生化检验肝功 ppt学习课件.ppt

肝功能常规生化检验 1 2 3 主要内容 肝功检测项目 肝十二项 AST 谷草转氨酶 ALT 谷丙转氨酶 D BIL 直接胆红素 T BIL 总胆红素 TP 总蛋白 ALB 白蛋白 GLOB 球蛋白 ALP 碱性磷酸酶 GGT 谷氨酰基转移酶 CHE 胆碱酯酶 TBA 总胆汁酸 PALB 前白蛋白 4 肝功能检测 肝脏的基本功能肝脏的代谢功能肝脏的生物转化功能肝脏的分泌与排泄功能 5 肝脏的代谢功能 接受来自消化道的各种物质合成除 球蛋白以外几乎所有的血浆蛋白合成胆汁酸加工和处理体内产生或外界进入的非营养物质肝脏是多种激素在发挥调节作用后降解的主要部位 6 肝脏的生物转化功能 某些生物活性物质 代谢终产物 外界异物 氧化 还原 水解 剩余物质 结合 葡萄糖醛酸硫酸氨基酸 增加溶解度 排出体外 甲基化 乙酰化 排出体外 排出体外 7 肝脏的分泌与排泄功能 胆固醇 合成 初级胆汁酸 胆酸鹅脱氧胆酸 胆汁 结合形式 大部分 小肠 回肠末端 门静脉 95 重吸收 结合胆汁酸 经细菌分解形成次级胆汁酸 8 9 血清转氨酶的测定 ALT 谷丙转氨酶 各器官中按含量多少依次为 肝脏 肾脏 心脏 骨骼肌等 在肝细胞中主要存在于细胞质中 只有少量在线粒体中 肝细胞中ALT活性比血清高2850倍 AST 谷草转氨酶 各器官中按含量多少依次为 心脏 肝脏 骨骼肌 肾脏等 在肝细胞中约80 存在于线粒体中 约20 存在于胞质中 血清中AST和ALT的活性比值约为1 15参考值AST 37U L 37 酶速率法 ALT 42U L 37 酶速率法 AST ALT1 15左右 10 11 12 谷丙转氨酶 ALT 检测原理ALT L 丙氨酸 酮戊二酸丙酮酸 L 谷氨酸丙酮酸 NADHL 乳酸 NAD 在340nm处检测NADH的吸收峰来推算血清中ALT的浓度 LDH 13 谷草转氨酶 AST 检测原理AST 天门冬氨酸 酮戊二酸草酰乙酸 L 谷氨酸草酰乙酸 NADHL 苹果酸 NAD 在340nm处检测NADH的吸收峰来推算血清中AST的浓度 MDH 14 临床意义 1 急性病毒性肝炎ALT AST均升高 急性肝炎早期 AST ALT 1重症肝炎临终期会出现 酶胆分离 现象 即血中ALT浓度下降 甚至在正常范围内 而此时胆红素却进行性增高 15 2 慢性肝炎和脂肪肝AST ALT轻度上升 一般不超过参考值的3倍 有时可降至正常但是慢性活动性肝炎 ALT多数升至参考值的3 5倍 且长期维持在一个较高的水平 如果伴有肝坏死 可升至参考值的10倍以上 脂肪肝时 ALT可持续轻度升高并伴有高脂血症 16 3 肝硬化取决于肝细胞坏死和肝纤维化程度肝硬化病变累及线粒体时 多数AST升高程度可超过ALT 肝细胞中 AST80 存在于线粒体中 4 原发性肝癌ALT可轻度升高或正常 提示可能并发肝坏死 预后严重5 其他疾病AST升高如急性心肌梗死 右心功能不全 肌营养不良 溃疡性结肠炎 外伤等 17 附注 正常新生儿ALT水平比成年人约高2倍 出生后约3个月降至成年人的水平 新生儿的肝细胞膜通透性较大 ALT从肝细胞渗入血浆较多 使血清ALT水平升高 血清不宜反复冻融 以免影响酶活性 血清置4 1周 酶活性无显著变化 在常规ALT测定中 不推荐冰冻保存血清标本 宜用血清标本测定 草酸盐 肝素 枸橼酸盐虽不抑制酶活性 但可引起反应液轻度混浊 红细胞内ALT含量为血清中3 