灭菌与空气净化.ppt

第二次作业1 工业发酵常用的碳源有哪些 常用的糖类有哪些 2 常用的无机氮源和有机氮源有哪些 各类氮源在发酵培养基中有什么作用 3 种子扩大培养的一般流程是怎样的 4 影响种子质量的因数有哪些 第四章发酵工业的无菌技术 4 1发酵工业的无菌技术一 几个概念1 灭菌 用物理或化学方法杀死或除去物料或设备中所有微生物 包括营养细胞 细菌芽孢和孢子 2 消毒 用物理或化学方法杀死空气 容器内外及环境中的微生物 一般只能杀死营养细胞 3 除菌 用过滤的方法除去空气或液体中的微生物及其孢子 二 常用的无菌技术和方法1 干热灭菌法2 湿热灭菌法3 射线灭菌法4 化学药剂灭菌法5 过滤除菌法 4 2发酵培养基及设备管道灭菌4 2 1湿热灭菌原理一 微生物的热阻1 致死温度 杀死微生物的极限温度2 致死时间 在致死温度时 杀死全部微生物所需的时间3 热阻 指微生物在某一特定条件 温度和加热方式 下的致死时间 表4 3几种微生物对湿热的相对抵抗力微生物名称大肠杆菌细菌芽孢霉菌孢子病毒相对抵抗力130000002 101 5二 微生物的热死规律 对数残留定律实验证明 微生物营养细胞的均相热死灭动力学符合化学反应的一级反应动力学 即 N 任一时刻的活菌数 个 t 灭菌时间 min K 比热死速率常数 min 1 取边界条件t0 0 N N0 对 1 积分得 4 2 2培养基灭菌温度和时间的选择高温短时灭菌4 2 3培养基的灭菌方法 1 分批灭菌也称实消 实罐灭菌 间歇灭菌 是指将配制好的培养基输入发酵罐内 直接通入蒸汽将培养基和所用设备一起进行灭菌的操作过程 在发酵罐中进行实罐灭菌 是典型的分批灭菌 全过程包括升温 保温 降温三个过程 2 连续灭菌也称连消 指培养基在向发酵罐输送的同时 在罐外经过一套灭菌设备连续的加热灭菌 冷却后送入空消后的发酵罐的灭菌法 连续灭菌的流程有3种 a 喷射加热连续灭菌流程 b 喷淋冷却连续灭菌流程 c 薄板换热器连续灭菌流程 3 固体培养基灭菌固体培养基也和液体培养基一样 要先蒸煮灭菌 但固体培养基呈粒状 片状或粉状 流动性差不易翻动 吸水加热容易成团 冷却困难 针对这些特点设计的转鼓式灭菌机常用于酒厂 酱油厂 该设备能承受一定压力 装料后旋紧进出口盖 就如同密封容器 转鼓以0 5 1r min徐徐转动 培养基得到翻动 蒸汽沿轴心通入加热培养基 达到一定温度后进行保温灭菌 灭菌完毕用真空泵沿空心轴抽真空 转鼓内压力降低 培养基冷却 连续灭菌与分批灭菌的比较 1 连续灭菌的优缺点 优点保留较多的营养质量容易放大较易自动控制 缩短灭菌周期 发酵罐利用率高 蒸汽负荷均匀 在某些情况下 可使发酵罐的腐蚀减少 缺点设备比较复杂 投资较大 染菌几率大 对蒸汽要求高 不适用大量固体物质的灭菌 2 分批灭菌的优缺点 优点设备投资较少染菌的危险性较小人工操作较方便对培养基中固体物质含量较多时更为适宜 缺点灭菌过程中蒸汽用量变化大 造成锅炉负荷波动大 一般只限于中小型发酵装置 4 2 4设备和管道的灭菌1 种子罐 发酵罐 计量罐 补料罐等的空罐灭菌及管道灭菌2 空气总过滤器和分过滤器灭菌3 种子培养基实罐灭菌4 发酵培养基实罐灭菌5 发酵培养基连续灭菌6 补料实罐灭菌 4 2 5影响培养基灭菌的其他因素影响培养基灭菌除了所污染杂菌的种类 数量 灭菌时间和温度外 培养基成分 pH值 培养基中颗粒 泡沫等对培养基灭菌也有影响 1 培养基成分油脂 糖类及一定浓度的蛋白质可增加微生物的耐热性 另一些物质 如高浓度的盐类 色素等可削弱其耐热性 2 pH值培养基pH为6 0 8 0时 微生物耐热性好 pH 6 0时氢离子容易渗入微生物细胞内 