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离子交换层析柱和填料 选择指南 ge医疗中国 ge梦想启动未来 一般信息 离子交换层析的原理 离子交换 iex 层析能够分离电荷只有轻微差别的 一分子或组分子 以保证分离是基于带电分子与带 相反电荷的层析填料之间的可逆相互作用 通常情况 下 选择条件被感兴趣的分子随着上样柱上而结合到 层析填料然后改变条件以便使被结合的物质被洗脱 经常通过连续梯度或逐步增加离子强度进行洗脱 最 常使用nacl 图1显示典型的高分辨率梯度洗脱 阶 段洗脱如图3所示 lcan 柱体积 cv 0 1 m 5 cv 不结合的分子在 梯度开始前被洗脱 高盐洗涤 平衡梯度洗脱 样品 上样体积 再平衡洗涤 5 10 cv 5 10 cv 10 20 cv 紧密结合 的分子在 高盐洗涤 中被洗脱 图1 使用梯度洗脱的典型iex分离 蛋白质由含有可以被测定的弱酸和弱碱基团 即电离 基团 因此 蛋白质的净表面电荷是高度依赖的p h 并将随着环境ph变化而逐渐改变 每种蛋白质都 有其针对ph的独特静电荷关系 这可以被视为滴定 曲线 图2 这条曲线反映了蛋白质整体净电荷如 何根据环境的ph变化 可以在不同的ph值下利用iex 以分离具有截然不同电荷性质的多种蛋白 图2显示 如何选择正确的ph 实现令人满意的分最重要参数 之一 离子交换剂的选择 以强交换剂 q s sp 开始 能够在广泛的ph范围进 行开发工作 如果感兴趣蛋白的等电点低于ph 7 0或 未知 则使用强阴交换剂 q 结合蛋白 当在一个极端ph下出现最大分辨率 而且感兴趣的 蛋白质在此ph下稳定时 使用强交换剂 如果强的离子交换剂的选择性不理想 则考虑使用弱 的交换剂 deae anx cm 但请记住弱的离子交换剂 的离子交换能力随着ph而变化 多峰配体 mmc adhere 提供离子相互作用 氢键和 疏水相互作用 mmc表现的如同弱的阳离子交换剂 但可以在高电导率下结合 adhere表现为强阴离子 交换剂 层析柱填料选择 根据纯化步骤的目标和起始材料的条件选择离子交 换填料 其他因素例如样品稳定性 规模 速度 结合能力和提供的设备也可能影响最后的选择 一般信息选择性和缓冲液ph 图2显示ph对选择性的影响 三种假定蛋白在不同ph 下的分离如下所述 在图中阐明四种情景 见编号的 箭头 酸性最强ph 所有三种蛋白都处于它们的等电 点 带正电荷 且只结合阳离子交换剂 蛋白质按 照它们的净电荷顺序被洗脱下来 较小酸性ph 蓝色的蛋白在其等电点以上 带 负电荷 而其他蛋白仍然带正电荷 蓝色蛋白结合阴 离子交换剂 并可以与直接洗涤穿透的其他蛋白分 离 另外 红色和绿色蛋白可以在阳离子交换剂上被 分离 而蓝色蛋白洗涤穿透 碱性最强ph 所有三种蛋白都高于它们的等电 点 带负电荷 且只结合阴离子交换剂 蛋白质按 照它们的净电荷顺序被洗脱 较小碱性ph 红色蛋白低于其等电点 带正电 荷 红色蛋白结合阳离子交换剂 而其他蛋白洗涤 穿透 另外 蓝色和绿色蛋白可以在阴离子交换剂上进行分 离 而红色蛋白洗涤穿透 vvv absabsabsabs v vvvv absabsabsabs ph 0 阳离子 阴离子 13 24 图2 ph对选择性的影响 洗脱模式 表面净电荷 样品制备 为了获得最佳的分离并避免层析柱性能的退化 正确 的样品制备是必要的 样本必须是澄清的 无颗粒物 质 为了去除颗粒物质 过滤 过滤器孔径见缓冲液配制 或离心 10000 g 15分钟 样品 脱盐样品使用 hitrap desalting 5 ml 体积达到1 5 ml 或hiprep 26 10 desalting 体积达到15 ml 转换为所选择的其 实缓冲液 在高盐浓度下不含主要污染的非常小体积 的样品可以用起始缓冲液稀释 以降低盐浓度到不干 扰填料的水平结合 层析柱准备 在使用任何iex填料前洗掉保存溶液和防腐剂 使用预装层析柱以保证最好的性能分离效果和可重复 的结果 所需要的填充床体积是由待纯化样品的量和填料的结 合容量决定 装柱 层析柱将具有超过所需要结合容 量大约5倍的结合容量 柱床高度达到20 cm 缓冲液配制 有关挥发性和非挥发性缓冲系统的建议见表1 缓冲离子应该具有与iex填料上功能基团相同的电荷 pka值在工作ph的0 6 ph内 使用的缓冲液浓度足以维持缓冲能力和恒定的ph 一般为20 50 mm 在所有盐和添加剂被加入后过滤缓冲液 并始终使用 高质量的水和化学试剂 对于颗粒大小 90 m使用 1 m滤膜 对于34 m颗粒使用0 45 m滤膜 或者 对于颗粒大小 15 m 或当需要无菌或需要极其干 净的样品时使用0 