不明原因习惯性流产患者Th1Th2细胞亚群的研究.doc

不明原因习惯性流产患者Th1/Th2细胞亚群的研究作者：王雪楠,彭存旭,张海苓单位：济宁医学院附属医院，山东 济宁【摘要】 目的：通过对Th1/Th2细胞亚群分泌的不同细胞因子的研究，探讨不明原因习惯性流产患者体内Th1/Th2细胞亚群的变化。方法：用放射免疫法(RIA)检测了38例不明原因习惯性流产患者血清中Th1型细胞分泌的细胞因子IL2、IFNγ和Th2型细胞分泌的细胞因子IL10的水平变化。结果：不明原因习惯性流产患者血清中Th1型细胞分泌的细胞因子IL2和IFNγ的水平分别为(36.76±16.39)pg/ml和(73.35±109.8)pg/ml，显著高于正常对照组(5.2±3.9)pg/ml和(13.9±6.1)pg/ml(P<0.05)；Th2型细胞分泌的细胞因子IL10的水平为(6.8±4.1)pg/ml，显著低于正常对照组(42.56±7.9)pg/ml(P<0.05)。结论：不明原因习惯性流产患者体内Th1/Th2细胞亚群发生了Th2向Th1的漂移，为该病的诊疗及病情监测提供了新思路。 【关键词】 习惯性流产；Th1/Th2细胞亚群；细胞因子习惯性流产是一种常见的病理妊娠，其已知病因有遗传因素、内分泌失调、内生殖器解剖异常、感染、环境等，但50以上的患者发病原因不明，被认为与免疫因素密切相关1。通过临床观察和动物实验已经证实了流产是一种免疫排斥现象，是母体免疫系统对胚胎半同种异体抗原产生了免疫排斥反应的结果2，3。早在20世纪80年代已有学者提出抑制性T细胞(Ts)参与了母体胎儿免疫反应，目前辅助性T细胞(Th1/Th2亚群)及其相关细胞因子的研究正日益受到人们的重视。本研究通过对38例原因不明习惯性流产患者血清中Th1/Th2型细胞因子IL2、IFNγ和IL10水平的变化探讨了原因不明习惯性流产患者体内Th1/Th2型细胞亚群的改变，旨在为习惯性流产的病情监测及免疫治疗提供理论依据。1 材料和方法1.1 研究对象 患者组38人，均为2000年7月至2005年10月来我院妇产科就诊，经临床确诊为习惯性流产患者，年龄24岁43岁，平均年龄29.6岁，自然流产次数不少于3次；对照组17人，为正常妊娠妇女，随访至分娩无流产现象发生，年龄23岁38岁，平均年龄28.3岁。1.2 研究方法1.2.1 标本采集 患者组和正常对照组均无菌采集空腹静脉自凝血5 ml，血液凝固后3 000 r/min,5 min后，分离血清置Eppendorf管中，-20 冻存备测。1.2.2 标本检测 采用放射免疫法检测了38例患者组和17例正常对照组血清中IL2、IFNγ和IL10的水平，试剂由北京北方免疫研究所提供，严格按照试剂盒说明书操作。1.2.3 统计学分析 结果以±s表示，数据分析采用两样本均数比较的t检验。2 结果不明原因习惯性流产患者血清中Th1型细胞分泌的细胞因子IL2和IFNγ的水平分别为(36.76±16.39)pg/ml和(73.35±109.8)pg/ml，显著高于正常对照组(5.2±3.9)pg/ml和(13.9±6.1)pg/ml，P<0.05；Th2型细胞分泌的细胞因子IL10的水平为(6.8±4.1)pg/ml，显著低于正常对照组(42.56±7.9)pg/ml，P<0.05，见表1。表1 患者组和正常对照组血清TH1/TH2型细胞因子IL2, IFNγ,IL10的水平（略）注：与正常对照组相比*P<0.05。3 讨论正常妊娠是母体免疫系统对携有源于父方异体抗原的胚胎进行成功识别并产生保护性免疫应答，直至胎儿娩出的过程4，其中辅助性T细胞Th1/Th2亚群及其分泌的相关细胞因子起了很重要的调节作用。Th1细胞亚群以高表达IL2和IFNγ为主，可以增强杀伤细胞的细胞毒作用，激发迟发型超敏反应，介导细胞免疫应答。Th1型细胞因子对滋养层细胞生长、胚胎发育和胎儿生存具有很强的抑制作用。Th2细胞亚群则以表达IL10、IL4和IL6为主，介导体液免疫应答，可刺激滋养层细胞生长、诱导母体对胎儿的免疫耐受等，促进妊娠成功。Th1/Th2平衡状态的失调与微生物感染、肿瘤免疫逃逸、自身免疫性疾病的发生和移植排斥反应等密切相关，也是决定妊娠发展方向的重要因素之一5。Wegmann等6早在1993已在动物实验中证实妊娠母鼠外周血淋巴细胞分泌的细胞因子IL4、IL10和IL5的水平明显升高，而 IFNγ的水平降低，由此他们提出了正常妊娠是以Th2型细胞因子为主的生理现象。本研究采用放射免疫法对不明原因习惯性流产患者血清中Th1型细胞因子IL2、IFNγ和Th2型细胞因子IL10的水平变化进行了探讨，发现Th1型细胞因子IL2和IFNγ的水平都显著高于正常对照组，而Th2型细胞因子IL10的水平显著低于对照组。提示了不明原因习惯性流产患者体内发生了 Th1/Th2细胞亚群间的漂移,相应细胞因子的网络调节作用失衡。