基因组序列的功能解析PPT课件.ppt

1 第一节在基因组中识别基因 一 识别候选基因 1 生物信息分析基因的序列特征 双链DNA有6个ORFs阅读方式 1 开放阅读框架 ORF openreadingframe 从起始密码至终止密码 2 2 ORF的平均长度 大肠杆菌 317个密码 酵母菌 483个密码 人 约450个密码 在原核生物中直接寻找ORF有效 在真核生物中不能直接寻找ORF 3 在真核生物中不能直接寻找ORF的原因 62 的人类基因被间隔开 有内含子 断裂基因 许多外显子短于100个密码 甚至有些少于50个密码 4 3 对ORF扫描软件的修正 1 密码偏爱 在某种生物中并不是所有密码都被均等使用 2 外显子 内含子边界 3 上游调控序列 CpG岛 40 50 的人类基因和脊椎动物基因中 5 上游的GC含量高 5 4 寻找同源序列 到其他模式生物中寻找同源序列 如果模式生物的同源序列已经被鉴定为某个功能基因的话 主要用途是对新序列进行功能分析 6 2 通过实验技术识别基因 检测是否转录RNA分子 起始密码上游的数10个碱基 终止密码下游的上百个碱基 包括 7 1 核酸杂交实验 1 Northernblotting 选择性剪接或者多基因家族都能产生多个RNA转录物 mRNA一般都是从一个组织或器官中得到的 8 2 zoo blot gardenblot 用Southernblot把一个物种的DNA片断与相关的其他物种的编码基因DNA杂交 Probesample 9 2 cDNA测序 3 PCR技术 从cDNA文库 cDNAlibrary 中筛选 1 RT PCR reversetranscriptasePCR 2 RACE rapidamplificationofcDNAends 10 RACE 11 3 寻找外显子 内含子边界 1 mRNA DNA杂交 2 外显子捕获 需要特殊的载体 12 二 确定某个基因的功能 1 生物信息学分析预测基因功能 通过生物信息学分析和实验研究 同源性查询 原理 功能相似的基因具有相似的序列 1 序列同源性反映了共同祖先的进化关系 直系同源体 Orthologous 来自不同的物种的同源基因 旁系同源体 Paraloguos 来自同一个生物的同源基因 13 2 同源性分析揭示基因或片断的功能 可以分析DNA序列 但一般需要把DNA转化成氨基酸序列进行分析 核酸序列76 相同 偶然事件 氨基酸序列只有28 相同 1 完整序列比对 14 2 部分序列分析 寻找共同拥有的结构域 domain 如tudordomain 结构域是序列功能的核心 15 3 同源性分析在酵母基因组计划中的应用 30 是通过同源性分析预测的 酵母基因组含有约6000个基因 其中30 是通过常规的遗传实验确定的 16 2 用实验确定基因功能 1 通过基因失活分析基因功能 将基因突变 观察由此引起的表型变化 1 同源重组失活 Lossoffunction 17 酵母的删除盒 用抗生素抗性基因替换酵母的某一处基因组序列 18 基因敲除 knockout 小鼠 胚胎干细胞 EScells 注射到小鼠胚胎 嵌合体 互相交配 纯合体敲除小鼠 有些基因是至死基因 只能得到杂合体 19 2 非同源重组的基因失活 1 转座子标签 把转座序列插入到基因中 使基因失活 让转座子带上应答元件 在外界的诱导下转座 缺点 不能准确失活一个基因 因为转座是个随机事件 20 人工诱导转座 给Ty1的上游加上半乳糖诱导的启动子 22 2 RNA干涉 RNAinterference 与目标基因序列互补的短双链RNA能降解目标基因的mRNA 在线虫1号染色体上 2769个预测的基因中的2500分别被进行了RNA干涉 23 缺点 在哺乳动物中只能对单细胞进行处理 因为RNA在体内的存在时间有限 24 2 通过基因超表达分析基因功能 Gainoffunction 25 3 未知基因编码的蛋白质功能的精细研究 1 定向突变 删除或改变基因序列中的一部分 Site directedmutagenesis 体外定点突变 删除一段插入一段突变个别碱基 26 1 寡核苷酸定点突变 27 2 同源重组导入突变基因 两步取代 第一步 用标记基因取代原基因 第二步 用突变基因取代标记基因 失去标记 获得标记 28 2 报告基因 Reportergenes 和免疫组织化学 reportergenes举例 确定基因表达的部位和时空特征 29 1 报告基因 2 免疫组织化学 测定待测基因的启动子 确定基因产物在细胞内的位置 30 研究不同组织的不同发育阶段 不同疾病的转录物和翻译产物 三 研究基因组的整体活性 31 1 研究转录物组 1 基因表达系列分析 SAGE 鉴定细胞中的全部mRNA的相对丰度 把cDNA序列与基因组序列比较 把mRNA转为cDNA 把cDNA文库中的每个克隆都测序 转录物组学 transcriptomics 是一门在整体水平上研究细胞中基因转录的情况及转录调控规律的学科 32 基因表达系列分析 SAGE 12 bp短序列足够特异 412 16777216bp BsmFI切割10 14bp的下游 5 AGCT 3 从每个cDNA末端释放平均长度12bp 33 2 基因芯片 cDNA DNA 34 2 研究蛋白质组 研究一个细胞中全部蛋白质的技术 1 蛋白质组学 蛋白质电泳 第一向 区分分子量的标准电泳 第二向 区分电荷的标准电泳 双向凝胶电泳 35 质谱 鉴定蛋白质点的性质 基质辅助激光解吸飞行时间质谱 MALDI TOF 质荷比 Mass to chargeratio 分析分子量 然后推导氨基酸组成 36 37 2 鉴定蛋白质的相互作用 如果知道位置蛋白与某个已知蛋白相互作用的话 就能推测其功能 噬菌体展示 噬菌体展示文库 将未知基因与噬菌体表面蛋白融合 表达到噬菌体表面 38 39 酵母双杂交系统 40 3 蛋白质相互作用图 画出蛋白质组中所有组分的相互作用图 细菌Helicobacterpylori 画出了1200个相互作用 占蛋白质组的一半 酵母1870个蛋白之间的2240