微生物药品配制.doc

一、 微生物药品配制1. 生理盐水：称取8.5g氯化钠溶于1000ml蒸馏水中，分装，121摄氏度高压灭菌20min。（国标15min）。2. 平板计数琼脂（菌落总数）：称取23.5g于1L蒸馏水中，加热煮沸至完全溶解，分装，121摄氏度高压灭菌15min，冷却至46摄氏度左右备用。3. 平板计数琼脂（嗜冷菌）：称取23.5g和1g脱脂乳粉于1L蒸馏水中，加热煮沸至完全溶解，分装，121摄氏度高压灭菌15min，冷却至46摄氏度左右备用。4. 脑心浸液琼脂：称取50g于1L蒸馏水中，加热煮沸至完全溶解，分装，121摄氏度20min高压灭菌后备用。临用前每250ml加入0.5ml维生素B12，B12为1mg/ml。5. 孟加拉红琼脂：称取31.6g于1L蒸馏水中，加热煮沸至完全溶解，分装，121摄氏度20min高压灭菌后备用。6. 月桂基硫酸盐胰蛋白栋：称取35.6g于1L蒸馏水中，加热煮沸至完全溶解，分装于有倒立发酵管的试管中，每管10ml，121摄氏度高压灭菌15min后备用。双料LST除蒸馏水外，其他成分加倍。7. 煌绿乳糖胆盐：称取40g于1L蒸馏水中，加热煮沸至完全溶解，分装于有倒立发酵管的试管中，每管10ml，121摄氏度高压灭菌15min后备用。8. 1mol氢氧化钠：称取40g氢氧化钠溶于1000ml蒸馏水中。9. 1mol盐酸：移取浓盐酸90ml，用蒸馏水稀释至1000ml。10. LB营养琼脂：称取34g于1L蒸馏水中，加热煮沸至完全溶解，分装，121摄氏度15min高压灭菌后备用。11. 营养肉汤：称取19g于1L蒸馏水中，加热煮沸至完全溶解，分装，121摄氏度15min高压灭菌后备用。12. 抗生素1号培养基：称取26g于1L蒸馏水中，加热煮沸至完全溶解，分装，115摄氏度30min高压灭菌后备用。13. 青霉素酶工作液（阿拉丁酶）：称取1mg用无菌生理盐水溶解，定容至100ml容量瓶中。14. 阿拉丁酶对应阳性对照样品：吸取10ul阿拉丁酶工作液溶于100ml灭菌脱脂乳粉中。15. 杯碟阴性对照样品：称取10g脱脂乳粉溶于90ml蒸馏水中，113摄氏度20min高压灭菌。16. 青霉素储备液（国产）：取0.1g用磷酸盐缓冲溶液定容至10ml，即10mg/ml。17. 青霉素工作液：吸取20ul青霉素储备液用磷酸盐缓冲溶液定容至10ml，即20ug/ml。18. 舒巴坦储备液：取0.1g用磷酸盐缓冲溶液定容至10ml，即10mg/ml。19. 舒巴坦工作液：取1ml舒巴坦储备液用磷酸缓冲溶液定容至10ml，即1mg/ml。二、 微生物结果报告1. 菌落计数可用肉眼观察，必要时用放大镜或菌落计数器，记录稀释倍数和相应的菌落数量。菌落计数以菌落形成单位表示（cfu）。1.1 选取菌落数在30300cfu之间，无蔓延菌落生长的平板计数菌落总数。低于30cfu的平板记录具体菌落数，大于300cfu的可记录为多不可计。每个稀释度的菌落数应采用两个平板的平均数。 1.2 其中一个平板有较大片状菌落生长时，则不宜采用，而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数；若片状菌落不到平板的一半，而其余一半中菌落分布又很均匀，即可计算半个平板后乘以2，代表一个平板菌落数。1.3 当平板上出现菌落间无明显界限的链状生长时，则将每条单链作为一个菌落计数。2.菌落总数的计算方法2.1 若只有一个稀释度平板上的菌落数在适宜计数范围内，计算两个平板菌落数的平均值，再将平均值乘以相应稀释倍数，作为每克（或灭毫升）中菌落总数结果。2.2 若有两个连续稀释度的平板菌落数在适宜计数范围内时，计算每ml牛奶中微生物的个数N，用以下的公式：c N = （n1+0.1n2）d这里c： 是所有皿上菌落数的总和n1： 是第一个稀释度培养皿上的平皿数n2： 是第二个稀释度培养皿上的平皿数d： 是与第一个稀释液相对应的稀释因子结果保留两位有效数字。