光合细菌的懒汉培养方法.doc

. . . .光合细菌太阳光照培养方法一；操作方法 我中心生产的“光合细菌发生剂”每公斤可制作100公斤的光合细菌液体产品，即生产的第一步是把光合细菌发生剂配成1%浓度的水溶液。成品一般可达30-100亿/克的浓度。 生产方法： 用塑料袋装入25公斤清洁淡水。 取“光合细菌发生剂”250克，溶解入水中。 选择颜色鲜紫红色，浓度在30亿/毫升以上的光合细菌成品为菌种，取5公斤加入到上述培养液中，即菌种：培养液比例=2：10。也即20%的接种量，用太阳作为光源，则只要将桶放于太阳下即可。每天搅拌（摇动）12次，使之受光均匀。夏天要在五份荫的太阳底下如树荫下，冬天可直接放到太阳底下，也可不用管它，过一些日子就长成深红色了。当然最好能每天摇晃两次，可以显著加快生长。 在光照的同时，应保持培养液的最佳温度，才能缩短培养时间，取得高产。PSB（光合细菌）生长和繁殖的最佳温度为2836度，夏季我国大部分地区自然温度都可达到这个最适温度，不必采取任何措施增温，倒是要注意降温。而在冬、春、秋三季，自然温度较低，达不到最适温度，必须采取一定的增温措施，例如在阳光下搭建透明塑料膜温棚就是一个好办法，它即采光又增温，同时又节约能源成本。冬季温度过低，则应加温到最适温度。夏季气温过高，若用太阳作为光照能源，则应采取部分遮阳（用黑色的遮阳塑料网），通风的降温措施，以防光合细菌快速老化死亡。 总结起来，即是：先配成1%的培养基浓度，再加入20%的菌种，装入25公斤的无色或白色大塑料桶中（塑料袋更好），放到太阳底下晒即可，只要注意一下，夏天要遮荫，冬天直接晒或搭保温棚，春秋直接晒即可。放到太阳底下不用管也可，过些日子自然长成深红色。 一公斤光合细菌发生剂28元，生产出100-200公斤光合细菌液体，生产成本只要0.3元/公斤。 经我中心观察：我中心的菌种即使是在20度的温度下，也能在太阳下，在数天内长成熟。 宜春高新技术专利产品开发中心供免费的光合细菌原种培养方式有以下三种：（1）做小试验培养的方法（1） 容器为：1.25升的饮料瓶，即小规模生产方法，由于饮料瓶的量小，瓶子透明度好，又密封，所以培养环境好，需要的接种量也少， 比较简单。 设备为：光照箱，用一个大的纸箱，放一个40瓦的白炽灯悬挂在箱子的空中（注意防火），纸箱内壁四周，堆放着已装好了培养液并 接了种的饮料瓶，这样，既达到了保温到2540度的效果，又达到了光照的效果。较大的箱子要用60瓦的白炽灯，一般一个箱子，可 放这种饮料瓶8个以上，即一次可生产约10公斤/箱。 灯泡与瓶子的距离不超过20厘米。夏天，可撤去纸箱，以防温度过高，春秋秋 天，也要在纸箱四周钻孔以散热。 操作规程如下： 配料：培养液为1%浓度的发生剂溶液，接种量为20%，注意水源必须一干净卫生，最好用地下水，自来水可以试用一下，第一次做试验时，要多选择几种水源同时做，以确定哪种水源最好，最先转成红色的水源最好，可确定为今后的生产用水。 培养：在箱子内，打开白炽灯，照几天即可，一般可达到温度在35度，控制在30-40度之内，所以要密切注意温度不要过高，第一次培养可能需要5天以上，一定要注意，每天要摇晃两次，这很重要，菌种适应了贵地的水源后，一般只需要2天即可长成深红色。 培养成熟标准：以培养液长成深红色为准，这时一般成品的光合细菌浓度可达到30-100亿/毫升。（2）用塑料桶进行大规模生产 或用培养虾苗用的塑料袋来做效果更好。一袋20公斤的样子。 例如容器选用25公斤装的大塑料桶，由于条件不如做小试验的培养方法好，所以接种量要达到至少20%以上的量。即往大塑料桶中加入22.5公斤的配制好的培养液（即1%的培养基溶液），再加入2.5公斤的菌种液，摇匀。