病理室常用试剂配制方法.ppt

病理常用试剂及染液的配制 南昌高新达安临床检验所 病理常用试剂及染液的配制 1 苏木素配制方法2 伊红配制方法3 脱钙液配制方法4 盐酸酒精配制方法5 福尔马林配制方法 苏木精染色液的配制 石蜡切片苏木精伊红 HE 染色技术是病理 解剖学 组织胚胎学 法医学和生物学等领域最基本的技术操作 对于苏木精 应该有一个全面的了解 才能对常规的HE染色灵活掌握 苏木精 又称苏木素 苏木精若存放过久或接触空气 颜色可慢慢加深 用其染液就不理想 它易溶于乙醇 乙二醇和甘油 微溶于水 它本身不是一种染料 没有染色性能 需要经过氧化和媒染后 才成为一种很好的细胞核染料 人工氧化 是指在配制苏木精染液时加入一定量的氧化剂如氧化汞 碘酸钠等可立即使苏木精氧化成苏木红 但要注意加入氧化剂的量不能太多 不要使苏木精分子全部氧化变成苏木红 否则 苏木精染液的染色力减弱甚至失效 苏木精染色液的配制 苏木精氧化剂中首选碘酸钠 其优点是在室温下易溶于水 不需煮沸就能放氧 氧化后 产生的碘化钠是无害的 染液的稳定性好 而氧化汞需要在苏木精染液煮沸时加入才能放氧 当开始放氧时又要立即把染液置入冷水中终止放氧 随后苏木精染液每天都会在液面形成一层金属膜 需要把染液过滤后才能用以染色 而汞盐也是一种毒性物质 苏木精染色液的配制 苏木精的氧化与下列因素有关 苏木精染液PH值 染液偏碱性氧化快 中性时稍慢 酸性时很慢 所以加酸时的苏木精染液可延缓氧化 氧化剂的量 加入人工氧化剂后苏木精可立即被氧化成熟可用 自然氧化和供氧量有关 如靠近阳光 染液通风 经常摇动等可加速氧化 氧化时苏木精液的温度 用碘酸钠等作氧化剂时 在常温下加入即可 而用氧化汞作氧化剂时 需把苏木精液煮沸时加入才能放氧 苏木精染色液的配制 苏木精的媒染 苏木精被氧化成苏木红 为弱酸性 染色浅淡 但当加入二价或三价的金属盐如铝 铁盐后 染料分子就能与这些金属盐的离子结合形成色淀 这种色淀具有阳电荷 和带负电荷的DNA极性吸着而完成染色 这些二价或三价的金属盐就称为媒染剂 苏木精染色液的配制 配制苏木精染液所需试剂的作用 氧化汞 碘酸钠 作为苏木精的氧化剂 使无染色力的苏木精氧化后转变成有染色力的苏木红 硫酸铝钾 硫酸铝铵和硫酸铝 作为媒染剂 其三价铝离子与苏木红结合形成蓝紫色的色淀与细胞核内核酸的磷酸基牢固结合 无水乙醇 较快溶解苏木精 并可抑制霉菌生长 苏木精染色液的配制 配制苏木精染液所需试剂的作用 甘油 作为稳定剂 延缓苏木精染液蒸发 防止苏木精过度氧化 延长苏木精液的使用期 冰醋酸 可抵销氧化剂的氧化 使苏木精和苏木红保持均衡 同时又可增加胞核的选择性染色 使胞核染色质显示得清晰细致 苏木精染色液的配制 改良Lillie Mayen苏木素染液的配制 A液 苏木素5g充分溶于无水乙醇50ml B液 硫酸铝钾50g溶于蒸馏水650ml 稍加热待完全溶解后把二者混合 再依次加入碘酸钠0 5g 甘油300ml和冰乙酸20ml 苏木素染液有效期3个月 苏木精染色液的配制 苏木精染色液的配制 苏木精染液配制是否理想 可从以下几方面检测 将几滴苏木精染液滴入一小盘自来水内 滴入的瞬间由红色转为紫色再转为紫蓝色慢慢扩散 则该苏木精液配制得好 若在扩散中仍保持红色 则为未足够成熟或陈旧的苏木精染液 取一块滤纸滴入苏木精染液两滴 苏木精在滤纸上扩散后不久将呈一紫酱色的圆斑 在圆斑的周边最后呈深紫色 这是好的苏木精液 若周边不呈深紫色 说明该染液未够成熟或没有配好 理想的方法还是在实际操作中染一张淋巴结组织切片 在镜下观察其染色效果 苏木精染色液的配制 伊红染色液的配制 伊红Y是一种化学合成的酸性染料 在水中离解成带负电荷的阴离子 与蛋白质的氨基正电荷的阳离子结合使胞浆染色 细胞浆 红细胞 肌肉 结缔组织 嗜伊红颗粒等被染成不同程度的红色或粉红色 与蓝色的细胞核形成鲜明对比 伊红是细胞浆的良好染料 先将伊红0 5 1g溶于95 酒精100ml中 用玻璃棒研碎溶解后 每100ml加冰醋酸一滴 用乙醇性伊红液染细胞浆后 可不经水洗直接用85 酒精脱水 伊红染色液有效期3个月 伊红染色液的配制 脱钙液的配制 在病理实验制作切片时 我们会经常碰到一些含钙组织 而且钙十分坚硬 由于组织中的钙和石蜡之间的密度不同 含钙的组织一般不能直接制作切片 因此 脱钙是制作骨组织切片的重要环节 用于脱钙的试剂很多 脱钙剂包括有机酸 无机酸 乙二胺四乙酸 EDTA 除此之外还有电解脱钙法 强有机酸 如硝酸和盐酸可用于密皮质骨的脱钙 在短时间内可除去大量的钙 但是这些强酸对组织形态会产生不良影响 脱钙作用强对组织破坏性大 脱钙液的配制 我们常用的脱钙液配制方法是 先将10 福尔马林10ml倒入80ml蒸馏水中 再加入盐酸10ml即可 脱钙液的有效期3个月 脱钙液的配制 盐酸酒精的配制 1 盐酸酒精 即由1ml37 浓盐酸加上99ml170 酒精配制而成 其实际浓度应该是0 37 的分化作用 主要是依靠盐酸在水中电离出H 改变组织表面的电荷 使过染和吸附的苏木素染料从组织中脱离 达到其分化目的 盐酸酒精的配制方法是 用滴定管配合吸耳球转移盐酸1ml至99ml70 乙醇中混匀即可 1 盐酸酒精有效期3个月 盐酸酒精的配制 福尔马林的配制 固定的目的是在于尽量使组织和细胞保持与生活时相仿的成分和形态 迅速防止组织 细胞的死后变化 防止自溶与腐败 使细胞内的蛋白质 脂肪 糖 酶等各种成分转变成不溶性物质 使组织中的各种物质沉淀和凝固起来 因此 固定的组织愈新鲜愈好 固定组织时 应使用足量的固定液 固定液的种类很多 分为单纯固定液和混合固定液 常用单纯固定液 1 甲醛 formaldehyde 2 乙醇 alcohol 3 醋酸 aceticacid 又名乙酸 福尔马林的配制 甲醛为非沉淀性固定剂 是一种约有40 重量溶于水的气体 易挥发 市售的为40 的甲醛水溶液 也称为福尔马林原液 formal