多肽化学修饰的研究进展.pdf

第 4期 化 学 世 界 多肽 化 学 修饰 的研 究进 展 姜 波 周成 绳 则翠 沈 树 宝 南京工业大学生物与制药工程学院 江苏 南京 2 1 0 0 0 9 摘 要 化 学修饰 可显著 改善 多肽 药物 的物理 化 学性 质 结 合近 年 来 该领 域 的发 展 综 述 了多肽 修 饰 的常 用 方法 策略 着重 介绍 了几 种 主要 的修饰 类型 关键 词 多肽 修 饰 综述 中图分 类号 Q 6 2 1 3 文 献标 志码 A 文章 编 号 0 3 6 7 6 3 5 8 2 0 1 1 0 4 0 2 5 1 0 5 Pr o g r e s s in Che mica l M o d if ica t io n o f Pe pt ide J I ANG B o ZHOU Ch e n g SHEN Z e cu i S HEN S h u b a o C o l l e g e o f B io t e ch n o l o g y a n d P h a r ma ce u t ica l En g in e e r in g Na n j in g Un iv e r s it y o f T e ch n o l o g y J ia n g s u Na n j in g 2 1 0 0 0 9 C h in a A b s t r a ct C h e mi ca l mo d if ica t i o n ca n s i g n if ica n t l y imp r o v e t h e p h y s ica l a n d ch e mica l p r o p e r t ie s o f p e p t id e d r u g s Th e co mmo n me t h o d s a n d s t r a t e g ie s o f p e p fi d e mo d if ica t io n a r e r e v ie we d S e v e r a l ma in t y p e s o f m o d if ica t i o n a r e a l s o in t r od uce d Ke y wo r ds p e p t ide s p e p t id e modi f ica t i on r e v ie w 多 肽是 涉及生 物体 内各 种 细胞功 能 的生物 活 性 物 质 现 已作 为 医药 产 品 的重 要 组 成 部 分 进 行 大量 生 产 而 多肽 修饰 作 为 一 种改 变 肽 链 主 链 结 构 和侧 链基 团的重要 手段 在 改变 肽 类 化 合 物 的 物 理 化学 性 质 解决 其 在体 内 的有 效 利 用 方 面 发 挥 着越 来 越 重要的作用 已有大量文献u 铷表明经过修饰后的多 肽药 物可 以显 著降 低免疫 原 性 减 少毒 副作 用 增加 水溶性 延 长体 内作 用时 间 改变其 生 物分 布状 况等 等 明显改 善 了药物 的疗 效 常见 的 肽 修饰 物 按 照修 饰 位 点 可 分 为 四大 类 C末 端修 饰 酰胺 化 硫 酸 酯 化等 N 末 端 修 饰 乙酰 化 脂 肪 酸化 等 6 中 间残 基 修 饰 与 S e r 一 T y r 一 As n 一 Th r 一 结合 的糖 基 化 修 饰 与 S e r 一 Ty r 一 T h r 一 结合的磷酸化修饰等 以及环化修饰 目前对 多肽修饰 的研究已经成 为热点 本文将从多肽修饰 的方法 策 略 以及 介 绍 几 种 重 要 的 多肽 修 饰 物 三 个 方 面进行 概 述 1多肽 修饰 的 方法 1 1 化 学法 是 目前 多肽 修饰 中研 究 最 为成 熟 应 用 最 为广 泛 的修饰 方法 它 主要 包括 液相 法和 固相 法 1 1 1 液 相 法 液相 法 是 一 种经 典 的方 法 在 纯度 监 测 和 规模 化生产 等 