌数量 并从中筛选出能分解石油的细菌 下列操作错误的是 a 利用平板划线法对细菌进行计数b 用以石油为唯一碳源的培养基筛选c 采用稀释涂布平板法分离菌种d 称取和稀释土壤样品时应在火焰旁 解析 选a 分离细菌常用的方法是平板划线法和稀释涂布平板法 但平板划线法不能对细菌进行计数 筛选能分解石油的细菌 要以石油作为培养基中唯一的碳源 筛选细菌的整个操作过程都需要在无菌条件下进行 所以应在火焰旁进行 5 2014 淮南模拟 平板划线法和稀释涂布平板法是接种微生物的两种常用方法 下列描述正确的是 a 都要将菌液进行一系列的梯度稀释b 平板划线法是将不同稀释度的菌液通过接种环在固体培养基表面连续划线的操作c 稀释涂布平板法是将不同稀释度的菌液倒入液体培养基进行培养d 都会在培养基表面形成单个的菌落 解析 选d 平板划线法不需要进行梯度稀释 稀释涂布平板法需要将不同稀释度的菌液涂布到固体培养基的表面 平板划线法和稀释涂布平板法都能在培养基表面形成单个的菌落 易错提醒 能形成单个菌落 形成的必须都是单个菌落 1 平板划线法最后所划的线段上会出现单个细菌长成的菌落 2 稀释涂布平板法的某一合适稀释度下涂布的平板上会出现单个细菌长成的菌落 3 无论是平板划线法还是稀释涂布平板法都会形成许多多个细菌堆叠在一起长成的菌落 加固训练 2013 新课标全国卷 临床使用抗生素前 有时需要做细菌耐药实验 实验时 首先要从病人身上获取少量样本 然后按照一定的实验步骤操作 以确定某致病菌对不同抗生素的敏感性 回答下列问题 1 为了从样本中获取致病菌单菌落 可用 法
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