冠状病毒基因组结构和相关蛋白研究进展_李广兴.pdf

网络出版时间 2013 9 23 15 14 45 URL Journal of Northeast Agricultural University 东北农业大学学报第44卷 第9期44 9 149 154 2013年9月September 2013 冠状病毒基因组结构和相关蛋白研究进展 李广兴 潘龙 东北农业大学动物医学学院 哈尔滨 150030 摘要 冠状病毒研究工作已经十分广泛 有些领域已经取得很大进展 为对冠状病毒进行更深入研究 更 好地了解冠状病毒特性 从而进行有效控制 文章对从冠状病毒分类 基因组结构和相关蛋白功能等方面进行综 述 关键词 冠状病毒 分类 基因组结构 基因组功能 中图分类号 Q939 4文献标志码 A文章编号 1005 9369 2013 09 0149 06 李广兴 潘龙 冠状病毒基因组结构和相关蛋白研究进展 J 东北农业大学学报 2013 44 9 149 154 Li Guangxing Pan long Research development of genome structure and related protein of coronavirus J Journal of North east Agricultural University 2013 44 9 149 154 in Chinese with English abstract Research development of genome structure and related protein of coronavirus LI guangxing PAN long School of Veterinary Medicine Northeast Agricultural University Harbin 150030 China Abstract The research of coronavirus has already extensive especially in some field in order to getting lucubrate learning characteristics of coronavirus controlling accordingly effective this review articles includes classifying of coronavirus the genome structure and function of related protein Key words coronavirus classifying genome structure function of genome 收稿日期 2013 07 24 基金项目 国家自然科学基金项目 31172295 31272569 黑龙江省自然科学基金项目 ZJN0702 01 作者简介 李广兴 1968 男 教授 博士 博士生导师 研究方向为动物病理学 E Mail ligx 冠状病毒是属于尼多病毒目 Nidovirales 单股 正链RNA病毒 感染多种哺乳动物和鸟类物种 常引起消化道和呼吸道疾病 有时可导致临床疾 病爆发流行 例如在2003年爆发严重急性呼吸道 综合征冠状病毒 SARS CoV 为更好地预防高致 病性冠状病毒出现 需要加深对冠状病毒生物学 特性解和研究 1冠状病毒分类 冠状病毒家族根据形态 基因组结构和基因 表达情况分为两个亚科 即冠状病毒亚科 Corona virinae 和凸隆病毒亚科 Torovirinae 1 在遗传和 血清学特性基础上 Coronavirinae亚科又被划分成 三个新属 即 和 冠状病毒属 2 最近 又命 名一个新的 冠状病毒属 3 每个属再根据pp1ab 复制酶结构域不同划分成不同物种 冠状病毒1 群包括猪传染性胃肠炎病毒 TGEV 猫的肠道冠 状病毒 FECV 猫传染性腹膜炎病毒 FIPV 和犬 冠状病毒 CCoV 冠状病毒2群主要包括鼬肠道 冠状病毒 FRECV 鼬全身冠状病毒 FRSCV 水貂冠状病毒 MCOV 人类冠状病毒229E HCoV 229E 人类冠状病毒NL63 HCoV NL63 猪流 行性腹泻病毒 PEDV 和菊头蝙蝠冠状 HKU2 RH BatCoV HKU2 冠状病毒是分型比较复杂 一个属 现在分为4个亚群 A B C和D A群 包括人类冠状病毒OC43 HCoV OC43 牛冠状病 第44卷东北农业大学学报 毒 BCoV 猪凝血脑脊髓炎病毒 PHEV 人冠状 病毒 HKU1 HCoV HKU1 鼠肝炎病毒 MHV 和 马冠状病毒 ECoV B 群包括人 SARS 冠状病毒 SARS CoV 和菊头蝙蝠 SARS 冠状病毒 HKU3 SARSr Rh BatCoV HKU3 C群有扁颅蝠属冠状 病毒HKU4 Ty BatCoV HKU4 和伏翼属冠状病毒 HKU5 Pi BatCoV HKU5 D群有果蝠属冠状病毒 HKU9 Ro BatCoV HKU9 冠状病毒属包括鸡 传染性支气管炎病毒 IBV 火鸡冠状病毒 Tu coV 白鲸冠状病毒 BWCoV SW1 冠状病毒属 包括白头翁冠状病毒HKU11 BuCoV HKU11 画 眉冠状病毒 HKU12 ThCoV HKU12 和文鸟冠状病 毒HKU13 MunCoV HKU13 3 2冠状病毒基因组结构特点 冠状病毒是最大单股正链 RNA 病毒 25 31 kb 其基因组基本模式是包含至少6个开放阅读 框 Open reading frame ORF 5 和3 非编码区 Un translated