方面 具 有 独 特 优 势 在 肽 的环 化 修 饰 中 为避免发生分子间反应生成线性或环状的二聚体和 多聚体 反 应需 要在 高度 稀释 的溶 液 中进行 1 0 1 0 一 mo l L 但 在此 高度 稀 释 的条 件 下 常存 在 反 应 时 间延 长 副 反应 较 多等局 限性 给 后处理 增加 不 便 针对这种情况 Amo r e等 8 使用一种空间位阻 大的树突状硅烷取代碳二亚胺作 为缩合剂 代替常 收 稿 日期 2 0 1 0 0 9 1 3 基金项 目 十 一 五 国 家 8 6 3项 目 2 0 0 9 AA0 5 Z 3 1 3 2 0 0 6 AA0 2 Z 2 1 1 国家 自然 科 学 基 金 2 0 3 7 6 0 3 4 江 苏 省 自然 科 学 基 金 B K2 0 0 6 1 8 1 江苏省高校研究生创新计划项 目 2 0 0 7 南京工业大学高校博士生创新计划 B S C X2 0 0 9 1 0 作者简介 姜波 1 9 8 5 男 硕士生 主 要研究方 向为多肽合成 E ma i l z s h s h e n g ma i l co rn 化 学 世 界 规 试剂二环己 基碳二亚胺 N N d icy cl o h e x y l ca r b o d iimid e D C C 进 行溶 液 方 式 的 内 酰胺环肽合成 得到纯度很高的 目标化合物 1 1 2固相法 固相法因为易于分离纯化而广泛应用在肽修饰 中 采用 此法 合成 的肽 修 饰 物 其产 率 和 分 离纯 度 也 明显 高于采用 液相 法 在 固相 肽 合 成 中 C末 端 氨基酸残基与载体相连后再组装剩余氨基酸 对合 成 C末端修饰肽存在着先天障碍 本课题组 选 用相对普通的 2 一 氯三苯 甲基氯树脂为载体 固相合 成 全保护 肽亮 丙瑞 林 P y r His T r p S e r Ty r D L e u L e u Ar g P r o NHEt 2 5 下 乙胺 化 反 应 5 rain后 直接 切割 侧链 实现 了肽 片段 乙胺 化 和侧 链 切 割步 骤 的连续 耦合进 行 避 免 了中间产 物 的分离纯 化 成 功 为其他 C 末 端多肽 修饰 提供借 鉴 1 2酶法 酶在修饰位点的立体选择性和温和快速高效的 合成反应条件等方面具有极大的优势 在糖肽合成 中 糖基 氨基 酸经 酶促缩 合反应 接入 寡肽 然后 用糖 基转移 酶完成 进 一步 的 寡糖 修饰 这 种 酶 促反 应 可 以 在 水 溶 液 中 进 行 并 且 只 需 要 最 小 限 度 的 保 护 1 但是酶存在 着来源单 一 不 易获取等 局限 性 此外底物 中肽链氨基酸顺序有可能会影响其修 饰效率 T o K i等口 以酶法将半乳糖胺连接到肽段 上合成 糖肽 时 发 现 反应 的产 率取 决 于 底 物 的结 构 和糖基 化两个 因 素 普 遍 较低 随着 DNA 技 术 的 发展和 研究 的不 断深 入 酶 将 在肽 修 饰 中发 挥 越来 越重要的作用 1 3 化学酶法耦合 采用化学和酶法相结合的化学酶法来进行肽修 饰研 究 可减少 化学试 剂 的过量使 用带来 的 污染 同 时也 保证 了温 和 条 件 下 酶 催 化 的产 率 J o h n s t o n e 等 1 2 固相合成 N 端共轭糖基 内吗啡肽一 1衍生物 再在糖 基转 移 酶 的催 化 下将 N一 乙酰 基 胺 基 葡糖 化 合物连接到化学法合成的糖肽上 形成 目标产物 N 端三糖肽内吗啡肽一 1 类似物 此合成过程只需最小 限度的保护 Wo n g等 1 以修饰 的硅胶 为固相载 体 此载体上用化学法快速合成肽键并酶法合成糖 苷键 成功合成 S ia l y l l e w is X抗原 2多肽修饰 的策 略 多肽修饰过程中 通常采用总体缩合策略 单元 构建策略以及天然化学连接 针对修饰过程 中肽链 的缩合与不同的修饰化基 团的结构之 间相互影响 常采 用不 同 的策略 2 1 总体 