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3.1菊花的组织培养1、植物组织培养的相关概念(1)细胞分化:植物的个体发育过程中,细胞在_、_和_上都会出现稳定性的差异,形成这些差异的过程就叫做细胞分化。细胞分化是基因_的结果。(2)细胞的全能性:_的植物细胞仍然具有发育成为_的潜能。细胞全能性是植物组织培养的基本原理。(3)愈伤组织:由离体的植物器官、组织或细胞在一定的培养条件下经过_过程形成的组织,就叫愈伤组织,愈伤组织的细胞排列疏松而无规则,是一种_的呈无定形状态的_。(4)脱分化:由_的植物组织或细胞产生_的过程,称为脱分化,又叫去分化。(5)再分化:脱分化产生的愈伤组织继续进行培养,又可以重新分化成_,这个过程叫做再分化。(6)外植体:用于离体培养的植物器官或组织片段。2、植物组织培养的基本过程离体的植物组织、器官或细胞( )愈伤组织( )根、芽等器官人为使用植物激素控制 移植试管苗完整的植物体3、影响植物组织培养的因素:(1)内部因素:不同的植物组织,培养的难易程度差别很大。同种植物材料,_ ,_等也会影响实验结果。菊花的组织培养,一般选择_的茎上部新萌生的侧枝。(2)外部因素:营养条件:常用的是_ 培养基,其主要成分包括: 大量元素,如_;微量元素,如_;有机物,如_等。植物激素:植物激素中_ 和_ 是启动细胞分裂、脱分化和再分化的关键性因素。_、_以及_等,都会影响实验结果。环境因素: _ 、_ 、 _等条件也能影响植物组织培养。菊花组织培养,一般ph控制在 _ ;温度控制在 _ ;每天用日光灯照射_小时。4、实验操作过程:(1)制备ms固体培养基:实验室一般使用4保存的配制好的培养基母液来制备配制各种母液:配制母液时,大量元素浓缩_ ,微量元素浓缩_ 。常温保存。激素类、维生素类以及用量比较小的有机物可以按照1mg/ml的质量浓度单独配制母液。用母液配制培养基时,需要根据各种母液的浓缩倍数,计算用量。配制培养基:配制1lms培养基时,将称量好的琼脂加入800ml蒸馏水,加热熔化,然后加入蔗糖30g,依次加入母液,定容至1000ml。_,然后分装到锥形瓶中,每瓶分装_。灭菌:_。(2)外植体消毒:选取菊花茎段时,要取 _。无菌技术包括培养基消毒灭菌和植物材料(外植体)的消毒灭菌。对培养材料进行表面灭菌时,一方面要考虑_;另一方面还要考虑植物材料的_。不同药剂、不同植物材料,甚至不同器官要区别对待。过程:流水冲洗软刷刷洗流水冲洗过程:流水冲洗软刷刷洗流水冲洗_无菌吸水纸吸干外植体表面体积分数为_的酒精中摇动23次,持续_无菌水清洗无菌吸水纸吸干外植体表面质量分数为0.1的_溶液中12min无菌水中至少清洗3次(3)接种:接种时,左手持锥形瓶,右手拉开捆扎瓶口的绳子,并将封口膜攥于右手手心,以避免_。插入时应注意_,不要倒插。(4)培养:接种后的锥形瓶最好放在_中培养。培养期间定期消毒,温度控制在18-22,并且每天用日光灯光照12h(5)移栽(6)栽培:附:一般来说,容易进行_的植物,也容易进行组织培养。难点:1、 生长素和细胞分裂素的使用(1)使用顺序:先用生长素,后用细胞分裂素,有利于_。 先用细胞分裂素,后用生长素,细胞_。 同时使用,_。(2)使用量:生长素用量比细胞分裂素用量,比值高时,有利于_,抑制_;比值低时,有利于_,抑制_;比值适中时,_。2、植物组织培养过程中,为什么要进行一系列的消毒、灭菌,并且要求无菌操作? 植物组织培养所利用的植物材料体积小,抗性差,对培养条件要求较高,用于植物组织培养的培养基同样适合某些微生物生长,而培养基一旦被污染,会导致实验前功尽弃,因此要进行严格无菌操作。3、在选取菊花茎段的时候,为什么要选取生长旺盛的嫩枝?外植体的生理状态是成功进行组织培养的重要条件之一,生长旺盛的嫩枝生理状况好,容易诱导_。3.11、(1)形态 结构 生理功能 选择性表达 (2)高度分化 完整个体 (3)细胞分裂 高度液泡化 薄壁细胞 (4)高度分化 愈伤组织 (5)根或芽等器官 2、脱分化 再分化3、(1)材料的年龄 保存时间 未开花植株 (2) ms n、p、k、ca、mg、s ;b、mn、cu、zn、fe、mo、i、co; 甘氨酸 烟酸 肌醇 维生素 蔗糖 生长素 细胞分裂素 激素的浓度 使用的先后顺序 用量的比例 ph 温度 光照 5.8 18-22 124、(1)10倍 100倍 调节ph 50ml或100ml 培养基及其他器械高压蒸汽灭菌 (2)生长旺盛的嫩枝 药剂的消毒效果 耐受能力 20min 70% 67s 氯化汞 (3)封口膜接触瓶口的一面被污
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