贵州省贵阳市北京师范大学贵阳附属中学高中生物 1.2 基因工程的基本操作程序课件 新人教版选修3.ppt

专题1基因工程 1 2基因工程的基本操作程序 四个步骤 一 获取 二 构建 三 导入 四 鉴定 一 获取 目的基因 一 人工合成 二 自然物种分离 1 pcr 2 基因文库 1 pcr技术 聚合酶链式反应 polymerasechainreaction 1 原理 dna双链复制的原理 2 过程 高温变性 90 95 低温退火 55 60 中温延伸 70 75 多次重复 3 条件 酶 模板 引物 对 原料 热稳定dna聚合酶 如何利用pcr技术获取目的基因 引物 对 一段已知目的基因核苷酸序列 下图表示利用pcr技术扩增目的基因的部分过程 其原理与细胞内dna复制类似 下列叙述错误的是a 从理论上推测 第二轮循环产物中含有引物a的dna片段占3 4b 在第二轮循环产物中开始出现两条脱氧核苷酸链等长的dna片段c 引物之间或引物自身发生碱基互补配对则不能扩增目的基因d 耐热的dna聚合酶总将游离的脱氧核苷酸连接到3 端 b 2 基因文库 1 基因组文库 2 部分基因文库 cdna文库 基因组文库和部分基因文库 二 构建 基因表达载体 1 将图中 的dna用hind bamh 完全酶切后 反应管中有种dna片段 2 图中 表示hind 与bamh 酶切 dna连接酶连接的过程 此过程可获得种重组质粒 如果换用bst 与bamh 酶切 目的基因与质粒连接后可获得种重组质粒 4 2 1 三 导入 受体细胞 转化 用ca2 处理细胞 表达载体与感受态细胞混合 感受态细胞吸收dna分子 一 将目的基因导入微生物细胞 原核生物特点 繁殖快 多为单细胞 遗传物质少 转化方法 1 农杆菌转化法 二 将目的基因导入植物细胞 2 基因枪法3 花粉管通道法 三 将目的基因导入动物细胞 方法 显微注射技术 含目的基因的表达载体 动物的受精卵 早期胚胎 雌性动物输卵管或子宫 转基因动物 四 鉴定 目的基因的稳定与表达 检测 分子水平 鉴定 个体水平 检测转基因生物染色体的dna上是否插入了目的基因 检测目的基因是否转录出了mrna 检测目的基因是否翻译成蛋白质 抗虫鉴定 抗病鉴定 活性鉴定等 方法 方法 方法 dna分子杂交 dna rna分子杂交 抗原 抗体分子杂交 dna分子杂交示意图 采用一定的技术手段 将两种生物的dna分子的单链放在一起 如果这两个单链具有互补的碱基序列 那么 互补的碱基序列就会结合在一起 形成杂合双链区 在没有互补碱基序列的部位 仍然是两条游离的单链 小结 基因工程的基本操作程序 1 目的基因的获取 2 基因表达载体的构建 3 将目的基因导入受体细胞 4 目的基因的检测与鉴定 从基因文库中获取 利用pcr技术扩增 人工合成 目的基因 启动子 终止子 标记基因 农杆菌转化法 显微注射技术 是否插入 转录 翻译 方法 分子杂交技术 x基因 是dna分子上一个有遗传效应的片段 若要用pcr技术特异性地拷贝 x基因 需在pcr反应体系中加入两种引物 这两种引物及其与模板链的结