白念珠菌支气管肺PPT课件.ppt

白念珠菌支气管肺感染对大鼠肺TLR2表达和IL 10水平的影响 CompanyLogo Toll样受体 Tolllikereceptors TLRs 是新近发现的同源于果蝇Toll的蛋白分子 属于 型跨膜蛋白受体 TLRs能对病原体识别 结合 引发一系列信号间的传导 促进各种炎症介质的释放 立题依据 Toll样受体 CompanyLogo 立题依据 TLR2识别暴露细胞壁表面的成分甘露聚糖等病原体相关分子模式后 可通过跨膜结构将白念珠菌壁上的甘露聚糖等分子的刺激信号转导入细胞内 通过胞内段Toll IL 1R TIR 以髓样分化因子88 MyD88 依赖和非依赖途径分别激活NF B和丝裂原激活蛋白激酶 mitogen activatedproteinkinase MAPK 级联反应通路激活天然免疫系统 引发前炎症因子的释放 介导急性期反应 直接杀伤病原微生物 引发获得性免疫反应的激活 CompanyLogo CompanyLogo 大量体外研究认为念珠菌感染后能使免疫细胞表面表达的TLR2水平上升 研究也证实LPS能使大鼠体内TLR2表达水平增高 但白念珠菌感染后大鼠体内肺TLR2表达的情况还鲜有报道 立题依据 CompanyLogo 立题依据 白念珠菌支气管肺感染大鼠肺TLR2和Th2细胞因子IL 10的表达和变化情况也存在争议 CompanyLogo 立题依据 Netea等认为TLR2能通过Treg表达的升高 介导Th2水平增高 抑制炎症反应 CompanyLogo 立题依据 Fitzgerald等认为TLR2能介导抗感染的炎症反应 导致IL 10的降低 CompanyLogo 立题依据 而Roger等发现在感染的早期虽然Treg细胞的数量增多而功能却受到抑制 导致效应T细胞的大量激活 通过呼吸爆发等作用大量杀灭病原体 而在后期当白念珠菌的水平下降到一定水平后Treg的活性恢复 避免过度炎症损害机体 CompanyLogo 通过研究肺部白念珠菌感染后不同时间 3天 7天 肺组织TLR2的表达 Th2分泌细胞因子 IL 10 的水平 及感染程度 探讨白念珠菌感染对TLR2的表达水平和肺组织匀浆上清液中IL 10水平的影响 以及它们在肺部白念珠菌感染中的发病机制中的作用 研究目标 CompanyLogo 1 肺部白念珠菌的感染情况 PAS法 2 观察感染后不同时间大鼠肺组织炎症变化 HE染色 3 肺部白念珠菌感染后3天 7天大鼠肺组织中TLR2的表达 免疫组化法 4 肺组织匀浆上清液IL 10水平 ELISA法 研究内容 CompanyLogo 技术路线 3天组 7天组 3天组 7天组 3天组 7天组 3天杀鼠 免疫功能低下对照组 生理盐水对照组 感染组 7天杀鼠 取肺组织 固定 包埋 制成切片 固定 包埋 制成切片 冻存 匀浆 离心 HE染色 PAS染色 免疫组化 ELISA 统计分析 得出结论 CompanyLogo 免疫功能低下动物模型建立 1 2 实验动物常规饲养两周后 第1 3 5 7 9 11 13天给予免疫低下组和感染组大鼠皮下注射醋酸氢化可的松 每次80mg kg 成功建立免疫功能低下模型 正常组于相同时间给予同等剂量的生理盐水皮下注射 1 马壮钱桂生黄桂君 等 免疫功能低下Wistar大鼠白念珠菌肺炎模型的建立 J 中华微生物学和免疫学杂志 2001 21 5 569 573 2 LewisRE LundBC KlepserME etal AssessmentofantifungalactivitiesoffluconazoleandamphotericinBadministeredaloneandincombinationagainstCandidaalbicansbyusingadynamicinvitromycoticinfectionmodel J AntimicrobialAgentsandChemotherapy 1998 42 6 1382 1386 关键步骤 CompanyLogo 感染动物模型的建立 1 2 动物免疫功能低下建立后的第14天 用4 水合氯醛 0 3ml 100g 腹腔注射麻醉动物 麻醉成功后 感染组经气管插管注射白色念珠菌混悬液0 2ml 只 正常组及免疫功能低下组经气管插管注射同等剂量的生理盐水 1 马壮钱桂生黄桂君 等 免疫功能低下Wistar大鼠白念珠菌肺炎模型的建立 J 中华微生物学和免疫学杂志 2001 21 5 569 573 2 LewisRE LundBC KlepserME etal AssessmentofantifungalactivitiesoffluconazoleandamphotericinBadministeredaloneandincombinationagainstCandidaalbicansbyusingadynamicinvitromycoticinfectionmodel