缩合 策略 总 体缩 合 策 略 是 指将 已制备 的多 肽链 与 目标 修饰 剂催 化结 合 以避 免肽 链 延 长过 程 中所用 试 剂 对修 饰剂 与肽段 连 接 效率 的影 响 以 糖肽 为 例 在 缩合过程中 先分别合成多肽和寡糖 再将多肽受体 与寡糖供体缩合形成 N一 或 O 一 糖肽 此策略可避免 肽链 延长过 程 中酸 性 去保 护 条 件 对 O一 糖 苷 键 的 影 响 但是直接糖基化肽链中的丝氨酸或苏氨酸还存 在着 很 大 的 困难 S e i t z等口 尝 试 了在 树脂 上 的 固 相糖 基化反应 合 成 采用 端 基 连接 烯 丙 基 氨基 甲酸 酯的乙酰基保护葡萄糖 与树脂上连有苏氨酸残基 的三肽 发生反 应 P d催 化切 除 后 发现 以 6 4 收 率 回收原 料 而产 物 总 收 率 只 有 4 目前 此 策 略 主 要 应用 在 糖 基 和 天 冬 酰 胺 相 连 的 N一 链 接 糖 肽 中 Da n is h e f s k y和他 的助 手 们 l 在 这方 面 做 了大量 的工作 如 对 HI Vg p l 2 0的混 合式 糖 肽 片段进 行 了 全合 成 2 2 单元 构建 策略 单元构建策略是指先制备不 同修饰基 团的单 元 再将逐个单元催化耦合 在糖基化修饰过程 中 由于氨基 酸与糖 之间 的糖苷 键在肽 链延 长之前 已形 成 位点与立 体选 择较 易控 制 目前 已成 为合成 的常 用方 法 特 别适用 于 固 相合 成 法 和合 成 含 有 多个 糖 基的糖肽l 此策略需预先在 液相 中合成糖基化 氨基 酸 B o n a ch e等 口 已研 制 出葡 萄糖 半 乳糖 乙酰 葡萄 糖胺 Gl cfl Gl c Ma n 拟 糖 物 核 糖 等 与 天 冬酰胺 相连 接 的构 建单 元 I l a r i a等 引进 微 波 技 术合 成 F mo c L As n Gl cAc4 缩 合 时 间从 1 6 2 4 h缩 短 至 5 min 1 0 0 W 7 0 极 大 地 方便 了 N一 糖 肽 的合 成 在策略 的选择 上 罗 施 中等 2 阳采 用 F mo c 固相 合成策略研究磷 酸化血 管紧 张素 的合成 选择 N 二 乙基一 二叔 丁 氧 基亚 磷 酰 胺 为磷 酸 化试 剂 总 体磷 酸化法 选用侧 链羟基 未保 护的 酪氨酸作 为 固 相合成 的单体 进行 肽 的合 成 磷酸 化单 体 法 以 F mo c Ty r P O B u 一 0H 为单体 进 行肽 的合 成 采 用总体磷酸化法和磷酸化单体法都得到了所需要的 磷酸化血管紧张素 采用总体法不但能够得到磷 肽 而且也 得到 了非磷 酸化 的多肽 但是 磷酸化 效率 低 产率约为 1 7 粗 品肽较难分离 而单体法提 供了更为直接的合成步骤 合成效率更高 副产物较 少 而且产率可达到 3 8 9 6 因此认为合成包含磷 酸 化酪氨酸的多肽采用磷酸化单体法更好 2 3 天然化 学连接 采用 固相 合成 时 往往 只能 得到得 到少 于 5 0个 氨基酸 的肽修 饰物 并 且 当 肽链 上 有 多个 修 饰 位点 第 4期 化 学 世 界 时 采 取 以往 的策 略 往 往 有很 多 困难 针 对 这 种 局 限性 发展 了一种 有 效 片段 连 接方 式 天然化 学 连接 n a t iv e ch e mica l l ig a t i o n NC L 它是 指 在 C端 的 肽硫酯 和一 个 N端 未保 护 的半 胱 氨 酸残 基 作 用 形 成 一 个 天 然 的 半 胱 氨 酸 将 两 个 片 段 连 接 起 来 B e r t o z z i和他的助手们 选用链烷磺胺作 为连接手 臂来 获取 c 端 肽 硫 酯 利 用 NC L策 略 将 2个 糖 肽 片段 连接 成具 有 8 2个 残 基 结 构 的抗 菌 糖 蛋 白伏 蝇 素 在环肽的合成中 蒋志龙等 应用 固相多肽合 成方法 以 B o c B z