22 m滤膜 为了避免气泡产生 确保层析柱和缓冲液在相同温 度下 对于具有未知电荷性质的样品 请尝试下列条件 阴离子交换 q 起始缓冲液 ph 8 0 洗脱缓冲液 含有1 m nacl的起始缓冲液 ph 8 0 阳离子交换 s或sp 起始缓冲液 ph 6 0 洗脱缓冲液 含有1 m nacl的起始缓冲液 ph 6 0 方法开发与优化 按照优先顺序 通过测试一系列ph值寻找最佳ph 在这些ph值中 感兴趣的蛋白质是稳定的 如果目标蛋白的等电点已 知 则以更窄的ph范围开始 例如可以从离等电点 0 5 1 ph单位 如果需要 使用自动化填料搜索程序搜索最佳选 择性 测试强或弱的交换剂 搜索在选定ph下提供合格分辨率的最陡梯度 搜索保持分辨率和尽可能减少分离时间的最高流 速 检查对于待定填料的推荐流速 搜索可以上样同时维持满意的分辨率的最大上样 量 通常 上样20 30 层析柱总结合容量提供采用 梯度洗脱的最佳分辨率 6 对于大规模纯化 通过转变为图3所示的阶段洗脱 可以减少分离时间和缓冲液消耗 5 10 cv 5 10 cv l can 层析柱体积 cv 平衡再平衡 样品 进样体积 不结合 分子洗脱 不要的 物质洗脱 目标 分子洗脱 紧密结合的 分子洗脱 高盐洗涤 0 1 m 图3 使用阶段洗脱的典型iex分离 层析柱清洗 样品和缓冲液的正确制备和每次分离结束时高盐洗 涤的应用应该能够保持大多数层析柱在良好的条件 然而 性能降低 流速变慢 背压增加或完全堵塞 都是填料需要被更严格的条件清洗以去除污染物的 种种表现 建议在层析柱清洗期间逆向流动 以便使污染物不 需要通过整根层析柱 对于每个清洗步骤所需要的 柱体积数和时间根据污染程度而变化 如果去除普 通污染物的清洗程序不能恢复层析柱的性能 则在 尝试另一种清洗方法前先更换顶部过滤器 如果可 能 当更换过滤器时要小心 因为这可能影响柱 装填和干扰性能 注释 有关推荐流速 请参考表格 离子交换产品 常见污染物的去除 下列程序对于去除常见污染物是令人满意的 用至少2个柱体积 cv 的2 m nacl洗涤 用至少4 cv的1 m naoh洗涤 流速与步骤1相同 用至少2 cv的2 m naoh洗涤 流速与步骤1相同 用至少2 cv的蒸馏水冲洗 流速与步骤1相同 直到紫外基线和洗脱ph稳定 用至少4 cv的起始缓冲液或储存缓冲液洗涤 流 速与步骤1相同 直到ph和电导率达到所需要 的值 沉淀蛋白的去除 注入1 cv的胃蛋白酶 1 mg ml 在0 5 m nacl 0 1 m乙酸中 在室温下保持过夜 或在37 保持1 小时 用至少2 cv的蒸馏水冲洗 直到紫外基线和洗脱 ph稳定 用至少4 cv的起始缓冲液或储存缓冲液洗涤 流 速与步骤2相同 直到ph和电导率达到所需要的值 替代程序 用2 cv的6 m盐酸胍洗涤 马上用5 cv ph 7 8的缓冲液洗涤 用至少2 cv的蒸馏水冲洗 流速与步骤2相同 直到紫外基线和洗脱ph稳定 用至少4 cv的起始缓冲液或储存缓冲液洗涤 流 速与步骤2相同 直到ph和电导率达到所需要的值 脂类 疏水结合蛋白或脂蛋白的去除 可能需要有机溶剂或去垢剂以完全去除这一类型污 染物 在使用有机溶剂前 用至少4 cv的蒸馏水洗涤以避 免任何盐沉淀在层析柱上 当加入有机溶剂或溶液时 可能有必要减少流速以 避免层析柱压力过高 使用清洗溶液如高达100 的异丙醇 100 的甲醇 100 的乙腈 2 m naoh 75 的乙酸 100 的乙 醇 离子或非离子型去垢剂 请务必检查说明书中提 供的溶剂与填料或层析柱的兼容性 避免阴离子去垢剂与q deae和anx带电基团一起 使用 避免阳离子去垢剂与s sp和cm带电基团一 起使用 清洗程序 方案1 用4 cv达到70 的乙醇或30 的异丙醇洗涤 用至少2 cv的蒸馏水冲洗 直到紫外基线和洗 脱ph稳定 立即用3 cv的起始缓冲液洗涤 流速与步骤2相 同 清洗程序 方案2 用2 cv含有去垢剂的碱或酸溶液洗涤 例如含有 0 1 0 5 非离子型去垢剂的0 1 m乙酸 用5 cv 70 乙醇冲洗以去除残留的去垢剂 用至少2 cv的蒸馏水冲洗 流速与步骤1相同 直到紫外基线和洗脱ph稳定 用3 cv的起始缓冲液洗涤 流速与步骤1相同 技术信息 表1 非挥发性和挥发性缓冲系统 用于阴离子交换层析的缓冲液 ph间隔 4 3 5 3 4 8 5 8 5 5 6 5 6 0 7 0 6 2 7 2 8 6 9 6 7 3 8 3 7 6 8 6 8 0 9 0 8 0 9 0 8 4 9 4 8 4 9 4 9 0 10 0 9 2 10 2 10 0 11 0 10 6 11 6 物质 n 甲基哌嗪 哌嗪 l 组氨酸 bis