利用太阳能培养：把上述塑料桶放到太阳底下晒即可，只要注意：夏季气温过高，若用太阳作为光照能源，则应采取部分遮阳（用黑色的遮阳塑料网），通风的降温措施，以防光合细菌快速老化死亡；冬天则气温低，则要采取搭建一个塑料暖棚增温的方法，把塑料桶放入暖棚内晒太阳即可；春秋季则可直接放在太阳底下不用管即可。总之要使之温度在25度-36度之间最好。过些日子它自然会长成深红色的成品。经方法即是懒汉培养工艺法，具体内容可参见：懒汉培养法工艺 利用白炽灯作为光能生产：在一个容器内悬挂一个白炽灯，容器内装的培养液深度不得大于30公分，灯泡与液面距离不得大于20公分。 以上两种方式的图例见后面的附图：（3）用塑料膜做的池子来大规模生产 您还可以这样利用太阳能大规模培养（以培养2吨菌液为例）：选择阳光充足的地方，开挖一土池（长5米、宽1.8米、深0.4米），有现成的水泥池更好。垫上塑料薄膜，然后再铺上桶状塑料薄膜，并将其一端密封，从另一端加入1.8吨配制好的培养液，和0.2吨的菌种，一共2吨，排尽薄膜中空气后，再将该端密封。保持适当的温度，冬天如果温度过低，搭建透明塑料薄膜棚增温（见图中最右面的样子）。这样，几天后，菌液培养成熟。长成深红色。具体见后面的附图： 也可以在室外挖一个土坑，深40厘米，垫上一层塑料薄膜，再倒入培养液，液面上再盖一层塑料薄膜，以免与大量空气接触，造成污染杂菌，再用太阳照射培养成熟，天气冷就搭塑料棚升温。 当然这一套装置也可放于室内，用每半平方料一个60瓦白炽灯照射，灯与液面距离小于25厘米，温度不够，也要搭一个室内塑料棚，棚内放一炉火即可保温到30度以上。 四、光合细菌固态产品的生产 将高浓度PSB菌液用蛭石粉或沸石粉吸附后，阴干或风干粉碎即得粉状固体PSB产品。可包装出厂，便于运输和售卖。也更象一个产品了。一般售价可达到2元/公斤以上，光合细菌沸石粉=134。也可用其它载体来做干燥吸附剂，如草炭、硅藻土等。三、光合细菌菌种的简易提纯方法 1、选择性培养基光合细菌适宜PH值在8.0左右，在9-10的高碱度情况下仍能生长，而一般杂菌适宜的PH值在7.2-7.6左右。若把菌液的PH值调节至9.0，杂菌难以耐受甚至死亡，而光合细菌则可以承受并能生长。这样可筛除一部分杂菌。比如：我们将菌种和培养液按1：1配好后，缓缓加入生石灰水，并进行搅拌，直至其PH值为9为止，这样便可以去除多数的杂菌。2、选择优质菌种细菌的生长繁殖一般按倍数的规律增长。假设菌种内的杂菌含量较高，培养几次后，它们在菌液中的比例不会减小，有些杂菌的生长速度较光合细菌快，比例可能还会增大。老化的光合细菌活性较差，菌液内的有害代谢物质较多。因此，菌种应选用浓度高、活性强、杂菌少鲜紫红色的菌液。3、增大接种量大规模生产过程中，由于水源、容器及空气中的杂菌是不可排除的，因而应加大接种量使光合细菌占绝对优势,这样才能培养出高质量的菌液。光合细菌含量高了,还能释放抑菌酵素，抑制一些杂菌的生长。究竟多少接种量为好呢？实践证明，正常的接种量应不低于1：5，即菌种1份(30亿级)，培养液5份；提纯菌种时，培养液调PH值后,其接种量应不低于1：1,即菌种和培养液各一份。加大接种量，可以缩短培养周期，且菌液质量好，缺点是保种量多。4、好氧培养将菌液用增氧机砂头充氧曝气，培养两天，可有效的抑制一些厌氧菌的生长。5、厌氧培养将菌液装入透明密封容器内进行培养，可有效抑制一些好氧菌的生长。以上几种方法的综合运用，可将光合菌菌液适当提纯，反复接种，从而使不具备专业知识的用户自已也可以生产出优质菌液。 四、光合细菌的试验推广与效益 1、做小试验 按照培育方法先生产少量光合菌，您可先做小规模的生产试验和应用试验。