分子生物学考题-全部.doc

名词解释1. 断裂基因: 真核生物结构基因，由若干个编码区和非编码区互相间隔开但又连续镶嵌而成，去除非编码区再连接后，可翻译出由连续氨基酸组成的完整蛋白质，这些基因称为断裂基因。2. 假基因: 假基因(pseudogene)具有与功能基因相似的序列，但由于有许多突变以致失去了原有的功能，不能转录或转录后生成无功能的蛋白质的基因，常用表示。3. 基因组: 基因组（genome）：是指一个物种的单倍体所携带的全部遗传信息。 4. C-value: C值（C value）：一种生物体单倍体基因组的DNA含量总是恒定的，它通常称为该物种DNA的C值。5. 质粒（plasmid）：是指一类染色体外具有自主复制能力的环状双链DNA分子，属染色体外基因组。6. 单核苷酸多态性 (SNPs): SNP是由基因组DNA上的单个碱基的变异引起的DNA序列多态性。是人群中个体差异最具代表性的DNA多态性，相当一部分还直接或间接与个体的表型差异、对疾病的易感性或抵抗能力、对药物的反应性等相关。7. 蛋白质组: 蛋白质组学是独立于基因组学而发展起来的一门新兴的前沿学科，它在特定的时间和特定的空间研究一个完整的生物体（或细胞）所表达的全体蛋白质的特征，包括蛋白质的表达水平，翻译后的修饰，蛋白质与蛋白质相互作用等，从而在蛋白质水平上获得对于有关生物体生理、病理等过程的全面认识。8. 基因工程: 基因工程（genetic engineering）：又称基因操作，指将不同的生物基因在体外通过人工剪切，组合并和载体（质粒，噬菌体，病毒）DNA连接，然后导入宿主细胞去复制扩增，使转入的基因在细胞内高效表达，并合成该基因所编码的蛋白质。基因工程包括基因重组、克隆和表达，其核心技术是构建重组体DNA技术。9. 限制性核酸内切酶: （restriction endonuclease），简称限制酶：是一类能够识别和切割某种特定核苷酸序列并能产生具有二重对称特异序列结构的水解酶。10. 10. 克隆载体: (cloning vector):能使插入的外源DNA序列在受体细胞中复制扩增并产生足够量目的基因的载体。 11. 表达载体: expression vector在常用的克隆载体中加入一些与表达调控有关的元件（DNA序列）即为表达载体，它不仅可携带外源基因片段进入宿主细胞，而且可在宿主细胞中表达外源基因。12. cDNA文库: 以mRNA合成的互补DNA为基础构建的。由某一生物的特定器官或特定发育阶段细胞内总mRNA逆转录成互补cDNA所构成的重组DNA克隆群体。13. 基因组文库: (genomic library)：基因组文库是指将某生物的全部基因组DNA切割成一定长度的DNA片段克隆到某种载体上而形成的集合。 14. 感受态细胞: 感受态细胞(competent cell)：细胞膜结构改变、通透性增加并具有摄取外源DNA能力的细胞。15. 穿梭质粒: 所谓穿梭质粒是指一类人工构建的具有两种不同复制起点和选择标记，可以在两种不同类群宿主（如原核细胞和真核细胞）中存活和复制的质粒载体。 16. COS位点：cos位点（cohesive-end site):当DNA进入细菌细胞后，便迅速通过黏性末端配对形成双链环状的DNA分子，这种黏性末端结合形成双链的区域称为cos位点。17. 碱裂解法:在NaOH提供的高pH（12.012.6）条件下，用强阳离子去垢剂SDS破坏细胞壁，裂解细胞，与NaOH共同使宿主细胞的蛋白质与染色体DNA发生变性，释放出质粒DNA。18. 核酸变性：在某些理化因素的作用下，维系DNA分子二级结构的氢键和碱基堆积力受到破坏，DNA由双螺旋变成单链过程。