纳米载银抗菌剂的经口急性毒性.doc

题目： 纳米载银无机抗菌剂的经口途径急性毒性评价1、 研究目的及意义：银制剂具有良好的抗菌性能，因其抗菌机制特殊而具有抗菌谱广不宜产生耐药等优点，得到了各个行业的广泛应用。纳米级银制剂表面积与粒径之比更大，更好地发挥了银制剂抗菌剂的抗菌活性。无机抗菌材料以其优异的性能越来越受到人们的重视, 其与普通材料相比, 具有耐老化, 耐高温, 综合性能优良, 抗菌性稳定、长久等优点。将无机抗菌剂添加到口腔材料之中使其具有一定的抗菌性, 以期减少修复后继发龋的产生, 延长修复体的使用寿命, 目前已经引起很多学者的关注。前期研究证明：在一定的添加比例范围内，纳米载银无机抗菌剂的室温固化PMMA材料有良好的抗菌性，且抗菌性较持久，同时可以保持口腔修复体室温固化PMMA良好的机械性能。 Ag可以进入血液循环，并在全身其它的组织和器官中蓄积，当达到一定的剂量后，会对人体产生肝毒性、肾毒性，严重时甚至可以导致死亡发生。作为将应用于人体的医用材料，纳米载银无机抗菌剂应具有良好的生物性能，以保证其临床应用安全有效。本实验以经口灌注染毒小鼠，观察14内其急性毒性反应，以及对各个器官的影响，以期为它的临床应用提供实验依据。3、 国内外研究进展： Rosenman K,Wan A等证实过量的银会蓄积于皮肤、肝、肾、脾、眼角膜牙龈粘膜和指甲。国外其他研究还表明长期摄入低剂量的银化合物可引起肝脏和肾脏的脂肪变性,血细胞的变化。但是银在某些器官和组织聚集,很少的数据显示可能的毒性作用。 陈丹丹等研究纳米银对人体的潜在不良生物学效应，把纳米银以0.33g /kg的剂量植入大鼠背部皮下组织个月后，纳米银进入大鼠体内后在组织中的分布顺序依次是脾 肾 睾丸 肾上腺 肝 肺 心 子宫和卵巢 脑 前列腺 血清。 汤京龙对大鼠皮下注射纳米银制剂发现肾、肝中的银含量显著高于空白对照组。并得出肾、肝、脾、脑、肺是其在体内的主要靶器官的结论。汤京龙认为这可能是因为纳米银随血液流动到器官后，会激活这些巨噬细胞，进而吞噬纳米银。被吞噬的纳米银一方面有可能在巨噬细胞内被降解，另一方面纳米银也有可能无法在巨噬细胞中被消化，此时纳米银既可能长期蓄积在巨噬细胞内、也有可能又被巨噬细胞吐出，蓄积在器官中。在试验中还发现，肾脏也是纳米银的靶器官，这可能是因为血液流经肾小球时，纳米银颗粒被滤过膜滤下，从而蓄积在肾部，其在肾脏中的清除方式还需要进一步的研究确定。张富强等同时把6种纳米载银无机抗菌剂按不同浓度稀释培养小鼠成纤维细胞株，发现六种100g/L纳米载银无机抗菌剂的浸提液对小鼠成纤维细胞均有毒性。课题组前期研究表明，体外直接溶血试验、口腔黏膜刺激试验及体外细胞毒性均为阴性。 陆云涛等采取一次经口灌胃染毒法对小鼠进行急性毒性实验，磷酸锆无机载银抗菌剂的量高达5000mg/kg时，14天内未见明显的中毒体征，而且病理结果显示各脏器均正常。急性毒性分级属于实际无毒级。实验材料和器材：试验方法： 称取RHA-1型抗菌剂溶解于蒸馏水中，分别配成下列浓度的溶液：20mg/ml、80mg/ml、200mg/ml，于121下高压蒸汽灭菌30min。40只健康昆明小鼠，雌雄各半，体重25g左右（体重之间相差不得超过平均体重的20，雌鼠未孕未育）。