找一个污染严重的池塘，最好找一个小池塘，面积在0.3亩以内，一次撒下一瓶半左右(约1.5公斤)，在有太阳时撒最好，3小时可见效，水质转清，一天后不再有大量的缺氧死鱼，直至没有死鱼。见效神速，又明显。在鱼种育苗时，用光合细菌液稀释10倍，放入鱼苗游15分钟，可提高成活率一倍以上。 2、示范推广方法 当你通过试验，验证了光合细菌的神奇效果后，除自己使用外，便可以培育来向周围的水产养殖户进行推广。刚开始时最好选择较为熟悉的养殖户，向其宣传光合细菌的神奇效果，若其感兴趣，便可以赠送部分让其在较小的池塘进行试用，当其试用出现明显效果后，便可以点代面进行广泛的宣传推广了。 3、效益估计 一个农业县一般拥有鱼塘一万亩以上，由于光合细菌的效果显著而神奇，看得见摸得着，因而能占有较大的市场分额。 一般每亩用量总共为40公斤左右，（一次用5公斤，每半个月一次，在4个月的养殖旺季中，一共用8次左右），每公斤的生产成本为0.30元，售价可为2元/公斤，所以每亩的利润有60元左右，占领20%的市场，只要达到2000亩，年利有12万元左右。 五、光合细菌培养基的使用 1、培养液的配制 将购得的我们的光合细菌培养基取440克（包装中有一大一小两包，使用时要先将两包中的原料各相同比例配合才能使用，相同比例不是指重量比，而是指份量比，如把大小两包各分成10份，若小量培育只用两包总重量的10%，使用时把大小各取一份即可，每份取10%，依次计算即可），放入一个干净的容器中，加入100公斤水，搅拌均匀，直到培养基溶化为止。若容器不够大，则可以少配一点。（第一次由于光合细菌的菌种数量较少，要求先接种培养成功后才扩大生产，具体方法见下面说明）。 注意事项：水源一定要选择好，含菌量较低的清洁淡水。从经济、实用的角度考虑，地下水（井水）含菌量低，为最佳水源；清洁的地表水也可使用；含氯量较高的自来水应敞口放置两三天或调PH值至偏碱后使用；蒸馏水及纯净水固然很好，但成本太高，可用于提纯菌种。 2、培养方式有以下三种： （1）做小试验培养的方法 容器为：透明的饮料瓶，即小规模生产方法，由于饮料瓶的量小，瓶子透明度好，又密封，所以培养环境好，需要的接种量也少，比较简单。 设备为：光照箱，用一个大的纸箱，放一个40瓦白炽灯悬挂在箱子的空中（注意防火），纸箱内壁四周，堆放着已装好了培养液并接了种的饮料瓶，这样，既达到了保温到2540的效果，又达到了光照的效果。较大的箱子要用60瓦的白炽灯，一般一个箱子，可放这种饮料瓶8个以上，即一次可生约10公斤/箱。灯泡与瓶子的距离不超过20厘米。夏天，可撤去纸箱，以防温度过高，春秋季节，可在纸箱四周钻孔以散热。 操作规程如下： 配料：培养液为0.44%浓度培养基溶液，接种量为10_20%(即瓶子中加入1000毫升水、4.4克培培养基和100200毫升光合菌种)。第一次培养可能需要5天以上，菌种适应了你地的水源后，一般只需要23天即可长成深红色。如果接种量低于10%，则培育时间将会延长。 培养成熟标准：以培养液长成深红色为准，这时一般成品的光合菌浓度可达30亿/毫升以上。 （2）用塑料桶进行大规模生产 例如容器选用25公斤装的大塑料桶，培养液为0.44%浓度培养基溶液，接种量为10_20%，摇匀。 利用太阳能培养：这是最简单也是最有效常用的方法，把上述塑料桶放到太阳底下晒即可，只要注意：夏季气温过高，则应采取部分遮阳（用黑色塑料网），通风的降温措施，培养液的水温要在45以下，最佳温度为3038。温度过高会使光合细菌快速老化死亡；冬天则气温低，不管即可，培育时间会延长，一般会在6-15天它自然会长成深红色的成品。晚上不用另外增光。 利用白炽灯作为光能生产：容器内悬挂一个白炽灯，容器内装的培养液深度不得大于30公分，灯泡与液面距离不得大于20公分。