l 策 略 由 C端 向 N 端 逐 步延 长 肽 链 得 到线 性肽 硫酯 的肽 树脂 经 裂解 纯化 的线性 肽硫 酯 在 Na HC O 水 溶 液 通 过 硫 内酯 自发 地 经 过 S原子 到 N 原子 的酰 基迁 移而 形成 环肽 3多肽 修饰 的 类型 肽 修 饰物 种 类 繁 多 这里 主要 介 绍几 种 最 主要 的肽修 饰物 的最新 研究 进 展 3 1 P E G一 肽结 合物 目前 在 肽类 化 合物 的 P E G 修饰 研 究 中应 用 最 为 普 遍 的 是 单 甲 氧 基 聚 乙 二 醇 mP E G CH O一 C H 一 CH H 该修饰先 在 mP E G 的末端引 入羧基 氨基等活性基团 或者制 备经 mP E G修饰 的氨基酸衍生物 再 利用 固相或液相法将 其偶联到 肽序 列 中去 从 而 实 现 对 多 肽 的 N 端 C端 及 某 些 氨基 酸侧链 的聚 乙二醇 化修饰 B e n j a p o r n等 研 究 了不 同 的 P E G 相 对 分 子 质量 和不 同的连 接 方 式 对 P E G化 的胰 岛素 的生 物 活性 和耐热 稳定 性 的影 响 实 验 中选 取 了相 对 分 子 质 量 为 1 1 0 0 2 0 0 0 5 0 0 0 g too l 的三种 mP E G 然后 分 别经 过琥珀 酸酐 S A 氰尿 酰 氯 C C 对 甲苯磺 酰 氯 TC 活化 结果 发 现修饰 后 的胰 岛素 的生 物 活 力 有所 降低 但经较 高 相对 分 子质 量 的 mP E G修 饰 的胰 岛素对 酶与底 物 的结 合位点 表 现 出更 大 的亲 和 力 耐热 稳定 性 明显提 高 且胰 岛素 经过氰 尿 酰氯 活 化 的 C C mP E G 5 0 0 0 g too 1 修 饰后 具 近年来 随着 P E G化化学研究的逐渐深入 异 端双 功能 基 P E G衍 生 物 在 肽 化 学 上 也 有 了重 要 应 用 Ad a mo等 将 P E G 两 端 分 别 进 行 DMT 和 F mo c 保护 其中 DMT端接寡核苷酸链 F mo c 保护 端接肽 采用液 相法得到寡核 苷酸一 P E G 肽 的结合 物 s u等 在 P E G的末端采用 固相合成 策略成 功弓 1 人羧基 合成奥 曲肽一 P E G DS P E 二十八烷酰 磷脂 酰 乙醇胺 脑磷 酯 虽然合成多肽 的 P E G修饰在方法学上取得 了 一 定 的进展 但 在 实 际操 作 中还 是 存 在 问题 由于 P E G是一种聚合物 相对分子质量不能确定 由于 多肽 修 饰 的 P E G 相 对 分 子 质 量 通 常 为 5 0 0 0至 2 0 0 0 0 固相 合成 法 中修 饰 多肽 难 度 较 大 反 应速 率 很慢且产率很低 因此可考虑 在液相 中修饰 但这 势 必会 增加 后处 理 次 数 对 产 物 的 生 物 活性 将 造 成 不 利 的影响 3 2糖 肽 多 肽糖 基 化 修 饰后 的产 物 称 为糖 肽 可 作 为模 型工具 在 糖蛋 白的结构 和 功能 的科 学研究 上 发挥重 要作用 因此 糖 肽 的合 成 就显得 尤 为重要 目前 寡 糖 和 多 肽 链 之 间 的连 接 键 主 要 有 C 一 N 一 o一 和 糖 苷 键 其 中 N一 糖 苷 键 应 用 最 普 遍 2 糖苷 键 在化 学 上 的 不 稳 定 性 大 大 增 加 了肽 合 成 的复杂 性 糖 苷 键 通 常 会 在 酸性 条 件 下 水解 而且 对 于所 有 的糖 基 丝 氨 酸 和 苏氨 酸 衍 生 物 即使 是 在碱 性 很 弱 的条 件 下 也 有 发 生 消 除反 应 的 可 能性 N一 连接糖 基 化可 以 引人 一 糖 胺 通 过 酰 胺 与 羧 基结 合来 保护 天冬 酰胺 这 种方 法 不 需 要 特 别 的保 护糖 或肽 并且 可 以通 过糖 胺 与多 肽 链 中的 天冬 酰 胺 残 基结合 