HPLC法定方法应用.ppt

HPLC法定方法应用 目的 学习目的1 做什么2 为什么3 如何做 什么是法定方法应用 法定方法应用是指确定法定方法适用于测试某一特定生产商生产的产品 为什么需要法定方法应用 医药质量控制实验室检查指南 USP或已批准的ANDA中的方法可视为经过验证的方法 应用法定方法的公司必须证明该方法在实际应用条件下适用 为什么需要法定方法应用 USP中法定方法源自NDA ANDA中的方法方法也许不适用于所有的产品API有不同的合成路线不同剂型有不同的组分 FDA关于确证的定义 医药质量控制实验室检查指南 USP或已批准的ANDA中的方法可视为经过验证的方法 应用法定方法的公司必须证明该方法在实际应用条件下适用 术语 验证 证明一个方法适用于它的预期的目的的所有必需过程确认 一个阐明通过已验证方法进行产品测试的条件确实适合于该已验证方法的过程 法定方法应用主要内容 术语 续 验证 必须阐明方法适合于它使用目的的一个过程确认 阐明通过已验证方法进行产品测试的条件确实适合于该已验证方法的过程 法定方法应用 如何做 用通则作为指导确认HPLC方法判定该方法是否适用于测试该产品如果确认失败 评估失败原因如果USP工作人员的帮助还不能解决问题 那么该方法可能不适用于本产品的测试 法定方法应用下一步 那么也许需要开发并验证一个替代方法如果决定开发一个替代方法 请与USP联系以便评估是否需要将替代方法以合适的方式收录在USP个论中 总结 为什么 监管机构要求做什么 确认并采取必要措施适用于原料 制剂 辅料 法定程序的确认 USP之确认 确认 出现在 细菌内毒素测试分析数据 解释和处理灭菌生物指示剂法定程序的确认和更多其他章节 确认定义 USP USP NF的用户不需要验证所收载方法的准确性和可靠性 仅需要确认这些方法在实际使用条件下的适应性 确认包括评价所选择方法的性能参数 如那些在中描述的用来采集相关数据的性能参数 而不是重复验证过程 确认定义 FDA 药物质量控制实验室检查指南 出现在USP中的方法被认为已验证 如果作为已批准的ANDA的一部分 它们也被认为是验证过的 对于法定方法 企业必须证明该方法在实际使用条件下的适应性 术语 验证 阐明方法适合于它使用目的的一个必要过程确认 阐明通过已验证方法进行产品测试的条件为何适合于该已验证方法的过程 小结 验证 是用于阐明方法适合于它使用目的的一个必要过程 确认 是用于阐明通过已验证方法进行产品测试的条件为何适合于该已验证方法的过程 为什么需要 21CFR211 194 a 2 USP NF的用户不需要验证所收载方法的准确性和可靠性 仅需要确认这些方法在实际使用条件下的适应性 应对工业界质询正式收载于USP30第二增补本 概念 验证 使用一个轮廓分明的样品挑战分析方法确认 使用一个轮廓分明的方法条件分析环境 分析员 仪器 试剂 基质 小结 本通则意在提供实验室有关首次使用法定程序确认的通用信息 如何通过利用实验室人员 仪器和试剂产生可接受结果 无意追溯应用于已经成功建立的实验室程序确认包括评价所选择方法的性能参数 如那些在中描述的用来采集相关数据的性能参数 而不是重复验证过程 小结 应用于原料药 药物制剂和辅料如果确认失败 经USP人员协助还没有解决该问题 可得出该程序不适合于被测试物料的结论 因此有必要开发和建立一个代替程序 小结 应用 滴定 色谱程序 有关物质 含量测定 限度试验 光谱测试等 常规测试通常不需要确认 水分 重金属 炽灼残渣等 小结 微生物程序的确认 抗菌有效性测试 非无菌产品微生物计数 无菌检查法 药品微生物回收率验证生物程序的确认 生物检定的设计和分析 生物检定的验证 开发中 原料药和辅料确认的数据要素 制剂确认的数据要素 类型 确认流程 没有通用确认方案 确认 根据书面程序测试 全面验证 USP中的HPLC方法 