免疫荧光试剂盒临床应用PPT课件.ppt

免疫荧光试剂盒在生殖道感染病原体检测中的临床应用 深圳市迈科龙生物技术有限公司 2019 12 27 1 免疫荧光技术 免疫荧光标记技术 immunofluorescencetechnique 是标记免疫技术的一种 是在免疫学 生物化学和显微镜技术基础上建立起来的一项技术 经过不断改进发展 免疫荧光技术已成为微生物学 免疫学 病理学及免疫组织化学中准确又快速的一种免疫学实验方法 2019 12 27 2 1免疫荧光原理将不影响抗原抗体活性的荧光色素标记在抗体 或抗原 上 与样本中的抗原 或抗体 结合后 在荧光显微镜下呈现一种特异性荧光反应 基本反应原理为抗原 抗体间的反应 2免疫荧光特点 特异性强 敏感性高 检测速度快 单个样本处理时间约40分钟 批量样本报告时间以半天或隔天最佳 2019 12 27 3 直接免疫荧光法 DFA 将标记的特异荧光抗体直接加在抗原标本上 经一定温度和时间的染色 在荧光显微镜下便可观察到被检抗原与荧光抗体形成的特异性结合物所发出的荧光 直接免疫荧光示意图 2019 12 27 4 免疫荧光技术的应用 免疫荧光技术应用范围极其广泛 可以应用于生物学的各个领域 尤其适用病原微生物的快速鉴定检测 具有形态学和免疫学的双重优点 临床实验室改进组织 CLIA 指出直接免疫荧光法最适合用于日常临床和参考实验室检测 2019 12 27 5 迈科龙免疫荧光法生殖道病原体检测试剂盒 2019 12 27 6 造成非淋菌性尿道炎的重要病原体 其感染已超过淋球菌感染而位居性传播疾病之首可致尿道炎 宫颈炎 子宫内膜炎及盆腔炎对怀孕可致早产 流产 胎膜早破 胚胎停育等严重妊娠并发症产道感染可致婴儿急性结膜炎母婴传播可致新生儿眼炎或肺炎引起不孕不育 沙眼衣原体 1 临床意义 2019 12 27 7 潜伏期 平均为1 3周男性患者临床表现 尿痛 或尿频 尿道刺痒和不适 阴体局部疼痛尿道分泌物常为浆液性或粘液脓性 较稀薄 量少女性患者临床表现 尿道有分泌物 呈浆液性或浆液脓性 尿痛 尿频白带增多 色黄或带血性 或有异味非经期或性交后出血宫颈品可见粘液脓性分泌物 宫颈充血 消肿 触之易出血 2 临床表现 2019 12 27 8 近年来国际上已将免疫荧光法作为一项 扩大的金标准 来鉴定沙眼衣原体培养和非培养结果相异的标本 其敏感性为80 90 特异性则在95 以上 卫生部颁布的 非淋菌性尿道炎诊断标准及处理原则 WS238 2003 中 直接免疫荧光法为沙眼衣原体推荐检测方法 2019 12 27 9 沙眼衣原体临床检验方法 2019 12 27 10 沙眼衣原体阳性图片 2019 12 27 11 治疗方案 初发病例多西环素100mg 口服 2次 日 连服7 10天阿奇霉素1g 一次顿服 饭前1小时或饭后2小时服用红霉素500mg 口服 4次 日 连服7天琥乙红霉素800mg 口服 4次 日 连服7天氧氟沙星300mg 口服 2次 日 连服7天米诺环素100mg 口服 2次 日 连服10天 2019 12 27 12 复发性或持续性病例 尚无有效的治疗方案 推荐方案为 甲硝唑2g单次口服 加红霉素碱500mg 口服 4次 日 共7天琥乙红霉素800mg 口服 4次 日 连服7天孕妇禁用多西环素和氧氟沙星 推荐方案为 红霉素500mg 口服 4次 日 共7天红霉素250mg 口服 4次 日 共14天琥乙红霉素800mg 口服 4次 日 共7天阿奇霉素1g 一次顿服 2019 12 27 13 造成细菌性阴道炎的主要病原体 在阴道分泌物中检出阴道加德纳菌可用于诊断细菌性阴道炎引起尿道炎和阴道炎导致早产 低体重儿 绒毛膜炎 羊膜炎 羊水感染 子宫内膜炎 急性输卵管炎 手术后感染和子宫颈癌等经性接触传播 与男性非淋菌性尿道炎有一定关系影响精子质量 是男性不育的重要原因之一妊娠期感染 可能导致自然流产 早产产前 孕早期上行感染可致胚胎停止发育 阴道加德纳菌 1 临床意义 2019 12 27 14 2 临床表现 阴道分泌物呈灰白色 很粘稠 甚至象面糊状 均匀一致 但不是脓性分泌物 量多少不定 