19. 核酸复性：指变性 DNA 在适当条件下，二条互补链全部或部分恢复到天然双螺旋结构的现象，它是变性的一种逆转过程 。20. 核酸分子杂交：两条DNA链或两条RNA链或一条DNA链和一条RNA链按碱基互补的原则缔合成异质双链的过程称为分子杂交或核酸分子杂交。21. 融解温度: 在热变性过程中，紫外吸收值达到最大值的50%时的温度称为DNA的解链温度或融解温度。22. 退火：热变性DNA一般经缓慢冷却后即可复性，此过程称之为“退火”。23. 核酸探针：则特指能与靶核酸序列发生碱基互补杂交，并能由其标记被特异性检测的核酸分子。24. Northern杂交：主要是用DNA探针检测分析mRNA分子大小及mRNA的转录情况的一种膜上印迹技术。25. Southern杂交：是一种经典的膜上检测DNA的杂交技术，它通常是指通过吸附或电泳方法将经凝胶电泳分离的DNA从胶上转移到固相载体上，再与特定的核酸探针反应从而达到检测或鉴定DNA的过程。基本方法可分为酶切、电泳、变性、印迹、预杂交、杂交及检测几个步骤。26. 荧光原位杂交：是一种利用非放射性的荧光信号对原位杂交样本进行检测的技术。27. PCR：聚合酶链反应（polymerase chain reaction，PCR） 技术：是利用针对目的DNA序列设计的一对特异引物，以目的DNA序列为模板，在耐热的DNA聚合酶作用下，经过多次“变性-复性-延伸反应”的循环过程，体外扩增目的DNA序列的技术。PCR技术具有特异、敏感、产率高、 快速、 简便、重复性好、易自动化等突出优点。28. 巢式PCR：是指使用两对引物，外引物用于扩增含目的DNA片段的大片段，扩增产物作为内引物的模板进一步扩增目的DNA片段的技术。其优点是第一次的非特异性扩增产物不大可能作为第二次扩增的模板，从而大大提高了PCR的特异性。 29. 逆转录PCR ：（反转录PCR， RT-PCR）：是指在逆转录酶作用下，先将模板RNA逆转录为互补DNA（cDNA），再以cDNA为模板通过PCR进行DNA扩增的技术。30. 29.多重PCR：该技术是在一个反应体系中加入多对引物，同时扩增出多个核酸片段，由于每对引物扩增的片段长度不同，可用电泳加以鉴别。多重PCR主要用于多种病原微生物的同时检测或病原微生物、遗传病及癌基因的分型鉴定。31. TD PCR：根据引物Tm值，选定一个退火温度范围（跨越10-20的温度范围，引物Tm值在这个范围之内）。在设置循环参数时，让退火温度从选定范围的最高温度开始，逐步降低退火温度（每次降低1-5），最后结束在选定范围的最低温度。在每一个退火温度上循环2-5次。32. 荧光定量PCR：在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号累积实时监测整个PCR进程，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。简答题简述遗传信息传递的中心法则。指遗传信息从DNA传递给RNA，再从 RNA传递给蛋白质，即完成遗传信息转录和翻译的过程，也可以从DNA传递给DNA，即完成DNA的复制过程，这是所有有细胞结构的生物所遵循的法则。在某些病毒中的RNA自我复制（如烟草花叶病毒等）和在某些病毒中能以RNA为模版逆转录成DNA的过程（某些致癌病毒）是对中心法则的补充。简述病毒基因组的结构与功能特点。病毒基因组基因组很小，且大小相差较大。病毒基因组可以由DNA组成，或由RNA组成。多数RNA病毒的基因组是由连续的RNA链组成；基因重叠。基因组的大部分可编码蛋白质，只有非常小的一部份不编码蛋白质。