tris bis tris丙烷 bis tris丙烷 三羟乙基胺 tris n 甲基二乙醇胺 n 甲基二乙醇胺 二乙醇胺 丙烷1 3二氨基 乙醇胺 哌嗪 丙烷1 3二氨基 哌嗪 浓度 mm 20 20 20 20 20 20 20 20 20 50 ph 8 4时为20 ph 8 8时为50 20 20 20 20 20 反离子 cl cl 或hcoo cl cl cl cl cl 或hcoo cl so4 2 cl 或ch3coo cl cl cl cl cl cl pka 25 c 1 4 75 5 33 6 04 6 48 6 65 9 10 7 76 8 07 8 52 8 52 8 88 8 88 9 50 9 73 10 55 11 12 1 参考文献 crc化学与物理手册第83版 2002 2003年 用于阳离子交换层析的缓冲液 ph间隔 1 4 2 4 2 6 3 6 2 6 3 6 3 3 4 3 3 3 4 3 3 7 4 7 5 1 6 1 4 3 5 3 5 2 6 2 5 6 6 5 6 7 7 7 7 0 8 0 7 8 8 8 物质 马来酸 甲基马来酸 柠檬酸 乳酸 甲酸 琥珀酸 琥珀酸 乙酸 甲基马来酸 mes 磷酸盐 hepes bicine 浓度 mm 20 20 20 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 反离子 na na 或li na na na 或li na na na 或li na 或li na 或li na na 或li na pka 25 c 1 1 92 3 07 3 13 3 86 3 75 4 21 5 64 4 75 5 76 6 27 7 20 7 56 8 33 1 参考文献 crc化学与物理手册第83版 2002 2003年 挥发性缓冲系统 ph间隔 3 3 4 3 3 3 4 3 4 8 5 8 3 3 4 3 9 3 10 3 4 3 5 8 4 3 5 3 9 3 10 3 3 3 4 3 8 8 9 8 4 3 5 3 8 8 9 8 5 9 6 9 9 3 10 3 5 9 6 9 8 8 9 8 5 9 6 9 8 8 9 8 5 9 6 9 8 8 9 8 4 3 5 3 7 2 8 2 缓冲系统 甲酸 嘧啶 甲酸 三甲胺 甲酸 嘧啶 乙酸 三甲胺 乙酸 氨水 甲酸 氨水 乙酸 三甲胺 碳酸盐 碳酸氢铵 碳酸铵 氨水 碳酸铵 n 乙基吗啉 醋酸盐 反离子 h hcoo hcoo ch3coo ch3coo hcoo ch3coo co32 hco3 co32 co32 hcoo 对于缓冲离子的pka值1 3 75 3 75 5 25 4 75 9 81 4 75 5 25 4 75 9 81 3 75 9 25 4 75 9 25 6 35 9 81 6 35 9 25 6 35 9 25 6 35 9 25 4 75 7 72 1 参考文献 crc化学与物理手册第83版 2002 2003年 ktadesign 层析系统为每种ph和填料提供关于缓冲液配方的建议 在所选择系统中提供的bufferprep功能自 动补偿盐浓度和温度变化引起的ph变化 确保整个分离过程中ph值一致 精细纯化 去除微量杂质或密切 相关的物质 样品条件 几乎为纯的 中间纯化 去除杂质 样品条件 部分纯化 捕获 分离 浓缩和稳定 目蛋白 样品条件 澄清 或非澄清 最高分辨率 g 轮minibeads q或s minibeads q或s source 15 q or s source 30 q or s sepharose high performance q或sp macrocap sp sepharose fast flow q sp deae cm anx capto q s deae adhere mmc sepharose xl q或sp sepharose big beads q或sp 最高分辨率 g 轮 高分辨率 高通量 易于放大 高分辨率 易于放大 高体积通量和高容量 易于放大 大规模 粘性样品 大分子在高上样量时的 高纯度和产量 易于放大 广泛的选择性选择 包括q或s离子交换填料替代填料 对于所选择蛋白的高结合容量 易于放大 如果层析柱容量足够且无需 放大 则用于中间纯化 样品 胰酶 梯度洗脱 样品 胰酶 梯度洗脱 样品 胰酶 梯度洗脱 样品 胰酶 梯度洗脱 样品 聚乙二醇化细胞色素c 梯度洗脱 样品 胰酶 梯度洗脱 样品 胰酶 梯度洗脱 样品 重组的 淀粉酶 中试规模 在20 l后开始梯度洗脱 如果层析柱容量足够且无需 放大 则用于中间纯化 如 果样品无颗粒物质则可以用 