随机分为四组每组10只，雌雄各半，雌雄分开喂养。实验前在实验室环境下喂养4d，使之适应环境。实验前每只小鼠分别称重并记录，按体重给每组小鼠灌胃给服蒸馏水和不同浓度的抗菌剂溶液25ml/kg。灌胃前禁食4-18h，不禁水。分组A组B组C组D组抗菌剂的量对照（蒸馏水）1000mg/kg2000mg/kg 5000mg/kg1,每天观察项目：动作、对刺激的反应，粪便外观，皮肤及皮毛颜色，瞳孔，眼睑眼球，鼻孔分泌物，会阴部,呼吸节律性。2，每天称取每只小鼠体重，每组小鼠摄食量。3，每天尿量，并在每天同一时间取新鲜尿样（提尾法），测尿蛋白（其中主要为白蛋白）、上皮细胞、管型尿。（KIM、半胱氨酸蛋白酶抑制剂C( cystatin C，Cys-C)、微量白蛋白）。4,14天后，腹腔注射麻药麻醉小鼠，解剖取肝脏、肾脏、脑、肺、脾脏、心脏等重要器官，观察大体形态，称各脏器的湿重，计算脏器与体重之比，并制作切片，做病理学检查。5，解剖至胸腔心脏时，注射器刺入心脏取血，检测ALP、AST、ALT、肌酐、血尿素氮。同时进行红细胞计数、白细胞计数、白细胞分类计数、血红蛋白浓度检测。题目： 纳米载银无机抗菌剂的经口途径亚急性毒性评价实验材料和器材： 试验方法：称取RHA-1型抗菌剂溶解于蒸馏水中，分别配成下列浓度的溶液：20mg/ml、80mg/ml、200mg/ml，于121下消毒30min。40只健康大鼠，雌雄各半，体重130g左右（体重之间相差不得超过平均体重的20，雌鼠未孕未育）。随机分为四组每组10只，雌雄各半，雌雄分开喂养。实验前在实验室环境下喂养4d，使之适应环境。实验前每只小鼠分别称重并记录，按体重给每组小鼠灌胃给服蒸馏水和不同浓度的抗菌剂溶液25ml/kg。灌胃前禁食4-18h，不禁水。分组A组B组C组D组抗菌剂的量对照（蒸馏水）1000mg/kg200mg/kg 40mg/kg1,每天观察项目：动作、对刺激的反应，粪便外观，皮肤及皮毛颜色，瞳孔，眼睑眼球，鼻孔分泌物，会阴部,呼吸节律性。2，每天称取每只小鼠体重，每组小鼠摄食量。3，最后一周，记录每天尿量，并在每天同一时间取新鲜尿样（提尾法），测尿蛋白（其中主要为白蛋白）、上皮细胞、管型尿。（KIM、半胱氨酸蛋白酶抑制剂C( cystatin C，Cys-C)、微量白蛋白）。4,14天后，腹腔注射麻药麻醉小鼠，解剖取肝脏、肾脏、脑、肺、脾脏、心脏等重要器官，观察大体形态，并制作切片，做病理学检查。5，解剖至胸腔心脏时，注射器刺入心脏取血，检测ALP、AST、ALT、肌酐、血尿素氮。同时进行红细胞计数、白细胞计数、血红蛋白浓度检测。6，取大鼠股骨进行微核试验。微核试验：取股骨，用小牛血清冲洗股骨骨髓腔，制成细胞悬液，常规涂片，每只小鼠涂片1张。在空气中自然晾干后放入甲醇中固定1015 min。用Giemsa 储备液1份加PH6.8磷酸盐缓冲液6份配成Giemsa 应用液，染色1520 min，立即用蒸馏水冲洗并晾干。观察计数：先以低倍镜粗检，选择细胞分布均匀，染色良好的区域，再在油镜下按一定顺序进行嗜多染红细胞（PCE）和微核计数。嗜多染红细胞呈灰蓝色，成熟红细胞呈橘红色，微核多数为圆形，边缘整齐，嗜