从而改变细胞的生理反应促使其死亡 所以培养基的pH值越低 灭菌所需时间越短 3 培养基的物理状态颗粒小灭菌容易 颗粒大灭菌难 当培养基中有直径大于1mm的颗粒物则明显影响灭菌效果 蒸汽很难渗透到颗粒内部 称为 灭菌不透 应过滤除去 4 泡沫泡沫中的空气形成隔热层 使传热困难 热难穿透过去杀灭微生物 5 微生物细胞的含水量含水越多 微生物越易死亡 蛋白质易变性 6 微生物细胞的菌龄菌龄越老则越不易死亡 蛋白质不易变性 7 空气排除情况空气排出越彻底 微生物越易死亡 4 2 6灭菌时间的计算 1 分批灭菌时间的计算 例4 1 有一发酵罐内装40m3培养基 在121 进行实罐灭菌 原污染程度为每1mL有2 105个耐热细菌芽孢 121 时灭菌速率常数为1 8min 1 求灭菌失败机率为0 001时所需的灭菌时间 有一发酵罐 内装80m3培养基 在121 温度下进行实罐灭菌 设每毫升培养基中含有耐热菌的芽孢数为1 25 107个 大肠杆菌为5 107个 霉菌为2 5 107个121 时灭菌速率常数为0 0287s 1 试求灭菌失败几率为0 001时所需的灭菌时间 2 连续灭菌时间的计算 例4 2 若将例3 1中的培养基采用连续灭菌 灭菌温度为131 此温度下灭菌速率常数为15min 1 求灭菌所需的维持时间 4 3空气除菌 4 3 1空气除菌的方法1 加热灭菌2 静电除菌3 介质过滤除菌 4 3 2空气过滤除菌的原理和介质按照过滤除菌机理不同 过滤除菌分为 1 绝对过滤 尘埃或M直径 过滤介质孔径2 相对过滤 尘埃或M直径 过滤介质孔径这种相对过滤又称为深层介质过滤 一 空气过滤除菌的原理1 布朗扩散作用2 拦截作用4 重力沉降3 惯性碰撞5 静电吸引 当气流速度较大时 惯性撞击起主要作用 除菌效率随气流速度增加而上升 当气流速度较小时 布朗扩散起主要作用 除菌效率随气流速度增加而降低 当气流速度中等时 拦截起主要作用 当气流速度过大时 已被捕集的微粒又被湍动的气流夹带返回气流中 除菌效率下降 二 空气过滤除菌的介质1 纤维状或颗粒状介质 棉花 玻璃纤维 活性炭这类过滤介质对0 3 m以下的颗粒过滤效率仅为99 难以满足工业发酵的无菌要求 需多次过滤 缺点 体积大 占用空间大 操作困难 装填介质费时费力且松紧度不易掌握 空气压力降大 介质灭菌和吹干耗用大量的蒸汽和空气 深层棉花 活性炭过滤器的结构 2 过滤纸类介质 超细玻璃纤维纸 这类介质过滤效果较好 对空气的阻力和压力降较小 缺点是强度不够 特别是受潮后强度更差 石棉滤板 优点是湿强度大 受潮时不易穿孔或折断 能耐受蒸汽反复杀菌 使用时间长 缺点是由于纤维直径大 过滤效率不高 只适用于空气分过滤器 滤棒 3 烧结材料类介质烧结金属 烧结陶瓷 烧结塑料等 4 新型过滤介质 能除去全部M 但不能除去噬菌体的过滤介质 主要有膜孔小于0 22um的聚偏四氟乙烯 PVDF 和聚四氟乙烯 PTFE 膜材 能除去小至0 01um的微粒 可除去噬菌体 主要有Bio X滤材和膨化聚四氟乙烯 4 3 3空气过滤除菌的流程一 空气的预处理 空气的粗滤空气的压缩和稳压压缩空气的冷却压缩空气除油除水压缩空气的再加热 二 空气净化的一般流程 空气吸气口粗过滤器空压机贮罐冷却器分离器加热器总过滤器分过滤器无菌空气1 冷热空气直接混合的除菌流程 2 高效前置过滤器除菌流程空气吸气口粗过滤器高效前置过滤器空压机贮罐冷却器分离器加热器总过滤器 3 两级冷却 分离 加热的除菌流程空气吸气口粗过滤器空压机贮罐冷却器旋风分离器冷却器丝网分离器加热器总过滤器 三 提高过滤效率的措施减少进口空气的含菌数量 正确选择进风口 提高进口空气的采风位置 即高空采