荧光分光光度计验收细则.doc

岛津RF-5301PC荧光分光光度计的验收方案一、荧光分光光度计的方法原理某些物质由于受到光照射而被激发之后，会发射出比照射波长稍长的光（荧光），荧光强度与该物质的浓度有如下关系：式中：荧光强度；仪器常数；荧光量子效率激发光强 度荧光物质的摩尔吸收系数L荧光物质液层的厚度c荧光物质的浓度对于某个给定物质，激发光波长和强度固定，液层厚度固定，溶液浓度较低时，荧光强度和荧光物质的浓度有如下关系：二、试剂1、试剂及标准物质：2、标准溶液的配制：1）0.05mol/L硫酸标准溶液将1000mL的容量瓶中加入适量的二次蒸馏水，用滴定管取浓硫酸2.7mL，注入容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度，并混合均匀后放置备用。2）500mL110-5g/mL的硫酸奎宁标准溶液将硫酸奎宁固体在干燥器中放置24h以上。在分析天平上称准至5.00mg的硫酸奎宁标准物质至于500mL容量瓶中，用适量的0.05mol/L硫酸标准溶液溶解，然后再用0.05mol/L硫酸标准溶液稀释至刻度，摇匀即可。注：用深色玻璃瓶储存高浓度的标准液。溶液应低温、避光、密封储存。稀标准溶液应该现配现用。浓溶液有效期为半年。3、设备及器材三、验收标准及验收方法（仅对于色散型单色器（光栅）一）、波长示值误差及重复性1、标准：波长示值最大误差2.0nm；波长重复性1.0nm。2、验证方法：氙灯亮线法1)激发侧单色器波长示值误差和重复性将发色侧单色器置零级位置，将漫反射板（或无荧光的白色滤纸条）放入样品室，仪器的响应时间设置为：“快”，扫描速度设置为“中”，狭缝宽度为1.5nm，对激发侧单色器在（350550nm）的波长范围内进行扫描，在谱图上找到450.1nm处的光谱峰，并确定其峰值位置。连续测量三次，按照式（1）和式（2）分别计算波长示值误差和重复性。波长示值误差：(1)式中：波长测量值（nm）参考波长测量值（氙灯亮线参考波长测量值为：450.1nm）波长重复性：（nm）（2）2）发射侧单色器波长示值误差和重复性将激发侧单色器置零级位置，将漫反射板（或无荧光的白色滤纸条）放入样品室，仪器的响应时间设置为：“快”，扫描速度设置为“中”，狭缝宽度为1.5nm，对激发侧单色器在（350550nm）的波长范围内进行扫描，在谱图上找到450.1nm处的光谱峰，并确定其峰值位置。连续测量三次，按照式（1）和式（2）分别计算波长示值误差和重复性。二）、检出极限1、标准：用硫酸奎宁标准溶液的检出极限为510-10g/mL。2、验收方法：用0.05mol/L硫酸溶液做空白样，选取质量浓度为110-9g/mL硫酸奎宁标准溶液，灵敏度至最高档，狭缝宽度为1.5nm，激发波长350nm，发射波长为450nm，对空白液和标准液进行连续交替测量11次。如果测量中，有1次数据是由于外界干扰或是操作失误造成的误差，应该将此数据删除。每次测量的荧光强度：式中：标准溶液的荧光强度空白溶液的荧光强度荧光强度测量的平均值：（n测量次数）检测限是指二倍于标准偏差读数的物质的浓度。用符号DL表示；式中：11次测量的平均荧光强度c标准溶液的质量浓度s单次测量的标准偏差；三）、测量线性1、标准：仪器测量结果的线性值0.995。2、验收方法：用0.05mol/L硫酸溶液做空白样，将灵敏度至于高档，狭缝宽度为1.5nm，激发波长350nm，发射波长450nm，依此测量下表4中各浓度硫酸奎宁标准溶液。表4硫酸奎宁标准溶液(g/L)标准溶液号1234标准溶液浓度（cj）110-7410-7810-7110-6分别对4中质量浓度工作标准溶液与空白溶液连续交替3次测量，计算每次测量的荧光强度的平均值。用最小二乘法对4中标准溶液的质量浓度和荧光强度测量平均值进行处理，得到线性相关系数，几位测量线性的检定结果。最小二乘法的计算公式：注：cj作为X，作为Y即可进行计算。四)荧光光谱峰值强度的重复性1、标准：仪器测量荧光光谱峰值强度的重复性1.5%。2、验证方法：用0.05mol/L硫酸溶液做空白样，将灵敏度至于高档，狭缝宽度为1.5nm，激发波长350nm，发射波长450nm，用110-7g/mL的硫酸奎宁标准溶液，见光3min后，对发射波长从365500nm重复扫描三次。光谱强度的重复性由下式计算：式中：为光谱峰值强度的读数。五）稳定度1、标准：在10min中内基线漂移0.5%；荧光强度示值上限在10min内的漂移1.5%。2、验证方法调节灵敏度为中等强度，关闭光闸门，记录10min内的漂移；至激发波长和发射波长为450nm，至激发狭缝和发射狭缝的宽度为10nm，漫反射板置入样品室，调节灵敏度，使示值为90%，见光3min后，观察10min中示值的变化。荧光分光光度计检定记录一、外观与初