于捕获步骤 当分辨率优先时使用 source 15 当速度优先时使用 source 30 使用预装sepharose high performance sepharose xl 和sepharose fast flow的 hitrap层析柱用于填料选择 和ph搜索 使用macrocap纯化聚乙二醇 化的蛋白质和其他大生物分 子 如果q或s的选择性不理想 尝试弱的离子交换剂 例如 deae cm或anx 使用高柱床高度以提高生产 力 对于高盐物料使用mmc 使用许可的病毒纯化认证的 sepharose q xl作为氯化铯 梯度离心的替代 用于病毒 的纯化 包括腺病毒或病毒 载体 使用阶段洗脱 5 010 015 0ml mini q column 4 6 50 mm a280 10200min30 mono q column 5 50 mm a280 resource q 1 ml 10200min30 a280 source 30q xk16 50 mm 10200min30 a280 a280 0 min macrocap 10203040 q sepharose hp xk 16 50 mm 10200min30 a280 q sepharose ff xk 16 50 mm 10200min30 a280 10 015 05 0020 0 volume l a280 q sepharose xl 选择指南 离子交换填料 选择一种阴离子或阳离子交换剂 离子交换根据与环境ph有关的蛋白质表面净电荷白 质 下面的图说明蛋白质的净电荷如何能够随着ph而 变化 每种蛋白质都有其自身的电荷 ph关系 n ph 0 46810 将结合阳 离子交换剂 将结合阴 离子交换剂 蛋白质的净电荷 等电点 pi 在系统ph高于pi时 选择阴离子交换剂 系统ph 在体系ph 低于pi时 选择阳离子 交换剂 如果目标蛋白的等电点 pi 已知 缓冲液ph高于pi时选择阴离子交换剂 q deae anx 缓冲液ph低于pi时选择阳离子交换剂 s sp cm 如果pi未知 使用强的离子交换剂q s或sp进行选择性检测 强离子交换剂与弱离子交换剂相比在更广泛的ph 范围中维持它们的电荷 并适用于大多数应用 典型的纯化策略分为三个阶段 捕获 中间纯化和精 细纯化 cipp 每个阶段都有一个明确的目标 主 要取决于起始材料 根据你的纯化步骤的目标和你的 起始材料的条件选择适当的离子交换剂填料 产品订购 信息 床体 积 ml 大约 柱尺寸直 径 mm 高度 m m 颗粒 大小 最大 流速 最大操作压 力1 mpa psi ph工作 范围 离子交换 剂类型 标准颗粒 大小 m ph稳定 性3 长期 ph稳定性4 短期 清洗 预装柱 散装填料代码 1 mpa 10 bar mini q pc 3 2 317 0686 013 2 300 240 1 1 0 ml min1 ml min10 14503 113 111 14strong anion3 monosized ch2n ch 3 3 amylase mr 49 000 6 mg ml trypsin inhibitor mr 20 100 6 mg ml mini s pc 3 2 317 0687 013 2 300 240 1 1 0 ml min1 ml min10 14503 113 111 14strong cation3 monosized ch2so3 ribonuclease mr 13 700 5 mg ml lysozyme mr 14 300 5 mg ml mini q 4 6 50 pe17 5177 014 6 500 80 5 2 0 ml min2 ml min18 26003 113 111 14strong anion3 monosized ch2n ch 3 3 amylase mr 49 000 6 mg ml trypsin inhibitor mr 20 100 6 mg ml mini s 4 6 50 pe17 5178 014 6 500 80 5 2 0 ml min2 ml min18 26003 113 111 14strong cation3 monosized ch2so3 ribonuclease mr 13 700 5 mg ml lysozyme mr 14 300 5 mg ml mono q 5 50 gl17 5166 015 5010 5 3 ml min3 m min4 5802 122 122 14strong anion10 monosized ch2n ch 3 3 thyroglobulin mr 669 000 