PBS与TBS区别.doc

提供PBS与TBS的优缺点： 磷酸盐缓冲液磷酸盐是生物化学研究中使用最广泛的一种缓冲剂，由於它们是二级解离，有二个pKa值，所以用它们配制的缓冲液，pH范围最宽：NaH2PO4： pKa12.12， pKa27.21 Na2HPO4： pKa17.21， pKa212.32配酸性缓冲液： 用 NaH2PO4，pH14，配中性缓冲液： 用混合的两种磷酸盐，pH68，配碱性缓冲液： 用 Na2HPO4，pH1012。用钾盐比钠盐好，因为低温时钠盐难溶，钾盐易溶，但若配制SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳的缓冲液时，只能用磷酸钠而不能用磷酸钾，因为SDS（十二烷基硫酸钠）会与钾盐生成难溶的十二烷基硫酸钾。磷酸盐缓冲液的优点为：容易配制成各种浓度的缓冲液；适用的pH范围宽；pH受温度的影响小；缓冲液稀释后pH变化小，如稀释十倍后pH的变化小于0.1。其缺点为：易与常见的钙Ca+离子、镁Mg+离子以及重金属离子缔合生成沉淀；会抑制某些生物化学过程，如对某些酶的催化作用会产生某种程度的抑制作用。Tris（三羟甲基氨基甲烷，N-Tris(hydroxymethyl)aminomethane）缓冲液 Tris缓冲液在生物化学研究中使用的越来越多，有超过磷酸盐缓冲液的趋势，如在SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳中已都使用Tris缓冲液，而很少再用磷酸盐。Tris缓冲液的常用有效pH范围是在“中性”范围，例如：Tris-HCl缓冲液： pH7.58.5Tris-磷酸盐缓冲液： pH5.09.0配制常用的缓冲液的方法有两种：按一般书后附录中所列该缓冲液表中的方法，分别配制0.05mol/L Tris和0.05mol/L HCl溶液，然后按表中所列体积混合。由于标准浓度的稀盐酸不易配制，所以常用另一种方法；若配1L 0.1mol/L的Tris-HCl缓冲液：先称12.11g Tris碱溶于950mL970mL 无离子水中，边搅拌边滴加4N HCl，用pH计测定溶液pH值至所需的pH值，然后再加水补足到1L。Tris-HCl缓冲液的优点是： 因为Tris碱的碱性较强，所以可以只用这一种缓冲体系配制pH范围由酸性到碱性的大范围pH值的缓冲液；对生物化学过程干扰很小，不与钙、镁离子及重金属离子发生沉淀。其缺点是：缓冲液的pH值受溶液浓度影响较大，缓冲液稀释十倍，pH值的变化大于0.1；温度效应大，温度变化对缓冲液pH值的影响很大，即：pKa0.031 ，例如：4时缓冲液的pH8.4，则37时的pH7.4，所以一定要在使用温度下进行配制，室温下配制的Tris-HCl缓冲液不能用于04。 易吸收空气中的CO2，所以配制的缓冲液要盖严密封。 此缓冲液对某些pH电极发生一定的干扰作用，所以要使用与Tris溶液具有兼容性的电极。HEPES用途：对细胞无毒性作用。它是一种氢离子缓冲剂，能较长时间控制恒定的pH范围。使用终浓度为10-50mmol/L，一般培养液内含20mmol/LHEPES即可达到缓冲能力。细胞培养常用10mmol/L。10mmol/L HEPES缓冲液配制方法如下：准确称取HEPES 2.383g，加入新鲜三蒸水定容至1L。过滤除菌，分装后4保存。如果用于加入细胞培养液中作缓冲剂，建议培养液避光保存，因为有研究报道培养液中的HEPES在可见光下暴露3h以上将产生对细胞有毒性的过氧化氢。HEPES FREE ACID(N-2 HYDROXYETHYL PIPERAZINE -N-2-ETHANESULFONIC ACID)High Purity GradeC8H18N2O4S MW: 238.3 7365-45-9Purity (Dry Basis) (%). 99.0pKa 20C . .4.5 - 7.65Residue on Ignition . . . . 0.2Heavy Metals (as Pb) . 0.0005Iron . . 0.0005DNase . . None DetectedRNase . . . None DetectedProtease . . None DetectedStorage at RT Amresco 0511HEPES buffer缓冲溶液的配制方法关于HEPES 缓冲溶液的配制，不同的文献资料有不同的说法。根据用途，一种是单纯的HEPES+NaOH，另一种是HEPES+盐。各种配制方法总结如下：一、500ml 1 M HEPES, pH = 7.0 Stock solution的配制119.15 g HEPES 溶解在400ml蒸馏水中，加0.51M 的NaOH水溶液调节至少所需pH（HEPES的有效pH 范围是6.88.2），然后用蒸馏水定容至500ml，于4摄氏度保存。二、加少量盐的HEPES Buffer配方（500ml）HEPES 6.5g、NaCl 8.0g、Na2HPO4.7H2O 0.198g、用0.5M NaOH 水溶液调节pH值，最后定容。三、2HEPES缓冲盐溶液的配制将1.6g NaCl、0.0