region UTR 位于两侧 4 各种冠状病毒 依据基因组结构的不同分成不同群 冠状病毒具 有相似基因组结构 转录调控序列 Transcription regulating sequence TRS 均为 CUAAAC ORF 1ab 编码16个非结构蛋白 Nonstructural protein NSP 具有两个木瓜蛋白酶位点 其中 A群病毒在3 端具有非结构蛋白NSP7或NSP7a 7b 而 B群病 毒PEDV则缺少这个基因 B群病毒是 属病毒 中除 A群病毒之外冠状病毒 其各个成员之间并 不具备相似基因组结构 研究证实 FCoV 是经 典猫冠状病毒 CCoV a 是经典犬冠状病毒 FCoV 型则一部分基因与CCoV a同源 包括 pp1ab 3 端一部分至E基因 CCoV 型S基因与 FCoV 同 源 并 具 有 一 个 独 特 序 列 ORF3 CCoV b型S基因5 端与TGEV进行重组 5 并且 冠状病毒可以感染不同种蝙蝠 表现出进化的多 样性 6 全基因组序列系统发育分析表明 蝙蝠可 能是所有冠状病毒起源的宿主 7 属冠状病毒结构相对复杂 A群具有两个 木瓜蛋白酶位点 都具有特殊基因 血凝素酯酶 Hemagglutinin esterase HE 和NSP3 HCoV HKU1 只有HE 而B群中其他病毒则只有1个木瓜蛋白 酶位点 并且在M和N基因之间都含有几个小开 放阅读框 Open reading frames ORFs 只有果蝠 属冠状病毒 HKU9 在 N 基因后有两个下游基因 NSP7a 7b 8 Beta A 群冠状病毒 TRS 是 CUAAAC Beta冠状病毒属其他病毒为ACGAAC 9 2012年在 荷兰分离出一株新结构类型HCoV EMC 2012 与 其亲缘关系最近的是蝙蝠冠状病毒HKU4 BtCoV HKU4 和蝙蝠冠状病毒HKU5 BtCoV HKU5 是 第6个感染人冠状病毒 也是第一个 C群病毒 10 群冠状病毒 A亚群中IBV和TucoV具有 相似的基因组结构 A为5 UTR POL S 3A 3B E M 5A 5B N 3 UTR TRS为CUUAACAA都 缺少NSP7 近年也分离到一些特殊结构基因型的 IBV 11 最新研究表明火鸡冠状病毒可能完全是 Gamma冠状病毒 IBV 重组产生 12 B群白鲸 冠 状病毒SW1具有冠状病毒最大基因组 31 86 kb 在M和N基因之间含有8个ORFs序列 13 群冠状病毒是已知最小基因组冠状病毒 25 421 26 674 kb 包括鸟类3个亲缘关系较近的 病毒 3 基因组结构与其他冠状病毒类似 特征性 基因顺序是 5 UTR ORF1ab S E M N 3 UTR 这些冠状病毒毒株是SW1远亲 并发现其与亚洲 豹猫冠状病毒 ALCv 有较近亲缘关系 14 3冠状病毒基因组功能研究进展 3 1转录调控序列 5 UTR与病毒复制有关 不同株冠状病毒5 UTR 序列相对保守 具有真核细胞中启动子活 性 三个主要冠状病毒组5 UTR的140 bp包含3个 主要颈环结构 SL1 SL2和SL4 SL1热力学稳定 性很低 SARS CoV 的 5 UTR 启动域包含茎环 Stem loop domains SL1 和 SL2 SL1 对 MHV 的复 制是非常重要的 同时并不是很保守 存在一定的 不匹配和凸起 15 SL2在所有冠状病毒是保守 并 有一个序列特征一致U形转弯式构象 是冠状病毒 次基因组RNA形成关键 16 在一些冠状病毒SL3构 成其核心转录调控序列 L TRS 所有冠状病毒均 具有长发夹形SL4 SL4包含两个碱基配对区SL4A 和 SL4B SL4 可能的作用是分隔 SL1 SL2 和 TRS 并参与引导亚基因组RNA合成 一系列试 验表明单独缺失SL4A或SL4B对病毒可行 而删除 全部SL4对病毒的复制是致命的 17 SL5存在于 和 冠状病毒 反映冠状病毒的遗传进化关系 特 点是存在一个大的顺序插入能力与保守5 UUYC 150 李广兴等 冠状病毒基因组结构和相关蛋白研究进展第9期 GU 3 循环序列并形成发夹结构 18 3 UTR结构已被广泛研究 在 属MHV和BCoV 都具有相似突起茎环 Bulged stem loop BSL 假 结 Pseudoknot PK 19 和一个与毒力相关高变区 Hypervariable region HVR 在 MHV HVR 对于 RNA合成不是必要 但是影响其发病 18 3 2复制酶基因 ORF1位于病毒基因组5 端编码病毒复制酶 包括ORF1a和ORF1b分别编码两个多聚蛋白 Poly protein 即pp1a 486 ku 和pp1b 790 ku 20 这两 个蛋白裂解产生 15 或 16 个非结构蛋白 NSP1 NSP16 ORF1a 编码 NSP1 NSP11 ORF1b 编码 NSP12 16 21 NSP1主要功能是诱导宿主mRNA降解 转录 抑制 细胞周期阻滞 SARS CoV NSP1是宿主基 因表达的强效抑制剂 具有独特作用方式 它绑 定到40S核糖体使其翻译功能失活 并诱导宿主 mRNA降解 NSP1诱导RNA模板裂解表现在RNA 裂解位点特定碱基序列并没有明显偏好 SARS CoVm的RNA 其结构类似宿主mRNA 这使其不 容易受到NSP1介导的RNA裂解作用 同时抑制宿 主先天免疫功能 包括在被感染细胞I型干扰素表 达 这些提示 SARS CoV 的 NSP1 最有可能在 SARS CoV致病过程中起着至关重要作用 22 25 NSP2不在病毒复制过程中发挥作用 而是参 与改变宿主细胞环境 可能参与在SARS冠状病毒 