SD大鼠脊髓损伤模型的制备及功能的评定.doc

SD大鼠脊髓损伤模型的制备及功能的评定作者：程方圆 沈程 肖贵虎 杨明英 杨金梅 罗川南指导老师：荣成（四川省成都市成都医学院，610500）摘要 目的：通过对SD大鼠脊髓顿挫损伤（Spinal cord injury，SCI）模型进行功能评价，观察SD大鼠脊髓恢复情况。方法：将SD大鼠随机分成实验组、对照组两组，将实验组用 Allens法进行T9脊髓顿挫损伤，制成大鼠脊髓损伤模型。对所有大鼠的后肢运动功能进行BBB评分和脊髓组织学观察。结果：实验组大鼠BBB评分一周后最高达到14分，最低达到3分。BBB功能评分显示实验组大鼠运动功能明显低于对照组，并逐渐恢复或增强。结论：脊髓顿挫导致大鼠后肢功能障碍，通过BBB评分显示，大鼠后肢功能逐渐增强。【关键词】 脊髓顿挫损伤；后肢运动功能；BBB评分 Objective: observe the recovery situation of the SD rats through the abortive on spinal cord injury in SD rats (spinal cord injury, SCI) function evaluation model .methods: SD rats were divided into two groups randomly, including normal group and experimental group. SD rat model of acute spinal cord injury were established by using Allens method at 9th spinal cord, evaluate the hind limb motor of all rats and observe the histology of spinal. Result: the experimental rats BBB score up to 14 points after one week, the lowest reach 3 points. The BBB score of experimental rats showed that the rats motor function was significantly lower than the normal rats, and gradually restored or enhanced. Conclusion: aborting spinal cord leads to hind limb dysfunction, the BBB score showed that the hind limb function of rats is enhancing gradually。 Key words: spinal cord injury; hind limb motor function; BBB score 前言：脊髓损伤是由于各种原因引起的脊髓结构和功能的损害，是脊柱损伤最严重的并发症，往往导致损伤节段以下肢体严重的功能障碍，是中枢神经系统严重的致残性疾病。随着世界各国经济水平的发展，脊髓损伤发生率呈现逐年增高的趋势。脊髓损伤不仅会给患者本人带来身体和心理的严重伤害，还会对整个社会造成巨大的经济负担。针对脊髓损伤的预防、治疗和康复已成为当今医学界的一大课题。有研究表明脊髓损伤后有一定修复能力，为此我们设计了此实验。通过对照实验将SD大鼠随机分为脊髓损伤与否两组大鼠，对脊髓损伤的大鼠模型进行功能评价，从而找到更好的治疗脊髓损伤的办法。经过实验，我们发现SD大鼠在脊髓损伤后功能逐步恢复。1 材料与方法1.1 主要仪器 鼠台、橡胶圈、玻璃分针、烧杯、10g金属棒、粗剪刀、手术器械、婴儿磅秤、缝合针、棉线、棉签、注射器、脊髓打击装置。1.2 主要试剂 3.6%水合氯醛、青霉素、葡萄糖、1.5%戊巴比妥溶液。1.3 实验动物 健康成年雌性大鼠10只，体重20050g。饲养两周后进行实验。1.4 实验方法1.4.1建模与分组：将小鼠随机分为A、B两组，每组5只，A组为实验组并进行编号，B组为假手术组。3.6%水合氯醛涂抹注射部位，用1.5%戊巴比妥溶液（1ml/100g）将10只小鼠进行腹腔注射麻醉后固定，切开小鼠皮、膜、肉，用镊子进行椎板切除，暴露小鼠脊髓。将A组小鼠放于脊髓打击装置上，选择15g金属小棒有30mm自由下落，实施脊髓钝挫伤， B组不进行脊髓打击，分层进行缝合。