J AntimicrobialAgentsandChemotherapy 1998 42 6 1382 1386 关键步骤 CompanyLogo 连接白念珠菌感染后天然免疫细胞的TLR2受体表达与获得性免疫因子 IL 10 之间的相互关系 体内研究白念珠菌肺感染后TLR2的表达 创新之处 CompanyLogo 1 PAS染色白念珠菌浸润情况 结果 CompanyLogo 2 白念珠菌感染肺组织大体情况 感染后第3天感染后第7天 结果 CompanyLogo 3 HE染色白念珠菌感染情况 结果 正常组第3天 正常组第7天 CompanyLogo 免疫功能低下组第3天 免疫功能低下组第7天 结果 CompanyLogo 感染组第3天感染组第7天 结果 CompanyLogo 结果 4 免疫组化TLR2的表达情况 正常组第3天正常组第7天 CompanyLogo 免疫功能低下组第3天免疫功能低下组第7天 结果 CompanyLogo 感染组第3天感染组第7天 结果 CompanyLogo 表1 各组TLR2表达的IOD值 104 组别正常组免疫功能低下组感染组 3天组2 39 0 162 30 0 353 84 0 47P值p 0 05 p0 05 p 0 05 结果 注 相同时间免疫功能低下组与正常组比较p 0 05 相同时间感染组与免疫功能低下组比较p0 05 感染组内比较p 0 05 CompanyLogo 各组大鼠肺部TLR2的表达 CompanyLogo 表2 各组肺组织匀浆上清液IL 10的表达 pg dl 组别正常组免疫功能低下组感染组 3天组52 21 1 7264 71 5 1385 68 8 01p值p 0 05 p 0 05 7天组51 93 1 9082 08 3 51 119 43 6 84 P值p 0 05 p 0 05 注 相同时间免疫功能低下组与正常组比较p 0 05 相同时间感染组与免疫功能低下组比较p 0 05 免疫功能低下组内比较p 0 05 感染组内比较p 0 05 结果 CompanyLogo 各组大鼠肺组织匀浆液IL 10的水平 CompanyLogo 1 TLR2 感染后3天和7天组 大鼠肺部的TLR2表达水平明显高于其他两组 2 IL 10 感染后3天和7天组 感染组 免疫功能低下组 生理盐水对照组 结论 一 组间比较 CompanyLogo 1 TLR2 1 生理盐水对照组 3天和7天比较没有明显的差异 2 免疫功能低下对照组 3天和7天比较没有明显的差异 3 感染组 7天 3天 2 IL 10 1 生理盐水对照组 3天和7天比较没有明显的差异 2 免疫功能低下对照组 7天 3天 3 感染组 7天 3天 结论 二 组内比较 CompanyLogo 1 念珠菌感染后第3天和第7天肺组织TLR2的表达和肺组织IL 10并未发现明显的相关性 2 感染组3天和7天IL 10的水平和免疫功能低下3 3天和7天并未发现明显的相关性 结论 三 两指标之间的相关性 CompanyLogo 讨论 针对感染不同时间TLR2表达并没有变化 推测其原因我们认为可能存在以下因素 首先 从我们的结果说明早期 3天 和后期 7天 TLR2是表达在同一水平的 那么是否TLR2在感染的过程中始终保持不变 还是曲线变化在这两个时间点在同一水平还需进一步的验证 其次 我们采取的是半定量的免疫组化的手段 来测量TLR2的表达情况 结果不够稳定 再次 由于我们的实验对象有限 只是做小样本的估计 对总体的代表性不佳 而且 我们做的是体内实验 进一步的细胞水平的实验更能直观的表现 CompanyLogo 讨论 针对TLR2和IL 10的变化水平并不平行方面 首先 我们更倾向于支持Roger的观点 他们认为感染的早期虽然Treg细胞的数量增多而功能却受到抑制 导致效应T细胞的大量激活 而通过呼吸爆发等作用大量杀灭病原体 而在后期当白念珠菌的水平下降到一定水平后Treg的活性恢复 避免过度炎症损害机体 其次 在感染大鼠体内TLR2和IL 10的变化并不是平行的 也就是说感染并不是通过增加TLR2在免疫细胞表面的表达 引发细胞内传导的增强 使后续的炎症反应增强来引起IL 10的水平升高 那么是否TLR2在水平不变的情况下通过功能的增强来增强下游信号传导 我们还需要进一步测定NF KB等胞内成分的表达和活性来证实 再次 虽然TLR2的胞内传导通路已经比较明确和为大家广泛接受 但也可能存在其他的不同类别的针对白念珠菌的识别受体和信号通路能够针对白念珠菌的感染 影响获得性免疫反应 而且与TLR2引发的反应不平行 因此还需要我们后续进一步的研究 CompanyLogo 致谢 1 首先衷心感谢我的导师王莉教授 在三年的时间里 在学习上和生活上都给了我