而 得到 N一 连接 糖肽 2 在 连 接糖 肽 的合成中 丝氨酸和苏氨酸的羟基作为糖基的受体 需要对糖和肽进行保护口 选择 性 地脱 除糖 基 氨 基 酸或 糖 肽 的保 护 基 仍 是 一个 很 长时 间都 没 有 解 决 的 问题 尽 管这 个 问题 早在 2 O世纪 7 O年代末就已经提出来 了 在不破坏 糖苷键 的条件 下 糖 基 氨基 酸衍 生物 的 z基 用 HB r AcOH 不 能 脱 除 尽 管 在 一 定 条 件 下 脱 除 B o c 残基是可以实现的 但在糖肽合成中 酸性条件 下的脱保护反应仍需先进行仔细的衡量 正如所提 及 的 对 碱敏 感 的糖基 丝 氨酸 或 苏 氨 酸衍 生 物 消 除反 应 进一 步 限制 了脱保 护 的反应 范 围 因此 保 护 基只 能在 温 和的或 中性 的反应 条 件下进 行 脱除 3 3磷 肽 蛋 白质 的磷 酸化 和去磷 酸化 几乎 调节 着 生命 活 动的所有过程 包括细胞的增殖发育和分化 神经活 动 肌 肉收缩 新陈代谢和肿瘤发生等 而磷肽则是 体现其母体蛋 白磷酸化过程结构变化的最好模型 根据磷酸化氨基酸残基的不 同 可将磷酸化多 肽 分 为 四类 即 N一 磷 酰化 多肽 o 一 磷 酰化 多 肽 酰基 磷酸肽和 S 一 磷 酰化多肽 0一 磷 酰化多肽是通过羟 基氨基酸的磷酸化形成的 如丝氨酸 苏氨酸或酪氨 酸 羟脯氨酸或羟赖氨酸磷酸 化 N一 磷 酰化多肽是 通过精氨酸 赖氨酸或组氨酸的磷酸化形成的 酰基 磷 酸 肽是通 过 天冬 氨 酸 或 谷 氨 酸 的磷 酸化 形 成 的 化 学 世 界 而 磷 酰化 多肽则 通过半 胱氨 酸磷酸 化形成 磷肽合成的常用方法是将合成好的未被磷酸化 的多肽与在磷酸激酶的作用下进行酶法磷酸化 但 是该 法对 于 不 能 被磷 酸 激 酶磷 酸 化 的 多 肽 并 不 适 用 迄 今为 止 磷 肽 及 其 类 似 物 的 化 学 合 成 仍 非 易 事 3 引 Z h o u等D 妇采 用 一 锅 法 用 三 氯 氧 化 磷 将 L 广 亮氨酸活化 7 2 h 然后用 1 4二氧杂环 乙烷将其 冷却 再加入二异丙氧基亚膦酸酯 D I P P H 和次氯 酸钠 Na C l O 混 合后反 应 得 到 N一 磷 酸 化 同源 肽 而异 源 肽 及 其 磷 酸 化 也 正 处 于 研 究 中 后 来 他 们口 又采用三偏 磷酸 钠在水 溶液 中进行 N一 磷酰 化 这种方 法 的关 键是要 控制 好溶 液 的 p H 磷酰 化 的方 法通 常 是 基 于亚 磷 酰胺 化 学 包 含亚磷酸化和氧化两步反应 赵 刚等 胡研究 了用 At h e r t o n T o d d反应 进 行 含 O 一 磷 酸 化一 L 一 酪 氨 酸 的 小肽的合 成 0 磷酸化 在无水 四氢 呋喃溶液 中进 行 室 温下搅 拌 2 4 3 6 h 反 应 产 物 经 柱 层 析 分 离 后产 率可达 到 5 5 6 7 相 比亚磷 酰 胺 法 此 法 不需要 1 H一 四唑 的催 化并 省去 了氧化 过程 3 4环肽 较短的线性肽在生物体 内易被各种生物酶迅速 降解 形成 环肽 可 提高 肽 的酶 和化 学 稳定 性 由于 环肽 没有 C端 和 N端 可 消除或 降低氨 肽 酶和 羧肽 酶的降解作用 从而提高了肽的抗酶解能力 同时由 于形成环状结构 增加了对构象的限制性 有可能增 加肽与受体的亲和力及选择性 提高活性 减少副作 用 3 是近年 来新 药开发 的新 方 向 环肽可分为两类 一类为均环肽 氨基酸之间均 以酰胺键 相连 另 一类 为杂 环肽 结 构 中除酰胺 键外 还有 酯键 醚键 硫酯键 和二 硫键等 3 4 1 均 环肽 均环 肽 实质 是 形 成分 子 内肽 键 的过 程 其影 响 成环因素是环的大小 含七个氨基酸残基 以上的多 肽都能顺利成环 六肽 五肽乃至更小的环肽合成很 困难 唐艳春等 3 5 选择从 云南繁缕 中分离 的一个 环五肽 G l y Al