感染宿主细胞中与抑制素蛋白1 PHB1 和PHB2相 互作用 并导致细胞内信号中断 发挥拮抗干扰 素信号作用 26 并且在病毒粒子中也能检测到NSP 2 3 8的存在 27 Coronavirus和Torovirus NSP3序列根据功能构 造和系统发育三个方面进行比对后绘制详细功能 结构域 有16个组成结构 28 SARS冠状病毒木瓜 样蛋白酶 PLP 从事和拮抗IFN诱导和NF B信 号转导通路 PLP阻止这些影响重要信号蛋白在各 通路激活 IRF3和NF B途径 PLP泛素样结构 域对于拮抗作用是必要 和 群NSP3具有ADP 核糖结合活性 gamma群不具活性 抑制 干扰 素 RNA结合和去泛素活性 29 NSP4被证明是一个重要蛋白质 NSP4 NSP6 具有DMV形成功能 30 并在冠状病毒复制阶段早 期发挥作用 31 包含四个预测跨膜区域 TM 1 2 3 4 对于病毒复制复合物在细胞膜上形成和功 能维持是必不可少 在冠状病毒感染细胞中其定 位于内质网并诱导形成双膜囊泡 DMV 32 NSP5 是主要蛋白酶 3CL 蛋白酶 3CLpro 或 MPRO 相对比较保守 可以切割复制酶polyprot eins 1A和1AB pp1a和pp1ab 使之裂解为12个蛋 白质 NSP5 NSP16 33 NSP6是一种6次跨膜的膜 蛋白 可以激活细胞自噬 诱导ER穿孔 34 NSP7 NSP10蛋白共定位于复制复合物 这些 蛋白质每个确切功能是未知 可能参与病毒RNA 合成 35 NSP8具有引物酶活性 在NSP12 RdRp进 行RNA复制或转录时发挥作用 36 NSP9 NSP10 具有部分复制酶活性 NSP9形成二聚体 对于病 毒大量快速复制必不可少 37 NSP11 具体功能未 知 NSP13发挥解旋酶作用 NSP14具有3 5 核 糖核酸外切活性 NSP14介导校对机制阐明对于理 解RNA病毒演变有重要意义 NSP15主要功能是 内切酶活性 NSP16 是RNA帽子结构 2 O methy transferase 38 3 3结构蛋白 冠状病毒其余病毒基因组合成包装病毒RNA 核衣壳蛋白 N 纤突糖蛋白 S 跨膜蛋白 M 和小膜蛋白 E B群冠状病毒还表达一个额外 结构蛋白 血凝素酯酶 HE 3 3 1S蛋白 冠状病毒S蛋白参与病毒与细胞受体结合 介 导病毒与宿主膜融合 同时 S蛋白主要负责诱导 宿主免疫反应和病毒中和抗体 S蛋白还决定病毒 组织嗜性 有研究证明冠状病毒 S1亚基都有一个 共同进化起源 此外 宿主细胞受体血管紧张素 转换酶 ACE 2 和氨基肽酶N APN 也被确定与 S蛋白结合发挥受体功能 S蛋白N 末端至少有 3个区域是受体结合域 冠状病毒S蛋白除与主要 受体结合外 还存在着替代受体 并在病毒装配 和出芽中发挥作用 39 3 3 2M蛋白 冠状病毒M蛋白具有相同基本结构特征 蛋白 质含有3个跨膜域 TM 和1个保守结构域 CD 两侧短氨基末端糖基化域和羧基末端尾巴 位于 病毒粒子内部和外部 是病毒包膜重要组成成分 和病毒释放关键蛋白 除TGEV和FIPV M蛋白可 以出现在细胞膜外 其他冠状病毒M蛋白 包括 151 第44卷东北农业大学学报 SARS CoV 均只表达在内质网和高尔基体 参与 病毒装配和出芽 其保守结构域对于病毒装配是 非常重要 主要通过M M M S和M N蛋白相互 作用 参与病毒复制装配和出芽 SARS CoVM 蛋 白C端细胞质部分负责蛋白质结合控制 并可以抑 制I型干扰素生产 M蛋白Y195对于SARS CoVS M相互作用在感染性病毒粒子装配时是必须 40 3 3 3N蛋白 冠状病毒核衣壳蛋白 N蛋白 有一个结构性作 用 并参与RNA合成 核衣壳蛋白 N 在冠状病毒 RNA合成中发挥重要作用 但其具体作用还不清 楚 多个调查显示 MHV感染早期阶段或SARS CoV复制酶组件内共存N蛋白 在TGEV和SARS CoV均发挥分子伴侣作用 N蛋白与NSP3结合在 感染早期阶段有复制酶作用 并可以在病毒装配过 程中稳定M蛋白复合物 41 3 3 4E蛋白 冠状病毒E蛋白 包含一个单一疏水结构域 HD 并含有一个跨膜 螺旋结构域 ETM 是 病毒粒子包膜组成成分 E蛋白具有离子通道活 性 在发挥离子通道作用时 是形成五聚体高级 结构而发挥作用 冠状病毒E和M控制着病毒粒子 组装 研究证实E蛋白缺失突变株丧失致病力 42 3 3 5辅助蛋白 不同种冠状病毒具有一套独特的病毒辅助蛋 白 即3A 3B 6 7A 7B 8A 8B和9B 这些 蛋白在病毒感染过程中表达 但是对于病毒复制 并非必须 3A蛋白是SARS CoV最大辅助蛋白 也是病 毒粒子组成成分 其重组蛋白可以形成一个四聚 体蛋白离子通道 这可能会促进病毒释放功能 并可以促进高尔基体膜重排和细胞死亡 可导致 内质网应激从而诱导1型干扰素下调 43 IBV 3a和3b蛋白对于病毒复制为必须 44 3B蛋白是通过激活ERK和JNK通路介导 可以 抑制干扰素 上调AP 1转录活性 并具有RUNX1b 转录活性 SARS CoV3B蛋白可以诱导G0 G1期阻 滞和细胞凋亡 抑制诱导型干扰素产生 45 辅助蛋白6可以阻断I型干扰素信号 表明其 抑制先天免疫效应 并阻碍蛋白质进入细胞核 抑制共转染表达结构和在泡状结构亚细胞器定 位 其N 端区域可能具有诱导膜重排和病毒复制 两个功能 46 7A蛋白是一种I型跨膜蛋白 7A通过半胱天 冬酶依赖途径诱导细胞凋亡 可以作为RNA抑制 剂 抑制细胞蛋白质合成 激活p38丝裂原活化蛋 白激酶 MAPK 抑制细胞周期进程在 G0 G1期 7A蛋白与人类Ap4A水解酶相互作用 可能参与调 