25 mg ml mono q pc 1 6 517 0671 011 6 50 10 01 0 4 ml min0 4 ml min5 7252 122 122 14strong anion10 monosized mono q 10 100 gl17 5167 0110 10082 6 ml min10 ml min4 580hsa mr 68 000 65 mg ml mono q 4 6 100 pe17 5179 014 6 1001 70 5 3 ml min3 ml ml4 580 lactalbumin mr 14 300 80 mg ml mono q hr 16 1017 0506 0116 10020up to 10 ml min10 ml min3 435 mono s 5 50 gl17 5168 015 5010 5 3 ml min3 ml min4 5802 122 122 14strong cation10 monosized ch2so3 igg human mr 160 000 75 mg ml mono s pc 1 6 517 0672 011 6 50 10 01 0 4 ml min0 4 ml min5 7252 122 122 14strong anion10 monosized mono s 10 100 gl17 5169 0110 10082 6 ml min 10 ml min4 580ribonuclease mr 13 700 75 mg ml mono s 4 6 100 pe17 5180 014 6 1001 70 5 3 ml min3 ml ml4 580 mono s hr 16 1017 0507 0116 10020up to 10 ml min10 ml min3 435 resource q 1 ml17 1177 016 4 3011 0 10 ml min10 ml min1 5 2202 122 121 14strong anion15 monosized ch2n ch 3 3 bsa mr 67 000 45 mg ml resource q 6 ml17 1179 0116 3061 0 60 ml min60 ml min0 6 87 source 15q 4 6 100 pe17 5181 014 6 1001 70 5 2 5 ml min5 ml min4 580 resource s 1 ml17 1178 016 4 3011 0 10 ml min10 ml min1 5 2202 132 121 14strong cation15 monosized ch2so3 lysozyme mr 14 500 80 mg ml resource s 6 ml17 1180 0116 3061 0 60 ml min60 ml min0 6 87 source 15s 4 6 100 pe17 5182 014 6 1001 70 5 2 5 ml min5 ml min4 580 source 15q17 0947 01 17 0947 05 50 ml 200 ml 150 900 cm h1800 cm h0 5 72 2 122 121 14strong anion15 monosized ch2n ch 3 3 bsa mr 67 000 45 mg ml source 15s17 0944 01 17 0944 05 50 ml 200 ml 150 900 cm h1800 cm h0 5 722 122 131 14strong cation15 monosized ch2so3 lysozyme mr 14 500 80 mg ml source 30q17 1275 01 17 1275 02 50 ml 200 ml 300 1000 cm h2000 cm h0 3 432 132 121 14strong anion30 monosized ch2n ch 3 3 hsa mr 68 000 50 mg ml source 30s17 1273 01 17 1273 02 50 ml 200 ml 300 1000 cm h2000 cm h0 3 432 132 131 14strong cation30 monosized ch2so3 lysozyme mr 14 500 80 mg ml hitrap q hp 5 1 ml17 1153 017 251up to 1 ml min4 ml min0 3 432 122 121 14strong anion34 ch2n ch 