5倍 应避免标本溶血 18 血清胆红素的测定 黄疸血清中胆红素含量过高 则可扩散至组织中 组织被黄染 分类溶血性肝细胞性胆汁淤积性 19 20 21 22 23 直接胆红素血清与重氮试剂混合后 在规定时间内所测定的胆红素相当于直接胆红素含量 总胆红素减去直接胆红素即为间接胆红素参考值 直接胆红素0 6 8 mol L间接胆红素1 7 13 2 mol L 24 总胆红素测定原理 血清胆红素 重氮试剂偶氮胆红素出现呈色反应 颜色深浅与胆红素含量成正比参考值 3 4 20 5 mol L 甲醇 咖啡因 加速剂 25 临床意义 总胆红素 判断有无黄疸 根据血清胆红素的分类 判断黄疸类型直接胆红素 当总胆红素水平升高时 D BIL T BIL可来协助鉴别黄疸肝细胞黄疸D BIL T BIL常为40 60 梗阻性黄疸D BIL T BIL常 60 26 附注 应空腹采血 避免脂血引起反应液浑浊 轻度溶血对本法无影响 但是明显溶血可使测定结果偏低 血液标本和标准液应避免阳光直照 防止胆红素的光氧化 胆红素对光的敏感度与温度有关 血标本应避光置冰箱保存 标本保存冰箱可稳定3天 70 暗处保存可稳定3个月 27 总蛋白 TP 测定 是血清所含各种蛋白质的总和可一定程度反映肝脏合成和储备功能测定方法 推荐 双缩脲比色法蛋白质中的肽键在碱性条件下与Cu2 作用生成蓝紫色的化合物 28 测定原理 在碱性条件下 蛋白质多肽链中的肽键与铜离子 Cu2 络合形成紫红色化合物参考值 60 80g L 29 临床意义 生理性波动 由于体液分布原因 长久卧床者比直立活动时约低4 5g L 新生儿比成人低5 8g L 60岁以上的老年人比成人低2g L增高 血液浓缩 导致TP相对增高 如严重腹泻 呕吐 高热时急剧失水 休克 慢性肾上腺皮质功能减退 血浆蛋白质合成增加 主要见于球蛋白合成增加 多发性骨髓瘤患者 30 减低 血液稀释 导致TP浓度相对减低 静脉注射过多低渗溶液或各种原因引起的水 钠潴留 摄入不足或消耗增加 如食物中长期缺乏蛋白质 长期消化不良或某些消耗性疾病 结核 甲亢 恶性肿瘤等 蛋白质丢失 严重烧伤 血浆大量丢失 大量失血 肾病综合症时大量蛋白尿或溃疡性结肠炎 肠道长期丢失蛋白质 31 白蛋白 ALB 测定 由肝实质合成 是血浆中含量最多的蛋白质 占TP的40 60 内源性氨基酸源的营养源 具有缓冲酸碱的能力血浆中重要的载体 胆红素 胆汁酸盐 前列腺素 类固醇激素 金属离子等 维持血浆胶体渗透压 其在体液中的浓度可作为各种膜屏障完好的指标 分子量较小66400 32 测定方法 溴钾酚绿法 BCG法 溴钾酚绿是一种阴离子染料 在PH4 2的缓冲液中 在非离子去垢剂聚氧乙烯月桂醚存在时 可与白蛋白结合成蓝绿色复合物 溶液由黄色变成蓝绿色 在660nm时比色参考值 35 50g L 33 临床意义 受饮食中蛋白质的摄入量影响 可在一定程度上作为个体营养状态的评价指标增高 严重脱水减低 合成降低 急 慢性肝病 营养或吸收不良 分解或代谢增加 大面积组织损伤或炎症 消耗性疾病 严重感染 恶性肿瘤等 异常丢失 肾病综合症 慢性肾炎 分布异常 门静脉高压腹水 34 球蛋白及其与白蛋白的比例 球蛋白增高 多见于炎症 免疫系统疾病和肿瘤 细菌 病毒 寄生虫引起的急慢性感染 如结核 麻风病 血吸虫病 病毒性肝炎等 自身免疫性疾病 系统性红斑狼疮 风湿 类风湿等 多发性骨髓瘤和淋巴瘤 35 球蛋白降低 