节细胞增殖 DNA复制 RNA加工 细胞凋亡和 DNA修复 47 SARS CoV9B蛋白扩散进入细胞核 经过主动 CRM1介导核质出口和核保留并触发细胞凋亡 48 4展望 迄今为止 SARS CoV三个重要蛋白组研究显 示 前两个蛋白质组 即多聚蛋白 pp1a pp1ab 和 结构蛋白 所有冠状病毒都有同源相似之处 详 细分析显示其重要差异 但这些差异是否有助于 对于冠状病毒解认识仍有待进一步研究 而第三 组病毒蛋白 即位于S和N蛋白之间各群独特辅助 蛋白基因序列 在冠状病毒之间并没有相似性和 规律 对这些独特ORF特性解可以深入理解冠状 病毒与宿主相互作用及其与临床症状和病理变化 关系 更加深入地揭示其病理发生机制 参考文献 1 Gorbalenya A E Enjuanes L Ziebuhr J et al Nidovirales evolving the largest RNA virus genome J Virus Res 2006 117 1 17 37 2 Adams M J Carstens E B Ratification vote on taxonomic propos als to the International Committee on Taxonomy of Viruses 2012 J Arch Virol 2012 157 7 1411 1422 3 Woo P C Lau S K Lam C S et al Discovery of seven novel Mam malian and avian coronaviruses in the genus deltacoronavirus sup ports bat coronaviruses as the gene source of alphacoronavirus and betacoronavirus and avian coronaviruses as the gene source of gammacoronavirus and deltacoronavirus J J Virol 2012 86 7 3995 4008 4 Lai M M Cavanagh D The molecular biology of coronaviruses J Adv Virus Res 1997 48 1 100 5 Le P S Feline and canine coronaviruses common genetic and pathobiological features J Adv Virol 2011 2011 609465 6 Osborne C Cryan P M O Shea T J et al Alphacoronaviruses in 152 李广兴等 冠状病毒基因组结构和相关蛋白研究进展第9期 New World bats prevalence persistence phylogeny and poten tial for interaction with humans J PLoS One 2011 6 5 e19156 7 Vijaykrishna D Smith G J Zhang J X et al Evolutionary insights into the ecology of coronaviruses J J Virol 2007 81 8 4012 4020 8 Woo P C Wang M Lau S K et al Comparative analysis of twelve genomes of three novel group 2c and group 2d coronaviruses re veals unique group and subgroup features J J Virol 2007 81 4 1574 1585 9 Woo P C Huang Y Lau S K et al Coronavirus genomics and bio informatics analysis J Viruses 2010 2 8 1804 1820 10 Van Boheemen S De Graaf M Lauber C et al Genomic charac terization of a newly discovered coronavirus associated with acute respiratory distress syndrome in humans J MBio 012 3 6 11 Thor S W Hilt D A Kissinger J C et al Recombination in avian gamma coronavirus infectious bronchitis virus J Viruses 2011 3 9 1777 1799 12 Mardani K Noormohammadi A H Hooper P et al Infectious bronchitis viruses with a novel genomic organization J J Virol 2008 82 4 2013 2024 13 Mihindukulasuriya K A Wu G St L J et al Identification of a novel coronavirus from a beluga whale by using a panviral micro array J J Virol 2008 82 10 5084 5088 14 