3 3 hsa mr 68 000 50 mg ml 5 5 ml17 1154 0116 255up to 5 ml min20 ml min hitrap sp hp 5 1 ml17 1151 017 251up to 1 ml min4 ml min0 3 434 134 133 14strong cation34 ch2ch2ch2so3 ribonuclease mr 13 700 55 mg ml 5 5 ml17 1152 0116 255up to 5 ml min20 ml min hiload 16 10 q sepharose high performance 17 1064 0116 10020up to 5 ml min5 ml min0 3 432 122 121 14strong anion34 ch2n ch 3 3 bsa mr 67 000 60 mg ml hiload 26 10 q sepharose high performance 17 1066 0126 10053up to 13 ml min13 ml min hiload 16 10 sp sepharose high performance 17 1137 0116 10020up to 5 ml min5 ml min0 3 434 134 133 14strong cation34 ch2ch2ch2so3 ribonuclease mr 13 700 55 mg ml hiload 26 10 sp sepharose high performance 17 1138 0126 10053up to 13 ml min13 ml min q sepharose high performance17 1014 0175 ml up to 150 cm h150 cm h0 5 722 122 121 14strong anion34 ch2n ch 3 3 bsa mr 67 000 70 mg ml sp sepharose high performance17 1087 0175 ml up to 150 cm h150 cm h0 5 724 134 133 14strong cation34 ch2ch2ch2so3 ribonuclease mr 13 700 55 mg ml macrocap sp17 5440 10 17 5440 01 25 ml 100 ml 120 cm h 100 mg ml 5 5 ml 6 11 0013 0316 2555 ml min20 ml min hitrap capto viralq 5 5 ml 6 28 9078 0916 2555 ml min20 ml min hitrap capto s 5 1 ml17 5441 227 2511 ml min4 ml min0 3 9 4 124 123 14strong cation90 o ch2ch2so3 lysozyme mr 14 500 120 mg ml 5 5 ml 17 5441 2316 25 55 ml min20 ml min hitrap capto deae 5 1 ml 28 9165 377 2511 ml min4 ml min0 3 9 2 92 122 14weak anion90 o ch2ch2n h ch 2ch3 2 ovalbumin mr 66 000 90 mg ml 5 5 ml 28 9165 4016 2555 ml min20 ml min hitrap capto adhere 5 1 ml 28 4058 447 2510 5 ml min4 ml min0 3 9 3 123 122 14multimodal strong anion exchanger 75 och2ch oh ch2 2n ch 3 ch2c6h5 ch2ch2oh n a 8 hitrap capto adhere 5 5 ml28 4058 4616 2552 5 ml min20 ml min hitrap capto mmc 5 1 ml 11 0032 737 2511 ml min4 ml min0 3 9 2 12 7 2 122 14multimodal weak cation exchanger 75 och2ch oh ch2 2s ch2 2 ch coo nhcoc 6h5 45 mg bsa ml medium at 30 ms cm 5 5 ml11 0032 7516 2555 ml min20 ml min capto q 6 