见于血液稀释 严重营养不良 胃肠道疾病白蛋白与球蛋白比值 A G 参考值 1 2 1 临床上常用来衡量肝脏疾病的严重程度 比值倒置 A G 1时 是慢性肝炎或肝硬化的特征之一 36 前白蛋白 P ALB 测定 由肝细胞合成 在电泳分离中 PH8 6 移速比白蛋白快 半寿期很短 仅12小时 除可作为组织修补的材料 还是一种运载蛋白 可以和T3 T4结合 还可以和视黄醇结合而具有运载维生素A的作用 37 检测原理 血清中的PA与抗PA抗体在液相中反应成抗原抗体复合物 使反应液呈现浊度 当一定量抗体存在时 浊度与血清中PA 抗原 的含量成正比 利用散射比浊或透射比浊技术 与同样处理的PA标准比较 求得样品中PA含量 参考值 散射比浊法 22 40mg dL 38 临床意义 诊断和监测营养不良 血清P ALB在无感染的情况下 是儿童营养不良的灵敏指标 诊断肝病 在肝炎早期 其浓度下降往往早于其他血清蛋白成分的改变 有研究表明 动态随访测定血清P ALB对重型肝炎预后有较大的参考价值 P ALB明显上升 往往预后良好 P ALB持久下降 预后险恶 是一种负性急性时相反应蛋白 急性时相反应时下降 有研究表明 P ALB可以作为癌症的筛选指标 39 附注 血清蛋白质的浓度用 g L 表示 因为血清中各种蛋白质的相对分子质量不同 所以不能用mol L表示 本法属浊度反应 试剂有任何可见的混浊 应弃去不用 否则对结果有较大影响 血清标本如不能及时测定 应置2 8 冰箱保存 可稳定2天 40 碱性磷酸酶 ALP 的测定 一组在pH9 10 5的碱性环境中能催化有机磷酸酯水解的酶 血清ALP主要来源于肝脏 骨骼 少部分来自小肠和妊娠期胎盘组织 肝细胞产生的ALP一般从胆道排入小肠 41 测定方法 酶动力法 以磷酸对硝基酚为底物 2 氨基 2 甲基丙醇为缓冲液对硝基酚磷酸盐在ALP的作用下产对硝基酚和磷酸盐 在405nm除检测对硝基酚的吸收峰 计算出血清中的浓度 参考值 1 12岁 500U L 12 15岁 750U L 25岁以上40 150U L 42 临床意义 生理性增高 妊娠3个月即可产生ALP9个月到达高峰 可为同龄妇女的3 4倍 分娩后1个月恢复正常新生儿 儿童 青少年骨骼生长期比成人要高1 5岁 第一个高峰 是成人的2 3倍10 18岁 第二个高峰 是成人的4 5倍 肝胆管梗阻 ALP升高 ALP分布在肝细胞的血窦侧和毛细胆管侧的微绒毛上 经胆汁排入小肠 梗阻性黄疸时 由于肝内 外梗阻胆汁排出不畅 再加上胆汁具有表面活性剂作用可洗脱ALP返流入血 使血中浓度升高 43 肝炎或肝硬化 可轻度升高 但很少超过上限3倍 原发或继发性肝癌 明显升高 肿瘤组织或炎症刺激肝细胞产生ALP 骨骼系统疾病 可有不同程度的升高 骨折恢复期 佝偻病转移性骨肿瘤 其他疾病 甲亢 肢端肥大症等可轻度升高 44 附注 血清置室温 25 ALP活性显示轻度升高 例如室温6h 酶活性约增高1 置1 4天 酶活性增高3 6 血清贮存冰箱 4 酶活性亦出现缓慢地升高 冰冻血清ALP活性降低 但当血清复温后 酶活性会慢慢恢复 质控血清或冻干质控血清亦呈现类似的ALP活性升高现象一般用血清或肝素抗凝血浆测定ALP活性 抗凝剂如草酸盐 柠檬酸盐和EDTA Na2能抑制ALP的活性 不能使用这类抗凝剂的血浆做ALP的活性测定ALP活性与血清在反应液中所占体积分数有关 已发现当血清体积分数从1 26降低到1 51时 