Dong B Q Liu W Fan X H et al Detection of a novel and highly divergent coronavirus from asian leopard cats and Chinese ferret badgers in Southern China J J Virol 2007 81 13 6920 6926 15 Li L Kang H Liu P et al Structural lability in stem loop 1 drives a 5 UTR 3 UTR interaction in coronavirus replication J J Mol Biol 2008 377 3 790 803 16 Liu P Li L Keane S C et al Mouse hepatitis virus stem loop 2 adopts a uYNMG U a like tetraloop structure that is highly func tionally tolerant of base substitutions J J Virol 2009 83 23 12084 12093 17 Yang D Liu P Giedroc D P et al Mouse hepatitis virus stem loop 4 functions as a spacer element required to drive subgenomic RNA synthesis J J Virol 2011 85 17 9199 9209 18 Liu P Li L Keane S C et al Mouse hepatitis virus stem loop 2 adopts a uYNMG U a like tetraloop structure that is highly func tionally tolerant of base substitutions J J Virol 2009 83 23 12084 12093 19 Hsue B Hartshorne T Masters P S Characterization of an essen tial RNA secondary structure in the 3 untranslated region of the murine coronavirus genome J J Virol 2000 74 15 6911 6921 20 Thiel V Ivanov K A Putics A et al Mechanisms and enzymes in volved in SARS coronavirus genome expression J J Gen Virol 2003 84 Pt 9 2305 2315 21 Neuman B W Joseph J S Saikatendu K S et al Proteomics analy sis unravels the functional repertoire of coronavirus nonstructural protein 3 J J Virol 2008 82 11 5279 5294 22 Narayanan K Huang C Lokugamage K et al Severe acute respi ratory syndrome coronavirus nsp1 suppresses host gene expres sion including that of type I interferon in infected cells J J Virol 2008 82 9 4471 4479 23 Kamitani W Narayanan K Huang C et al Severe acute respirato ry syndrome coronavirus nsp1 protein suppresses host gene ex pression by promoting host mRNA degradation J Proc Natl Acad Sci U S A 2006 103 34 12885 12890 24 Tohya Y Narayanan K Kamitani W et al Suppression of host gene expression by nsp1 proteins of group 2 bat coronaviruses J J Virol 2009 83 10 5282 5288 25 Huang C Lokugamage K G Rozovics J M et al SARS coronavi rus nsp1 protein induces template dependent endonucleolytic cleavage of mRNAs viral mRNAs are resistant to nsp1 induced RNA cleavage J PLoS Pathog 2011 7 12 e1002433 26 Zhao L Rose K M Elliott R et al Cell type specific type I inter feron antagonism influences organ tropism of murine coronavirus J J Virol 2011 85 19 10058 10068 27 Nogales A