50 存在于原料药 辅料和制剂鉴别试验 类型 杂质检查 类型 限度检查 类型 含量测定 类型 制剂HPLC方法确认的数据要素 确认vs验证 API 鉴别试验 IR UV HPLC纯度检查 干燥失重 炽灼残渣 重金属 pH 有关物质含量测定 滴定法 HPLC 确认vs验证 API 鉴别试验 IR UV HPLC纯度检查 干燥失重 炽灼残渣 重金属 pH 有关物质 HPLC法 含量测定 滴定法 HPLC 示例 马来酸三甲丙米嗪 收载于PF32 6 方法对一些杂质没有专属性 示例 马来酸三甲丙米嗪 企业联系USP申请包括其内控方法USP要求提供额外比较数据 示例 马来酸三甲丙米嗪 企业提供了图谱和相对保留时间 示例 马来酸三甲丙米嗪 解决方案 修改各论收载已知杂质USP正式各论已包括已知杂质 示例 氢溴酸加兰他敏 收载于PF33 2 示例 氢溴酸加兰他敏 A公司 DMF持有者有比PF更多的已知杂质进行确认并上报数据结论 PF方法可以确认已知杂质方法没有包括已知杂质氢溴酸加兰他敏各论通过修订布告修订 示例 氢溴酸西塔罗仑 第一试行版收载于PFA公司采用不同合成途径存在不同杂质PF中的方法未包括该杂质 示例 氢溴酸西塔罗仑 评估结果显示保留时间较长的氯化物和溴化物类似物是工艺过程中产生的杂质 该各论的原始申报单位工艺过程中不产生该杂质氯化物或溴化物类似物 示例 氢溴酸西塔罗仑 批准的ANDA要求监控原料药中的氯化物和溴化物类似物 解决方案 收载第二方法现行各论有两个方法 弹性各论分析员将不得不根据工艺过程中产生的杂质决定采用哪个方法 示例 API 鉴别试验 IR UV HPLC纯度检查 干燥失重 炽灼残渣 重金属 pH 有关物质 HPLC法 含量测定 滴定法 HPLC 示例 奥氮平 专属性测试存在一些问题在缓冲液 有机相 50 50 条件下分离度无法符合规定 示例 奥氮平 示例 奥氮平 示例 奥氮平 USP收到另外一家企业评论说在API洗脱峰附近存在工艺过程中产生的杂质 改变流动相的组成可解决该问题 正式各论已改成53 缓冲液 47 乙腈 示例 制剂 鉴别试验 HPLC制剂性能检查 注射剂不溶性微粒 含量均匀度 溶出度杂质 有关物质 残留溶剂含量测定 示例 制剂 鉴别试验 HPLC制剂性能检查 注射剂不溶性微粒 含量均匀度 溶出度杂质 有关物质 残留溶剂含量测定 示例 制剂 鉴别试验 HPLC制剂性能检查 注射剂不溶性微粒 含量均匀度 溶出度杂质 有关物质 残留溶剂含量测定 示例 制剂 鉴别试验 HPLC制剂性能检查 注射剂不溶性微粒 含量均匀度 溶出度杂质 有关物质 残留溶剂含量测定 米塔扎平口崩片 问题 制剂成分导致精密度差解决方案 增加一个单独的样品制备方法 正式各论有两种样品制备方法 分析员可选择其中一种方法 小结 以为指南确认HPLC方法确认该方法是否适合测试该物料如果确认失败 评价失败原因联系USP看是否有解决方案如果经USP联络人协助仍不能解决问题 可得出该程序可能不适用于测试该物料的结论 HPLC方法确认的下步措施 可能需要开发并验证一个替代方法如果已决定开发替代方法 可联系USP评估通过合适的方式将替代方法收载于USP各论的可能性 通则色谱 系统适用性 通则 通则提供了用于解释和应用标准的基本指导原则 以避免在整本标准的大量各论中重复这些通用要求 各论优先于通则 议题 系统适用性试验的概念系统适用性试验的频率有关于系统适用性试验总则的历史变迁USP可允许的变化USP和EP的不同有关于SST的参数变化的例子和途径 ICH系统适用性定义 系统适用性试验是许多分析方法的组成部分该试验是基于由仪器 电子 分析方法和待分析样品所构成的系统能够以这种方法进行评价 为某一特定方法所确定的系统适用性试验参数取决于该已经验证方法的类型 额外的信息请参照药典 色谱分离技术 欧洲药典 2 2 