高表达的Th1型细胞因子IL2能促使NK细胞转化为淋巴因子激活杀伤细胞(LAKC),可非特异性地溶解滋养层细胞，造成胚胎吸收而导致流产；IFNγ可以增强胎儿人类白细胞抗原(HLA)分子的表达，打破了机体正常妊娠的免疫耐受状态，同时抑制了滋养层细胞的生长，导致了胎儿死亡。还有学者认为细胞因子并非直接作用于滋养层细胞引起流产，而是通过刺激母体子宫血管内皮细胞高表达fg12，启动了凝血过程，导致了血栓形成及炎症反应，最终导致胎儿死亡7。IL10是由细胞因子合成抑制因子(cytokine synthesis inhibitory factor, CSIF)更名而来，是1989年Fiorention等研究发现的，它的免疫调节作用是双向的，既可激活也可以抑制，以抑制为主8。正常妊娠时，它一方面可以直接抑制NK细胞和Th1型细胞分泌细胞因子，同时还可以通过树突状细胞、巨噬细胞等抗原递呈细胞(APC)有效抑制抗原递呈和免疫共刺激信号的产生，从而诱导了胎儿免疫耐受9。本研究发现习惯性流产患者血清中Th2型细胞因子IL10的水平明显下降，提示了Th2型细胞亚群向Th1亚群的漂移，使相关细胞因子的免疫调节异常，导致了妊娠失败。已有报道使用外源性细胞因子对原因不明复发性流产患者进行探索治疗，并取得了一定疗效的报道10，11，推测与补充或逆转了Th1/Th2亚群的免疫平衡有关。本研究为进一步探讨不明原因习惯性流产的发病机制及其病情监测和免疫治疗提供了理论依据。【参考文献】 1 Mowbray JF, Underwood JL. Immunology of abortionJ. Clinical IXP Immunol,1985,60(1):17.2 Ramhorst R,Agriello E, Zitterman S, et al. Is the paternal monocular cells immunization a successful treatment for recurrent spontaneous abortionJ. Am J Reprod Immunol,2000,44(3):129135.3 Manoj KP, Vijay S, Suraksha A. Characterization of mixed lymphocyte reaction blocking antibodies(MLRBf) in human pregnancyJ. BMC Pregnancy and Childbirth,2003,3(2):14712393.4 居中亮，范丽安，陆丽华，等.T辅助细胞1、2细胞因子平衡与正常妊娠及习惯性流产关系的初步探讨J.中华妇产科杂志，2000，35(8)：473475.5 Raghupathy R. Th1type immunity is incompatible with successful pregnancyJ. Immunol Today,1997,18:478482.6 Wegmann TG, Lin H,Guilbert L, et al. Bidirectional cytokine interaction in the maternalfetal relationship is successful pregnancy a Th2 phenomenonJ. Immunol Today,1993,14:353356.7 Clark DA, Chaouat G, Arck PC， et al. Cytokinedependent abortion in CBAXDBA/2 mice is mediated by the procoagulant fg 12 prothombinaseJ. J Immunol,1998,160:545549.8 Bry K， Lappalainen U. Interleukin4 and transforming growth factorβ modulate the production of interleukin1 receptor antagonist and of prostaglandin E2 by decidual cellsJ. Am J Obstet Gynecol,1994,170(4):11941198.9 Mosmann TR， Moore KW. The role of IL10 in crossregulation of T(H)I and T(H)2 responseJ. Parasitol Today,1991,7(3):4953.10 朱晓勇，李大金，严缘昌.干预CD86协同刺激信号对母胎界面Th1/Th2型细胞因子转录调控及妊娠结局的影响J.生殖与避孕，2004，24(2)：6569.11 Yamada H, Morikawa M, Furuta I, et al. Intravenous immuno