a T y r L e u Al a 为模 型肽 以其 研 制 的有机磷化合物 D E P B T为缩合试剂分别用液相法 和固相法 合成 了两个 不 同的线 型肽前体 并仍 以 D E P B T作为缩合试剂完成 了他们 的环化反应 得 到了预期的环五肽 但是产率只有 6 和 6 5 9 5 处 于很低的水平 并分析得 出环五肽 的合成关键在于 抑 制环 十肽 的生成 3 4 2 杂环肽 杂环肽的氨基酸残基之间存在的非酰胺键主要 是 酯键 和二硫 键 前 者形成 过程 与酰胺 键类 似 后 者 合 成过程 与均 环肽 迥异 实质 为 利 用氧 化 剂将 两 个 C y s的巯基 氧化成一 S 键 目前在多肽二硫键 的合成过程中 多采用先将 含有巯基的还原型多肽从树脂上裂解下来 再在液 相 中氧化 环合得 到 成环方 法主要 有 DMS O法 铁 氰化 钾法 碘氧 化法 空气氧化 法 和谷胱 甘肽氧 化法 等 而在树脂上直接氧化成二硫键则鲜有文献报道 迟玉石等 明以 R in k A mid e MB HA树脂为载体 采 用 F mo c t B u正交保护固相合成策略 运用微波照 射促进 先快速高效地合成得到载有催产素或赖氨 加压素还原型多肽的树脂 再将连接在树脂上 的各 还原 型多 肽分别 在微 波促进 条件下 和常 温条件 下通 过碘氧化法环合形成二硫键制得环肽 这种合成此 类环肽的方法具有快速高效和纯化方便的优势 整 个环肽的合成流程只需数小时 为此类环肽的大规 模 生产奠 定 了基 础 4结语 化学 修饰是 一种设 计 多肽 的重 要手段 迄 今为 止 已有一百多种肽及蛋 白质被修饰后在临床应用 中显示出优良性质 在免疫学 诊断学和生物催化等 诸 多领域 得到越 来越 广泛 的应用 化学 法和酶 法 的 结合 化学液相法和固相法的耦合技术 同时辅助微 波辐射手段 将会成为多肽修饰 中重要 的策略和技 术支持 经过化学修饰的多肽不仅维持较高的生物 活性 而且能够有效的克服免疫原性和毒性方面的 缺点 同时赋予多肽一些新的优 良性能 如果它与基 因工程 蛋 白质工程相结合 在生化药物研究与开发 中将 有更 好 的发展前 景 参 考文献 1 Ve r o n e s e F M P a s u t G D r u g D is e o v T o d a y J 2 0 0 5 1 0 2 1 1 4 5 1 1 4 5 8 2 孙丽艳 褚泰 伟 王 毅 等 高等 学 校化 学学 报 J 2 0 0 7 2 8 4 6 2 1 6 2 6 3 P a s u t G Ve r o n e s e F M A d v D r u g D e l i v e r R e v J 2 0 09 61 11 77 11 8 8 4 李佩华 王卫 国 杨 明 等 化 学世界 J 2 0 0 7 4 8 8 4 6 8 5 0 3 5 Ma n a b e S S u g i o k a T I t o Y T e t r a h e d r o n L e t t J 2 0 07 4 8 8 49 85 3 6 Z w e y t i e k D P a b s t G Ab u j a P M e t a 1 B i o e h i m B i o p h y s Ae t a J 2 0 0 6 1 7 5 8 1 4 2 6 1 4 3 5 7 Ma k P P o h l J Du b in A e t a 1 I n t e r J o f A n t i mi cr o b i a l A g e n t s J 2 0 0 3 2 1 1 3 1 9 8 A mo r e A v a i l He e r b e e k R Z e e p N e l a 1 J Or g C h e m J 2 0 0 6 3 7 1 1 8 5 1 1 8 6 0 第 4 期 9 1 O 1 1 1 2 1 3 1 4 1 5 1 6 2 1 7 1 8 1 