46 系统适用性试验是分析方法的组成部分 用于确保色谱系统能达到能胜任的色谱行为 表现效率 柱效 容量因子 分离度 相对保留和对称因子等通常可应用于评价色谱柱的表现 影响色谱行为的因素包括 流动相的组分 离子强度 温度和表现pH值 流速 柱长 柱温和柱压 固定相的性质 包括孔径 粒径 颗粒的类型 比表面积 反相载体还包括化学修饰的成度 封端 碳含量等 所使用的仪器设备必须经过验证合格 应达到所要求的精度以便能够进行测试 色谱 美国药典 系统适用性定义 系统适用性试验是气相和液相色谱方法的组成部分 它们用于证明该分析试验的色谱系统具有足够的分离度和重现性 该试验是基于由仪器 电子 分析方法和待分析样品所构成的系统能够以这种方法进行评价 为某一特定方法所确定的系统适用性试验参加取决于该已经验证方法的类型 系统适用性 各论中指定的规格参数并不排除使用其他合适的操作条件 调整操作条件以满足系统适用性要求是必要的 在整个运行过程中 在合理的时间间隔内 通过注射进样合适的对照品以证明系统适用性 在进样前或者分散在样品间 重复进样所规定的标准对照品 以证明可以达到足够的系统精密度 系统适用性 无论何时 若设备或者关键试剂有显著变化时 必须在进样前进行适用性试验 必须满足系统适用性要求才能进行样品分析 系统适用性失败所得到的样品分析结果是不可接受的 适用性测试 要求 重复性 当RSD 2 0 时 n 5 当RSD 2 0 时 n 6分离度拖尾因子 在W0 05处计算 容量因子 k 理论塔板数 N 重复性 USP若RSD 2 0 分析物重复进样5次 若RSD 2 0 分析物重复进样6次 EP 理论塔板数 相对保留时间 色谱USP30第二增补版 在各论中 相对保留时间仅供参考 以方便峰的鉴别 对相对保留时间而言 并没有统一的规范要求 PF34 1 词汇脚注 参数k N r和Rs用于开发等温 等度方法 然而 对于应用程序升温或者溶剂梯度的分离而言 可以简单地应用这些参数作为比较的方法 确保具有如各论中所规定的足够的色谱条件以进行试验 测定不对称因子也是一个常用的做法 然而 对于USP而言 只有在Glossaryofsymbols中提到的公式才是有效的 拖尾因子 拖尾因子 系统适用性PF34 1 在梯度洗脱中 一般不推荐调整流动相组分 如果必须调整 只推荐柱内径的变化 同样的填料 或者滞留体积的调整 当柱尺寸变化时 流速可以应用下列公式进行调整 信噪比 PF34 5 信噪比 S N 是一个常用的系统适用性参数 S N可按下式计算得到 S N 2h hn其中h是相应组分的峰高 hn是在5倍半峰宽内最大和最小噪音之差 如果可能的话 在相关峰的附近 检测灵敏度 用于确保检测色谱纯度或者有关物质检查中的杂质的检测项 定量限溶液是0 05 原料 或者0 1 制剂 的RS溶液定量限溶液RS获得的信噪比不应小于10 系统适用性 允许的改变 调整条件以满足系统适用性要求是必要的 EPUSPComparison pdf色谱 USP30 Supp 2 用户通过评估因变化而受影响的相关表现 验证在新的条件下方法的适用性 系统适用性 允许的变化 什么称为确认 USP总则是一好资源下面是原文 确认是由评估选择的分析特性的表现所组成 比如在中所描述的 可以产生适当的 相关的数据而不仅仅是重复验证过程 系统适用性 允许的改变 确认的适合量是什么 简单的答案是 依具体情况而定 各论中的特定例子有助于理解允许的改变 柱尺寸 例 OndansetronHydrochlorideUSP29page1582OndansetronRelatedCompoundD含量和限度测定使用20cm长柱 非商业尺寸 选择较短的柱子 有减少分离度的风险 使用较长的柱子 没有风险 可以使用25cm 试验 验证分离度 在几个试验中 应用25cm柱子得到的分离度 2 0