17 5316 10 17 5316 02 25 ml 100 ml 700 cm h 10 0 3 9 2 122 122 14strong anion90 o ch2chohch2n ch 3 3 bsa mr 67 000 100 mg ml capto viralq 6 28 9032 30 28 9032 31 25 ml 100 ml 700 cm h 10 0 3 9 2 122 122 14strong anion90 o ch2chohch2n ch 3 3 bsa mr 67 000 100 mg ml capto s 17 5441 10 17 5441 01 25 ml 100 ml 700 cm h 10 0 3 9 4 124 123 14strong cation90 o ch2ch2so3 lysozyme mr 14 500 120 mg ml capto deae 17 5443 10 17 5443 01 25 ml 100 ml 700 cm h 10 0 3 9 2 92 122 14weak anion90 o ch2ch2n h ch 2ch3 2 ovalbumin mr 66 000 90 mg ml capto adhere 17 5444 10 17 5444 01 25 ml 100 ml 600 cm h 10 0 3 9 3 123 122 14multimodal strong anion exchanger 75 och2ch oh ch2 2n ch 3 ch2c6h5 ch2ch2oh n a 8 capto mmc 17 5317 10 17 5317 02 25 ml 100ml 600 cm h 10 0 3 9 2 12 7 2 122 14multimodal weak cation exchanger 75 och2ch oh ch2 2s ch2 2 ch coo nhcoc 6h5 45 mg bsa ml medium at 30 ms cm hiscreen capto s 1 4 7 ml 28 9269 797 7 1004 72 3 4 7 ml min4 7 ml min0 3 434 124 123 14strong cation90 o ch2ch2so3lysozyme mr 14 500 120 mg ml hiscreen capto q 1 4 7 ml28 9269 787 7 1004 72 3 4 7 ml min4 7 ml min0 3 432 122 122 14strong anion90 ch2n ch 3 3 bsa mr 67 000 100 mg ml hiscreen capto deae 1 4 7 ml 28 9269 827 7 1004 72 3 4 7 ml min4 7 ml min0 3 432 92 122 14weak anion90 o ch2ch2n h ch2ch3 2ovalbumin mr 66 000 90 mg ml hiscreen capto adhere 1 4 7 ml28 9269 817 7 1004 72 3 4 7 ml min4 7 ml min0 3 433 133 122 14multimodal strong anion exchanger 75 och2ch oh ch2 2n ch3 ch2c6h5 ch2ch2oh n a 8 hiscreen capto mmc 1 4 7 ml 28 9269 807 7 1004 72 3 4 7 ml min4 7 ml min0 3 432 12 7 2 122 14multimodal weak cation exchanger 75 och2ch oh ch2 2s ch2 2 ch coo nhcoc6h5 45 mg bsa ml medium at 30 ms cm hitrap q xl 5 1 ml 6 17 5158 017 251up to 1 ml min4 ml min0 3 432 122 122 14strong anion90 ch2n ch 3 3 bsa mr 67 000 130 mg ml 5 5 ml 6 17 5159 0116 255up to 5 ml min20 ml min hitrap sp xl 5 1 ml17 5160 017 251up to 1 ml min4 ml min0 3 434 134 133 14strong cation90 ch2ch2ch2so3 lysozyme mr 14 300 160 mg