分泌物中胺含量特别高 故呈鱼腥味 性交时或活动后往往因促进胺释放而使气味加重 分泌物中加入10 氢氧化钾后也可释出胺味 2019 12 27 15 3 临床检验方法 2019 12 27 16 阴道加德纳菌阳性图片 2019 12 27 17 治疗方案 非孕期 推荐方案甲硝唑500mg 口服 2次 d 共7d0 75 甲硝唑膏 5g 阴道上药 2次 d 共5d2 克林霉素膏 5g 阴道上药 1次 晚 共7d 替代方案克林霉素300mg 口服 2次 d 共7d克林霉素栓300g 阴道上药 1次 晚 共3d 2019 12 27 18 妊娠期甲硝唑500mg 口服 2次 d 共7d甲硝唑250mg 口服 3次 d 共7d氯洁霉素300mg 口服 2次 d 共7d哺乳期选择局部用药 尽量避免全身用药 2019 12 27 19 奈瑟氏淋球菌 造成淋病的病原微生物 引发以泌尿生殖道化脓性炎症为主要临床症状的性传播疾病淋病是常见的性传播疾病之一 且发病率呈上升趋势 已构成威胁公众健康的重大疾病妊娠期感染淋病对母婴危害极大 宫内感染易致自然流产 早产及胎儿宫内发育迟缓分娩时母婴垂直传播 可致新生儿淋病性结膜炎 治疗若不及时彻底 新生儿有致盲的危险淋病孕妇产后易发生散播性淋病 1 临床意义 2019 12 27 20 2 临床表现 2 1无合并症淋病2 1 1男性淋菌性尿道炎尿道口红肿 发痒 有稀薄或黏液脓性分泌物 尿痛 烧灼感 排出黏稠的深黄色脓液 2 1 2女性泌尿生殖系统的淋病淋菌性尿道炎 尿频 尿急 尿痛 尿血及烧灼感 尿道口充血发红 有脓性分泌物 淋菌性宫颈炎 为女性淋病的主要表现 白带增多 阴道口有黏液脓性分泌物排出 外阴瘙痒 阴道内轻微疼痛和烧灼感 阴道口充血 水肿 子宫颈口充血 糜烂 有黏液脓性分泌物 女童淋病 可见阴道口 尿道口 会阴部红肿 病变部位可出现糜烂 溃疡和疼痛 阴道有脓性分泌物 排尿困难 2019 12 27 21 2 2有合并症淋病2 2 1男性淋病合并症淋菌性附睾炎 睾丸炎 阴囊或睾丸有牵引痛 进行性加重 且向腹股沟处扩散 体温可升高至4O 检查可见附睾 睾丸肿大 压痛 病情严重时可触及肿大的精索及腹股沟淋巴结淋菌性前列腺炎 发热 尿痛 尿频 尿急 有排尿不尽感和会阴胀痛 前列腺肛检有明显压痛和肿大其它合并症 可并发尿道旁腺炎 尿道周围脓肿 海绵体炎 淋菌性龟头炎或龟头包皮炎 尿道狭窄等 2019 12 27 22 2 2 2女性淋病合并症淋菌性盆腔炎 包括淋球菌性子宫内膜炎 输卵管炎 输卵管卵巢脓肿 腹膜炎等 好发于育龄妇女 多数病人有白带增多 且为脓性或血性 双下腹痛 伴有畏寒 发热 头痛 厌食 恶心 呕吐等淋菌性前庭大腺炎 出现前庭大腺红肿 疼痛 腺体开口处有脓性分泌物 大阴唇下1 2肿胀明显 还可伴有全身症状和腹股沟淋巴结肿大 2019 12 27 23 3 临床检验方法 2019 12 27 24 卫生部 淋病诊断标准 WS268 2007 指出 免疫荧光法可用于奈瑟氏淋球菌培养样本鉴定 2019 12 27 26 奈瑟氏淋球菌阳性图片 2019 12 27 27 治疗方案 推荐方案头孢曲松125mg 单次肌注头孢克肟400mg 单次顿服环丙沙星500mg 单次顿服氧氟沙星400mg 单次顿服左氧氟沙星250mg 单次顿服 2019 12 27 28 白色念珠菌 阴道正常菌群之一 在各种致病因素影响之下 念珠菌优势繁殖引起外阴阴道念珠菌病 VVC VVC是仅次于细菌性阴道病的阴道感染性疾病 75 的育龄妇女一生至少有一次发病白色念珠菌是阴道感染念珠菌的主要病原体 占80 90 孕期感染未治疗或治疗不彻底可能因产时阴道操作引起产道感染 导致子宫复旧不良或伤口感染等妊娠合并念珠菌性阴道病患者的胎儿多数在通过产道后感染 新生儿心 肺 脑组织等均存在念珠菌病灶 1 临床意义 2019 12 27 29 包括女性阴道炎及龟头包皮炎 阴道炎 阴道分泌物粘稠 色黄或奶酪样斑片 在阴道壁上可见灰白色假膜样斑片 有瘙痒或灼热感 龟头包皮炎 较少见 可见包皮及龟头潮红 干燥光滑 包皮内侧及冠状沟可见覆有假膜的斑片 2 临床表现 