Marquez Jurado S Galan C et al Transmissible gas troenteritis coronavirus RNA dependent RNA polymerase and nonstructural proteins 2 3 and 8 are incorporated into viral parti cles J J Virol 2012 86 2 1261 1266 28 Neuman B W Joseph J S Saikatendu K S et al Proteomics analy sis unravels the functional repertoire of coronavirus nonstructural protein 3 J J Virol 2008 82 11 5279 5294 29 Neuman B W Joseph J S Saikatendu K S et al Proteomics analy sis unravels the functional repertoire of coronavirus nonstructural protein 3 J J Virol 2008 82 11 5279 5294 30 Sparks J S Lu X Denison M R Genetic analysis of Murine hepa titis virus nsp4 in virus replication J J Virol 2007 81 22 12554 12563 31 Gadlage M J Sparks J S Beachboard D C et al Murine hepatitis virus nonstructural protein 4 regulates virus induced membrane modifications and replication complex function J J Virol 2010 84 1 280 290 153 第44卷东北农业大学学报 32 Clementz M A Kanjanahaluethai A O Brien T E et al Mutation in murine coronavirus replication protein nsp4 alters assembly of double membrane vesicles J Virology 2008 375 1 118 129 33 Fang S Shen H Wang J et al Functional and genetic studies of the substrate specificity of coronavirus infectious bronchitis virus 3C like proteinase J J Virol 2010 84 14 7325 7336 34 Cottam E M Maier H J Manifava M et al Coronavirus nsp6 pro teins generate autophagosomes from the endoplasmic reticulum via an omegasome intermediate J Autophagy 2011 7 11 1335 1347 35 Bost A G Prentice E Denison M R Mouse hepatitis virus repli case protein complexes are translocated to sites of M protein accu mulation in the ERGIC at late times of infection J Virology 2001 285 1 21 29 36 Cheng A Zhang W Xie Y et al Expression purification and characterization of SARS coronavirus RNA polymerase J Virolo gy 2005 335 2 165 176 37 Miknis Z J Donaldson E F Umland T C et al Severe acute respi ratory syndrome coronavirus nsp9 dimerization is essential for effi cient viral growth J J Virol 2009 83 7 3007 3018 38 Mcbride R Fielding B C The role of severe acute respiratory syn drome SARS coronavirus accessory proteins in virus pathogene sis J Viruses 2012 4 11 2902 2923 39 Heald Sargent T Gallagher T Ready set fuse The coronavirus spike protein and acquisition of fusion competence J Viruses 2012 4 4 557 580 40 Neuman B W Kiss G Kunding A H et al A structural analysis of M protein in coronavirus assembly and morpholog