缝合后进行碘伏消毒，然后每只小鼠注射1ml青霉素和2ml葡萄糖液。术后每天晚上同一时间点对大鼠后肢运动功能进行BBB 评分以此观察大鼠的恢复情况1.4.2护理：每天中午与晚上固定时间点对小鼠进行排尿并清洗，喂食等量的食物和清水。1.4.3BBB评分：5人参与，一人观察，4人评分。4人在不知道小鼠编号的情况下进行评分，一只小鼠评分截止时间为5分钟，期间评分人员不得相互讨论。若评测人员中的最大值与最小值之间相差大于二，则重评。评分结束，观察人员随机取3人评分为评分结果，已3人数据的平均值为最终结果并记录。2 结果2.1照片2.1.1假实验小鼠照片 图一 图二图一，图二为假实验小鼠，假实验小鼠步行中可持续性的脚掌站立并且前后肢协调运动，脚尖在向前运动时持续出现抓地，尾巴翘起，躯干稳定。2.1.2 实验小鼠照片 图三 图四 图五图三为小鼠脊髓损伤运动恢复的初期，小鼠后肢均只有1.2个关节的轻微运动，一般为膝关节和髋关节的运动。图四，图五为小鼠脊髓运动恢复的后期，小鼠后肢渐渐恢复，能够行走。2.2运动功能BBB2.2.1小鼠的BBB评分表 编号时间 2#23#69#70#71#1d0 013 12.50 00 00 02d0 012.6 12.30 00 00 03d0.6 1.314.2 140 03.3 2.34.6 54d1 115.6 15.60.6 1.31.3 1.34.6 45d0.6 0.612.6 12.69.6 9.61.6 1.67 76d2 1.320 2011.6 11.62.3 2.68 8.37d2.1 1.618 17.510.6 10.62.6 2.39.3 9.6 注：左上角记录代表大鼠左肢恢复情况，右下角记录代表大鼠右肢恢复情况，评分均采用标准五人组，记录记录数据为平均值从数据可以看出，除23#造模失败外（脊髓损伤不够完全，但依然后肢运动存在障碍）其余大鼠从第三第四天后肢开始恢复运动，其中2#与70#恢复较一致，69#与71#恢复较一致，且2#与70#较69#与71#恢复慢，直到第七天评分才打到两左右（一个关节的广泛活动或一个关节的广泛活动加上再一个关节的轻微活动），而后者基本上能达到十分左右（偶然负重脚掌站立，无前后肢协调运动）2.2.2小鼠后肢（左腿/右腿）运动折线图由折线图更能直观的观察到71#（该老鼠是实验组中随机抽取）后肢运动恢复在第四天后情况越来越好，越接近正常大鼠的运动水平 编号时间2#23#69#70#71#1d重轻重重重2d中轻中中中3d中无轻轻轻4d轻无无轻轻5d无无无无无6d无无无无无7d无无无无无2.3血尿统计 注：23#为造模失败的大鼠，重：重度血尿；中：中度血尿：轻：轻度血尿：无：无血尿由表可以看出，造模后前三天，大鼠都出现了不同程度的血尿，尤其以第一天情况最为严重，从第四天开始，血尿情况好转，程度减轻。从第五天开始，血尿情况消失，根据护理与观察，血尿情况的回复可能与使用抗生素与损伤脊髓的恢复有关。3结论 在本实验中，所有的实验小鼠在脊髓被破坏后都没有接受过治疗措施，但小鼠后肢功能仍渐渐恢复。实验小鼠在最初的BBB评分1中均为为0，后肢无反应。但术后3天，小鼠后肢恢复2，1、2个关节能轻微运动。7天后小鼠后肢能自动，偶见无负重站立，能正常排尿。在探讨构建SD大鼠脊髓损伤模型中，损伤阶段大多数选择大鼠或小鼠3的胸段，但是在具体实施阶段选定上，从T6-T12不定，本实验选择大鼠T10胸椎区，便于老鼠的排尿与护理。因为要求脊髓损伤模型的制作过程（实验动物的手术过程）与临床脊髓损伤过程相似，能够模拟人类脊髓损伤的病理过程4.我们采用的是Allens打击方法，该打击方法造成的损伤与人类脊髓损伤的性质非常相近，同时该法保存了硬脊膜完整性并防止脊髓外露出脑脊液5.参考文献 1 Cheng H,Cao Y,Olson L.Spinal cord repair in adult paraplegic rats: partial restoration of hind limb function. Science . 19962刘杨； 苗宇船； 郭继龙；大鼠脊髓损伤模型的改良及伤后再生基因-2蛋白的表达变化；中国康复医学杂志2012年12期3 邢文华,霍洪军,杨学军,贾连顺,周许辉.成人胸椎无骨折脱位型脊髓损伤的临床诊治及损伤机制探讨J.中国修复重建外科杂志.2010(09) 4 杨惠林,孟斌.脊髓损伤模型的评价标准J.国外医学.骨科学分册.2003(02)5Kobayashi NR,Fan DP,Giehl KM,et