2019 12 27 30 白色念珠菌临床检验方法 2019 12 27 31 白色念珠菌阳性图片 2019 12 27 32 治疗方案 可选择下列药物放于阴道内 咪康唑栓剂 每晚1粒 200mg 连用7天 或每晚1粒 400mg 连用3天克霉唑栓剂 每晚1粒 150mg 塞入阴道深部 连用7天 或每天早 晚各1粒 150mg 连用3天 或1粒 500mg 单次用药娇妍凝胶消毒剂 每晚一次 连用10 14天 2019 12 27 33 也可选择口服药物 氟康唑150mg 顿服伊曲康唑每次200mg 1次 d 连用3 5天 或口服400mg 1天服用2次 2019 12 27 34 单纯疱疹病毒II型 生殖器溃疡最常见的原因之一 引起生殖器疱疹侵犯生殖器皮肤 粘膜引起红斑 水痘 糜烂及溃疡性损害生殖器感染与宫颈癌有关增高对人类免疫缺陷病毒 HIV 的易感性生殖器溃疡促进HIV异性间传播生殖器感染具有反复发作性早期诊断和治疗对促进患者皮损愈合 降低其传染性及危害性有重要意义 1 临床意义 2019 12 27 35 原发性生殖器疱疹外生殖器或肛门周围有群簇或散在的小水疱 2 4天后破溃形成糜烂或溃疡 自觉疼痛腹股沟淋巴结常肿大 有压痛常伴有发热 头痛 乏力等全身症状复发性生殖器疱疹起疹前局部有烧灼感 针刺感或感觉异常外生殖器或肛门周围群簇小水疱 很快破溃形成糜烂或浅溃疡 自觉症状较轻 2 临床表现 2019 12 27 36 3 临床检验方法 2019 12 27 37 单纯疱疹病毒II型阳性图片 2019 12 27 38 治疗方案 生殖器疱疹首次发作 推荐方案无环鸟苷400mg 3次 d 口服 7 10d无环鸟苷200mg 5次 d 口服 7 10d泛昔洛韦250mg 3次 d 口服 7 10d伐昔洛韦1g 2次 d 口服 7 10d如果未完全治愈 治疗疗程可超过10d 2019 12 27 39 间歇治疗 即发作时给予抗病毒药物 推荐在出现前驱症状或皮损出现24h内开始用药 可选择的方案包括 口服阿昔洛韦200mg每日5次 共5天阿昔洛韦400mg每日3次 共5天伐昔洛韦500mg每日2次 共5天伐昔洛韦300mg每日2次 共7天泛昔洛韦250mg每日3次共5天对于初发性生殖器疱疹 剂量不变 疗程延长至10天 2019 12 27 40 长期抑制治疗 对于发作频繁的患者 可推荐长期抑制疗法 可选择的方案包括 阿昔洛韦400mg 口服2次 d泛昔洛韦250mg 口服2次 d伐昔洛韦500mg 口服1次 d伐昔洛韦1 0g 口服1次 d 2019 12 27 41 特殊人群的治疗 新生儿疱疹 早期静脉给子抗病毒治疗 如阿昔洛韦 每次5mg kg 每8小时l次 症状控制后 可考虑口服治疗维持 妊娠疱疹 初发者 口服阿昔洛韦400mg每天3次 有严重并发症者应静脉滴注阿昔洛韦 频繁复发或新近感染的孕妇 可在妊娠最后4周给予连续口服阿昔洛韦 合并HIV感染者 与普通人群感染治疗策略相同 对发作次数频繁者更主张长期抑制疗法 但应关注耐药性 2019 12 27 42 试剂盒选择国家规定临床检验室必须使用有注册证的产品 并定期进行试剂盒有效性检测 试剂盒评价 根据该试剂临床试验报告 了解其质量水平 询问试剂的组成 如原料来源等判断试剂的优劣 参考室间质评的评价结果 了解试剂的质控成绩 根据权威部门发布的评价结果 了解试剂的质量优劣 2019 12 27 43 标本的采集和保存 临床医生应遵循样本采集原则 采集足够的样本量以反应其真实的样本信息 采样过程中应避免血液污染样本 以免与血清中的抗体结合而导致假阴性结果 取样后如不能及时涂片 样本需放入2 8 冰箱保存 2019 12 27 44 1涂片将样本轻缓涂抹在载玻片上 晾干 避免反复涂抹拭子 2固定使用固定剂固定5到10分钟 自然晾干 常用固定剂 甲醇 丙酮或无水乙醇 操作流程 2019 12 27 45 3加样用微量移液器吸取一定量试剂均匀滴加在玻片涂样处 避免产生气泡 每次加样应更换吸嘴 做到一份样本一吸头 避免发生交叉污染 4孵育置于37 水浴锅孵育 孵育时间20到30分钟 避免试剂在玻片上