脓汁和粪便标本中病原菌的检测.ppt

自然界中的微生物 已经发现的微生物超过13万5千种 被认为非常危险的有600种 在人间传染的病原微生物380种 它们存在于地球的各个角落 从寒冷的极地到炎热的赤道 从4 2千米地层深处到85千米高空 芽孢 均有它们的踪迹 空气 水 土壤 人体的体表以及与外界相通的腔道 均有不同种类和数量的微生物存在 存在于人体消化道的细菌超过800种 数量可达100万亿 1014 菌体重量1 1 5公斤 医学微生物学实验综合性实验三P38ComprehensiveExperiment3 空气与人体体表细菌学检查空气的细菌学检查P38手指皮肤的细菌学检查P41 空气的细菌学检查 空气是人类赖以生存的环境之一 也是重要的疾病传播媒介 空气中的病原菌主要来自病人的排泄物和分泌物 这些污物 因风吹 以及人类日常活动 以气溶胶的形式悬浮于空中 使空气受到污染 环境 不利于微生物生长 种类 主要是病毒 真菌和细菌 在医院 公共场所致病菌的数量比较多 作用 可迅速全球传播 危害 引起培养基 生物制品的污染 病原菌引起呼吸道传染病 实验方法 自然沉降法 根据空气中细菌气溶胶粒子 在地心引力的作用下 以垂直的自然方式沉降到培养基表面 培养以后 计数菌落形成单位 colonyformingunit CFU 了解空气的污染情况 实验步骤 每组1个营养琼脂平板 选择采样地点 实验室 卫生间或任选地点 将平板盖打开 盖朝下放置在平板旁边 平板暴露于空气中15分钟 然后盖上盖子 作标记 37 温箱培养24小时 观察结果 CFU m3 50000N AT 86N 直径7cm平板 N 平板上的菌落数 A 平板面积 平方厘米 T 采样时间 分钟 平板盖打开 盖朝下放在平板旁 琼脂平板暴露15分钟 空气的细菌学检查暴露法 ExposureMethod 手指皮肤的细菌学检查P41 在日常生活中 手的接触范围广 使用频率高 受到污染的机会也最多 一只外观比较 干净 的手 可携带10万个细菌 200多种病毒 因此 经手传播的疾病很多 范围很广 包括肠道传染病 部分呼吸道传染病 皮肤传染病 以及一切可经手传播的疾病 常住菌 存在于皮肤表面 毛囊和皮脂腺 种类和数量比较恒定 附着在皮肤上比较牢固 用一般洗手方法 常不易去除 暂住菌 存在于皮肤表面经常暴露的部位 暂住菌是外来的非正常菌群 种类和数量不定 引起人类致病的通常是暂住菌 医务人员 经常与病人接触 可传播病菌 虽然病菌的直接来源是患者 但是造成病菌扩散的主要途径则是气溶胶和医务人员的手 经常洗手和消毒是控制医院内交叉感染的主要方法 预防感染措施中 最简单又十分有效的方法就是洗手 据测定 只用自来水洗手可使暂住菌总数减少40 用肥皂洗手可减少80 以上 洗手 常规的洗手方法 甲和丙操作 将手充分浸湿 涂抹肥皂或洗涤液 反复搓揉双手 搓揉时间不应少于30秒 用流水冲洗干净 整个洗手过程不少于1分钟 能有效地去除大多数手上的暂住菌 医学微生物学教学实验室标准洗手方法 乙和丁操作 用流动的水冲洗 将手充分浸湿 涂抹肥皂 洗涤液 分别搓擦10 15次 保持双手低于肘部 流水冲洗一分钟以上 1 掌心对掌心搓擦2 手指交错掌心对手背搓擦3 手指交错掌心对掌心搓擦 4 两手互握互搓指背5 拇指在掌中转动搓擦6 指尖在掌心中搓擦 1 掌心对掌心搓擦2 手指交错掌心对手背搓擦3 手指交错掌心对掌心搓擦 4 两手互握互搓指背5 拇指在掌中转动搓擦6 指尖在掌心中搓擦 1 3 2 4 1 3 2 4 手指皮肤的细菌学检查 甲和乙 丙和丁共用1个平板 上 甲 丙 常规洗手下 乙 丁 标准洗手 甲 丙 乙 丁 丙 丁 第1格为洗手前 第2格为洗手后 第3格为消毒后 第4格空白对照 在培养基表面触摸2 3厘米 医学微生物学实验综合性实验一 P2 