也可以在容器外挂一个60以上的白炽灯，并做一个象台灯一样的灯罩，让光全部照射培育养桶，24小时不间断地增光。光合细菌培养基配方1、细菌培养基配方一 牛肉膏琼脂培养基牛肉膏0.3克 ，蛋白胨1.0克，氯化钠 0.5克，琼脂 1.5克，水 1000毫升在烧杯内加水100毫升，放入牛肉膏、蛋白胨和氯化钠，用蜡笔在烧杯外作上记号后，放在火上加热。待烧杯内各组分溶解后，加入琼脂，不断搅拌以免粘底。等琼脂完全溶解后补足失水，用10%盐酸或10%的氢氧化钠调整pH值到7.27.6,分装在各个试管里，加棉花塞，用高压蒸汽灭菌30分钟。配方二 马铃薯培养基取新鲜牛心（除去脂肪和血管）250克，用刀细细剁成肉末后，加入500毫升蒸馏水和5克蛋白胨。在烧杯上做好记号，煮沸，转用文火炖2小时。过滤，滤出的肉末干燥处理，滤液pH值调到7.5左右。每支试管内加入10毫升肉汤和少量碎末状的干牛心，灭菌，备用。配方四 根瘤菌培养基葡萄糖 10克 磷酸氢二钾 0.5克碳酸钙 3克 硫酸镁 0.2克酵母粉 0.4克 琼脂 20克水 1000毫升 1%结晶紫溶液 1毫升先把琼脂加水煮沸溶解，然后分别加入其他组分，搅拌使溶解后，分装，灭菌，备用。2、放线菌培养基配方一 淀粉琼脂培养基（高氏培养基）可溶性淀粉 2克 硝酸钾 0.1克磷酸氢二钾 0.05克 氯化钠 0.05克硫酸镁 0.05克 硫酸亚铁 0.001克琼脂 2克 水 1000毫升先把淀粉放在烧杯里，用5毫升水调成糊状后，倒入95毫升水，搅匀后加入其他药品，使它溶解。在烧杯外做好记号，加热到煮沸时加入琼脂，不停搅拌，待琼脂完全溶解后，补足失水。调整pH值到7.27.4，分装后灭菌，备用。配方二 面粉琼脂培养基面粉 60克 琼脂 20克水 1000毫升把面粉用水调成糊状，加水到500毫升，放在文火上煮30分钟。另取500毫升水，放入琼脂，加热煮沸到溶解后，把两液调匀，补充水分，调整pH值到7.4，分装，灭菌，备用。3、真菌培养基配方一 萨市（Sabourauds）培养基蛋白胨 10克 琼脂 20克麦芽糖 40克 水 1000毫升先把蛋白胨、琼脂加水后，加热，不断搅拌，待琼脂溶解后，加入40克麦芽糖（或葡萄糖），搅拌，使它溶解，然后分装，灭菌，备用。本培养菌是培养许多种类真菌所常用的。配方二 马铃薯糖琼脂培养基把马铃薯洗净去皮，取200克切成小块，加水1000毫升，煮沸半小时后，补足水分。在滤液中加入10克琼脂，煮沸溶解后加糖20克（用于培养霉菌的加入蔗糖，用于培养酵母菌的加入葡萄糖），补足水分，分装，灭菌，备用。把这培养基的pH值调到7.27.4，配方中的糖，如用葡萄糖还可用来培养放线菌和芽孢杆菌。配方三 黄豆芽汁培养基黄豆芽 100克 琼脂 15克葡萄糖 20克 水 1000毫升洗净黄豆芽，加水煮沸30分钟。用纱布过滤，滤液中加入琼脂，加热溶解后放入糖，搅拌使它溶解，补足水分到1000毫升，分装，灭菌，备用。把这培养基的pH值调到7.27.4，可用来培养细菌和放线菌。配方四 豌豆琼脂培养基豌豆 80粒 琼脂 5克水 200毫升取80粒干豌豆加水，煮沸1小时，用纱布过滤后，在滤液中加入琼脂，煮沸到溶解，分装，灭菌，备用。4、食用菌菌种培养基配方一 马铃薯蔗糖-琼脂培养基20%马铃薯煮汁 1000毫升蔗糖 20克 琼脂 18克把马铃薯洗净去皮后，切成小块。称取马铃薯小块200克，加水1000毫升，煮沸20分钟后，过滤。在滤汁中补足水分到1000毫升，即成20%马铃薯煮汁。在马铃薯煮汁中加入琼脂和蔗糖，煮沸，使它溶解后，补足水分，分装，灭菌，备用。使用该培养基对pH值要求不严格，可以不测定。配方二 综合马铃薯培养基20%马铃薯煮汁 1000毫升磷酸二氢钾 3克 硫酸镁 1.5克葡萄糖 20克 维生素 10毫克琼脂 18克先配制20%