形成多顺反子结构（polycistronie）。 病毒基因组都是单倍体（逆转录病毒除外）。噬菌体（细菌病毒）的基因是连续的，而少数真核细胞病毒的基因是不连续的。简述原核生物基因组的结构与功能特点。 基因组较小（106bp107bp）。操纵子结构是原核生物基因组的功能单位。结构基因均为单拷贝基因（除18s、28s、5s rRNA及tRNA基因外）。不编码的DNA序列约占全基因组的10%以内（比真核生物少得多）：基因组中几乎没有重复序列，基因间几乎没有间隔，基因内没有内含子（古细菌除外）。不编码部分通常包含调控基因表达的序列DNA分子中有各种功能区，如复制起始区OriC，复制终止区TerC，转录起始区和终止区等，这些区域往往有反向重复序列，能形成特殊的结构。简述真核生物基因组的结构与功能特点。1. 基因组DNA与蛋白质结合形成染色体，储存于细胞核内， 除配子细胞外， 体细胞内基因组是双份的（即双倍体，diploid），有两份同源的基因组。2. 基因转录产物为单顺反子。一个结构基因经过转录生成一个mRNA分子，再翻译生成一条多肽链。3. 存在重复序列，重复次数可达百万次以上。4. 基因组中不编码的区域多于编码的区域。5. 大部分基因含有内含子，因此，基因是不连续的（断裂基因，split gene）6. 基因组远远大于原核生物的基因组，具有许多复制起始点，而每个复制子的长度较小试述双向凝胶电泳技术的基本原理。（出处：百度）根据蛋白质的等电点（第一向）和分子量（第二向）的不同进行分离。2、电泳后根据蛋白质的上样量对胶进行考马斯亮兰染色、银染或荧光染色，然后用相关软件对电泳图象进行分析。试述酵母双杂交技术的基本原理。 酵母双杂交系统利用真核生物转录调控因子的组件式结构特征。这些蛋白质往往由两个或两个以上相互独立的结构域构成。DNA结合结构域（DNA binding domain，BD）和转录激活结构域（activation domain，AD）是转录激活因子发挥功能所必须的。单独的BD能与特定基因的启动区结合，但不能激活基因的转录。而由不同转录调控因子的BD和AD所形成的杂合蛋白却能行使激活转录的功能。简述蛋白质组学的应用及其研究意义。应用： 疾病的蛋白质组研究 病原微生物的蛋白质组研究 蛋白质组在药物开发中的应用 意义存在3个层次的调控：转录水平调控翻译水平调控翻译后水平调控蛋白质存在复杂的翻译后修饰，作为生命功能的行使者，它比基因更能直接地反映生理过程及其变化。蛋白质相互作用及空间构向等问题是生命现象复杂性的真实体现。试述蓝白斑筛选的基本原理。 某些质粒载体带有大肠杆菌乳糖操纵子的lacZ基因，该基因含一段编码b-半乳糖苷酶氨基末端146个氨基酸a-肽的DNA片段，IPTG可诱导此片段合成a-肽链，此片段能与宿主细胞所编码的缺陷型b-半乳糖苷酶实现基因内a-互补，合成完整的b-半乳糖苷酶。该酶能催化指示剂底物X-gal形成蓝色菌落。 当外源基因插入lacZ 基因中MCS，lac a-肽基因阅读框架被破坏，细菌内将无b-半乳糖苷酶活性，结果重组克隆呈白色菌落，这是常用的蓝白斑筛选实验。简述分子克隆的基本步骤。目的基因的获取载体的选择目的基因和载体酶切与连接重组DNA导入受体细胞重组体的筛选和鉴定例举几种基因工程中重组体筛选和鉴定的方法。一、生物学法：根据重组载体特征的直接选择， 抗生素抗性标记、噬菌斑形成、遗传互补等二、核酸分子杂交法：菌落原位杂交、DNA、RNA印迹 三、免疫分析四、根据DNA限制酶的酶谱分析五、双脱氧终止法测定11. 简述cDNA文库构建的基本过程。分离目的基因的mRNAcDNA文库第一链的合成水解去除mRNA