9 2 O 化 学 世 界 刘洪强 林浩 田桂 杰 等 有机 化 学 J 2 0 0 3 23 8 80 4 8 08 Wa n g I X C a r b o h y d r R e s J 2 0 0 8 3 4 3 1 5 0 9 1 52 2 杜宇国 孔繁祚 有机化学 J 1 9 9 6 1 6 4 9 7 5 0 6 J o h n s mn e K I Di e e k e l ma n n M J e n n i n g s M P e t a 1 Cu r r D r u g D e l i v e r J 2 0 0 5 2 3 2 1 5 2 2 Wi t t e K S e it z O Wo n g C H J Am C h e m S o c J 1 99 8 1 20 1 97 9 1 98 9 S e i t z O Ku n z H J O r g C h e m J 1 9 9 7 6 2 4 81 3 8 26 M a nda l M Du dkin V Y Ge ng X e t a 1 An ge w C h e m I n t E d J 2 0 0 4 4 3 2 5 5 7 2 5 6 1 Ge n g X Du dk in V Y M a nd al M e l a1 An ge w C h e m I n t E d J 2 0 0 4 4 3 2 5 6 2 2 5 6 5 Ra g u p a t h i G Ko id e F Liv in g s t o n P 0 e t a 1 J Am C h e m S o e J 2 0 0 6 1 2 8 2 7 1 5 2 7 2 5 Bona che M A N u t i F I r e Che va l ie r I s a ad A e t a1 Te t r a h e d r o n I e t t 2 0 0 9 5 0 4 1 5 卜4 1 5 3 Pa ol in i I Nut i F Ba r be t t i F e t a1 Te t r a he dr o n Le t t J 2 0 0 7 4 8 2 9 0 1 2 9 0 4 罗施中 赵 刚 李 艳梅 等 高 等 学校 化 学 学 报 J 2 0 0 2 2 3 5 8 5 2 8 5 4 2 1 S h i n Y Wi n a n s K A B a ck e s B J e t a 1 J Am C h e m S o e J 1 9 9 9 1 2 1 1 1 6 8 4 1 1 6 8 9 2 2 蒋志龙 郄 建 坤 梁 远 军 J 2 0 0 7 2 8 5 8 7 7 8 8 0 r 2 3 T i e e t h a r n n l a t h u r o t B 25 5 Wu n g s i n t a we e k u l J e t a 1 I n t J P h a r m J 2 0 0 8 357 2 5 2 2 59 2 4 3 A d a mo I B a l l ico M C a mp a n e r P e t a 1 E u r J Or g C h e m J 2 0 0 4 2 6 0 3 2 6 0 9 2 5 2 6 2 7 2 8 2 9 3 O 3 1 3 2 3 3 3 4 3 5 1 等 高 等 学 校化 学 学 报 3 6 ova r t 1 a r n p0 r n C S u J C Ts e n g C L Ch a n g T G e t a 1 B i o o r g Me d C h e m L e f t J 2 0 0 8 1 8 4 5 9 3 4 5 9 6 Gu o Z W S h a o N Me d R e s Re v J 2 0 0 5 2 5 6 6 55 67 8 S j o l i n P K ih l b e r g J J Or g C h e m J 2 0 0 1