ml 5 5 ml17 5161 0116 255up to 5 ml min20 ml min hiprep q xl 16 10 6 28 9365 3816 100202 10 ml min10 ml min0 15 222 122 122 14strong anion90 ch2n ch 3 3 bsa mr 67 000 130 mg ml hiprep sp xl 16 1028 9365 4016 100202 10 ml min10 ml min0 15 224 134 133 14strong cation90 ch2ch2ch2so3 lysozyme mr 14 500 160 mg ml q sepharose xl virus licensed 6 17 5437 1025 ml 100 500 cm h700 cm h0 3 432 122 122 14strong anion90 ch2n ch 3 3 bsa mr 67 000 130 mg ml q sepharose xl 6 17 5072 01300 ml 100 500 cm h700 cm h sp sepharose xl17 5073 01300 ml 100 500 cm h700 cm h0 3 434 134 133 14strong cation90 ch2ch2ch2so3 lysozyme mr 14 500 160 mg ml q sepharose big beads17 0989 031 l up to 500 cm h1800 cm h0 3 432 122 122 14strong anion200 ch2n ch 3 3 tested for specifi c application only sp sepharose big beads17 0657 031 l up to 500 cm h1800 cm h0 3 434 134 133 14strong cation200 ch2ch2ch2so3 tested for specifi c application only 推荐工作流速 范围 功能基团动态结合能力实例 mg ml填料 产品订购 信息 床体 积 ml 大约 柱尺寸直 径 mm 高度 m m 颗粒 大小 最大 流速 最大操作压 力1 mpa psi ph工作 范围 离子交换 剂类型 标准颗粒 大小 m ph稳定 性3 长期 ph稳定性4 短期 清洗 预装柱 散装填料代码 1 mpa 10 bar 推荐工作流速 范围 功能基团动态结合能力实例 mg ml填料 引用的所有范围都是根据我们的知识和经验估计 1 最大操作背压是指高于填料开始压缩的压力 2 工作ph范围是指填料结合蛋白为目的或用于洗脱 且无长期不良影响所需要的ph间隔 3 ph稳定性 长期 是指填料经过长时间后仍然稳 定且对后续层析性能没有不利影响的ph间隔 4 ph稳定性 清洗 是指用于再生 在位清洗和灭 菌程序的ph间隔 5 hitrap iex选择试剂盒包含 hitrap q ff 1 ml hitrap sp ff 1 ml hitrap deae ff 1 ml hitrap cm ff 1 ml 6 有关q sepharose xl病毒许可和capto viralq产品见包 装上的重要法律信息 7 capto mmc是一种多峰弱阳离子交换剂 配体在ph 6 10范围中带电 超出这个ph范围 其他相互作用仍 然有效 8 capto adhere以流穿模式被用于抗体生产过程 上样 量可以在100 300 mg ml范围内 在每个特定情况下 应该优化上样条件 根据下列填充柱中的测量值计算最大流速 线性流速 sepharose big beads anx sepharose 4 fast flow high sub xk50 柱高度 25 cm sepharose xl and sepharose fast flow xk50 柱高度 15 cm sepharose high performance biopilot 60 柱高度30 cm source 30 fineline 100 柱高度10 cm source 15 resource 柱高度3 cm hitrap anx ff high sub 1 ml hitrap q xl 1 ml和 hitrap sp xl 1 ml 9 对于压力大于0 3 mpa 3 bar 填料的最大压力尚未进行 测试 10 对于大于700或600 cm h流速填料的最大流速尚未进 行测试 11 hitrap capto iex选择试剂盒包含 hitrap capto q 1