脓汁和粪便标本中病原菌的检测 二 细菌的分离与培养P7 目的要求 掌握分离 纯化微生物的基本操作技术 平板划线分离法StreakPlateMethod 借助于划线 将混杂的多种细菌 在平板表面分散成单个细菌 并固定在某一点上 培养以后细菌各自分裂繁殖 形成肉眼可见的细菌集团 单菌落 Colony 在固体培养基表面或基内 由单个细菌在局部位置不断增值 形成肉眼可见的细菌集团 称为单菌落 ColonyFormingUnits 由单个或聚集成团的多个菌体 在固体培养基上生长繁殖 形成一个肉眼可见的细菌集落 称为菌落形成单位 Lawn 在固体培养基表面 由许多菌落融合在一起形成一片密集的的细菌群落 称为菌苔 平板分区划线分离方法步骤 5区 接种环烧灼灭菌 以免污染标本 取标本在平板表面上方密集涂布5 10mm2 烧掉接种环上多余的标本 火焰背面烤干 烧灼 晃动平板 当看到平板表面象镜面有反光的时候 保持这个角度 划线时就能看清划线痕迹 以便控制划线 接种环与平板呈30 40度角 通过密集涂布部分3次 使接种环重新沾上少量标本 细菌 然后在平板表面 以曲线的形式 作大幅度来回连续划线 边划边退 线段要划得长而密集 每区划线不少于30条 转动平板 接种环通过第一区1次 同样的方法划第二区 如此依次划完3 5区 接种环烧灼灭菌 以免污染环境 将平板倒置37 培养18 24h 观察结果 充分利用平板面积 不能划破琼脂 第四区 第一区 正确correct 错误incorrect 每区划线不少于30条 整个平板划线不少于150条线 37 培养24小时 37 培养24小时 小组分工 甲 脓汁标本 营养琼脂平板 nutrientagarplate 乙 脓汁标本 营养琼脂平板 nutrientagarplate 丙 粪便标本 伊红美蓝平板 eosinmethyleneblueplate 丁 粪便标本 伊红美蓝平板 EMBplate 甲乙4丙丁 甲乙3丙丁 甲乙2丙丁 甲乙1丙丁 甲乙5丙丁 甲乙8丙丁 甲乙7丙丁 甲乙6丙丁 甲乙10丙丁 甲乙9丙丁 讲台 左 右 杆12 14cm 环直径2 4mm 柄10cm 接种环inoculatingloop 杆12 14cm 柄10cm 针长4 6cm 接种针straightwireinoculatingwire inoculatingneedle 接种环烧灼灭菌FlameLoop 使用前 直接在酒精灯上烧灼灭菌 把环和金属丝烧红即可 接种环3 5秒钟冷却 使用后 先在火焰背面将把环上标本烤干 再烧灼灭菌 以免标本汽化 爆烈四溅 污染环境 金属杆快速通过火焰2 3次 杀灭表面微生物 酒精灯无菌操作区 外焰 又称氧化焰 火焰呈淡紫色 温度较高 无菌操作区 火焰周围10 20cm范围内 环面水平离开液面 快速6ul 慢速2ul 环面垂直离开液面 快速3ul 慢速1ul 接种环取液体标本的方法 环直径3mm 无菌取材基本步骤 在火焰旁边 左手斜持标本管下端 右手小指夹住试管棉塞上端 缓慢拔出棉塞并夹持之 棉塞下端不得接触到管口外任何物体 管口迅速通过火焰3次 取标本 管口通过火焰三次 塞棉塞 接种环 平板的握持方法 生物安全警告 接种环接种平板一次 可产生几十个微生物气溶胶颗粒 气溶胶粒径 100um沉降很快 50um在0 4s内扩散开 5um通过呼吸道直接到达肺泡 Pike博士对实验室感染统计分析结果发现 不明原因的感染高达82 大多数是气溶胶在空气中扩散引起的 实验时应坐着 在火焰周围10 20厘米内操作 保持安静 有序 尽量少说话 少走动 以免感染病原菌 三级生物安全防护 思考题 为何取链球菌作为空气的卫生指标之一 为什么金黄色葡萄球菌是医院内感染常见的重要病原菌 为什么接种环使用前后必须烧灼灭菌 忽略了有什么危害 做细菌培养时 平板为什么要倒置 培养细菌的