所测出的酶活性随之增高 但低于1 51后 酶活性没有进一步增加 这一效应的原因还不清楚 可能是因为在高稀释度下ALP多聚体解聚所致 45 谷氨酰转肽酶的测定 谷氨酰转肽酶是在氨基酸吸收中 参与 谷氨基循环的一个重要的酶 血清中GGT主要来自肝脏 少量来自肾脏 胰腺 GGT在肝脏中主要由肝细胞的线粒体产生 90 为膜结合型 46 测定原理 以 谷氨酸 3 羧基 4 对硝基苯胺和双甘肽为底物 GGT作用于 谷氨酸 3 羧基 4 对硝基苯胺和双甘肽产生 谷氨酸双甘肽和5 氨基 2 硝酸苯甲酸盐 在450nm处检测吸收峰 计算GGT的浓度 谷氨酸 3 羧基 4 对硝基苯胺 双甘肽 谷氨酸双甘肽 5 氨基 2 硝酸苯甲酸盐参考范围 男性 11U L 50U L女性 7U L 32U L GGT 47 临床意义 生理性变化 新生儿至6个月以内的小婴儿明显高于成人3 5倍 病毒性肝炎 急性肝炎肝细胞可合成和释放GGT 是其在血清中的浓度轻度升高 变化一般与ALT平行 但是幅度较低 若在恢复期其他肝功能指标都已正常 但GGT仍未复原 提示肝炎尚未痊愈 若反复波动或长期维持较高水平 则应考虑肝炎有慢性化趋势 48 原发性或转移性肝癌 增高 GGT和AFP同样具有癌胚抗原的性质 特别是在结节性增生时出现强活性 能够反映肝内占位性病变 监测血中的GGT浓度可观察肿瘤疗效和预后 梗阻性黄疸 血中GGT升高明显 可达正常的5 30倍 是胆汁淤积 胆道梗阻最敏感的酶 梗阻时间越长 程度越重 GGT上升幅度越大 49 急 慢性酒精性肝炎 血清浓度升高 但是GGT升高幅度跟饮酒量没有明显的相关性 肝硬化 代偿期正常 若失代偿期或伴有炎症 进行性纤维化则GGT升高 其升高程度与纤维化成正比 50 其他 如系统性红斑狼疮 SLE 单核细胞增多症等可使GGT轻度升高 注 测定ALP GGT有助于鉴别ALP的来源 GTT与ALP同时增高常源于肝脏疾病 而GGT正常 ALP升高常源于肝外疾病 如骨骼疾病 51 附注 红细胞中L 谷氨酰基移移酶含量低 溶血标本对测定结果影响不大血清中GGT的活力 在室温或4 可稳定7d 在冷冻状态下可稳定2个月 52 胆碱酯酶 CHE 的测定 胆碱酯酶分为两大类 真性胆碱酯酶 也叫乙酰胆碱酯酶 ACHE 存在于红细胞 肺 脑组织 交感神经节等处 主要是水解乙酰胆碱 假性乙酰胆碱 PCHE 存在于血清或血浆中 出可作用于乙酰胆碱 还可作用于其他胆碱类化合物 PCHE是一种糖蛋白 由肝脏合成 含有机磷的杀虫剂能抑制红细胞内的真性胆碱酯酶和血清中的假性胆碱酯酶 53 测定原理 CHE作用于硫代丁酰胆碱 最后生成5 5 二硫双2 硝基苯甲酸是黄色化合物 动态检测410nm除的最大吸收峰 计算出血清胆碱酯酶的浓度硫代丁酰胆碱 CHE硫代胆碱 丁酸硫代胆碱 二硫代双硝基苯甲酸5 巯基 2 硝基苯甲酸 2 硝基苯甲酸 5 硫基硫代胆碱参考范围 4000 12600U L 54 临床意义 肝脏疾病 在病情严重的肝炎患者中 PCHE降低与肝病变程度成正比 慢性肝炎 肝硬化 肝癌时如PCHE持续降低则提示预后不良 口服避孕药或雌激素时 血清PCHE会降低 营养不良 有机磷中毒血清PCHE会降低 肥胖 脂肪肝 甲亢等血清PCHE会升高 55 附注 用血清或肝素血浆 轻度溶血不干扰 但必须离心去除红细胞及影细胞 标本如无菌 PCHE在室温可稳定数十天 20 稳定3年血清经稀释后 PCHE易失活 如需稀