结果以科学计数法表示。举例：微生物计数给出以下的结果（包括两个带盖培养皿）：在第一个稀释度（10E-2）：232和244个菌落在第二个稀释度（10E-3）：33和35个菌落c 232+244+33+35 544N = = =24727（n1+0.1n2）d2+（0.1*2）*10-2 0.022上述数据经“四舍五入”后，表示为25000，结果为2.5104cfu/ml。注：如果有两个以上可以计数的稀释度，公式应修改为用多个稀释度进行计算。如为三个稀释度，由下面的公式可计算出每毫升中微生物的数量。cN = （n1+0.1n2+0.01n3）d2.3 若所有稀释度的平板上菌落数均大于300，则对稀释度最高的平板进行计数，其他平板可记录为多不可计，结果按平均菌落数乘以最高稀释倍数计算。2.4 若所有稀释度的平板菌落数均小于30，则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数计算。2.5 若所有稀释度（包括液体样品原液）平板均无菌落生长，则以小于1乘以最低稀释倍数计算。2.6 若所有稀释度的平板菌落数均不在30-300之间，其中一部分小于30或大于300时，则以最接近30或300的平均菌落数乘以稀释倍数计算。3. 菌落总数的报告3.1 菌落数在100以内时，按“四舍五入”原则修约，采用两位有效数字报告。3.2 大于或等于100时，第三位数字采用“四舍五入”原则修约后，取前两位数字，后面用0代替；也可用10的指数形式来表示，按“四舍五入”原则修约后，采用两位有效数字。3.3 若所有平板上为蔓延菌落而无法计数，则报告菌落蔓延。3.4 若空白对照上有菌落生长，则此次检测结果无效。3.5 称重取样以CFU/g为单位报告，体积取样以CFU/ml为单位报告。4.嗜冷菌总数报告4.1 平板菌落数的选择平板有较大片状菌落生长时，则不宜采用，而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数，若片状菌落不到平板的一半，而另一半菌落分布又很均匀，即可计算半个平板后乘2以代表全皿菌落数。平板内若有链状菌落生长时（菌落之间无明显界限），若仅有一条链，可视为一个菌落；如果有不同来源的几条链，则应将每条链作为一个菌落计。4.2 稀释度的选择及报告4.2.1 选取菌落数在10-300之间的培养皿作为计数的测定标准。4.2.2 若有两个稀释度，其生长的菌落数在10-300之间，则按下面的方法计数。计算每ml牛奶中微生物的个数N，用以下的公式：c N = （n1+0.1n2）d这里c： 是所有皿上菌落数的总和n1： 是第一个稀释度培养皿的个数n2： 是第二个稀释度培养皿的个数d： 是与第一个稀释液相对应的稀释因子结果保留两位有效数字。结果以科学计数法表示。举例微生物计数给出以下的结果（包括两个带盖培养皿）：在第一个稀释度（10E-2）：168和215个菌落在第二个稀释度（10E-3）：14和25个菌落c 168+215+14+25 422N = = =19182（n1+0.1n2）d2+（0.1*2）*10-2 0.022根据上面所说结果进行取舍为19000，结果为1.9104cfu/ml。注：如果有两个以上可以计数的稀释度，公式应修改为用多个稀释度进行计算。如为三个稀释度，由下面的公式可计算出每毫升中微生物的数量。cN = （n1+0.1n2+0.01n3）d4.2.3 如果菌落数均小于10，则按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数，报告每毫升牛奶菌落的估计数。4.2.4 如果菌落数均超过300，则按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释倍数，报告每毫升牛奶菌落的估计数。4.3.其它同菌落总数测定中相应要求。5.耐热芽孢总数报告：同菌落总数报告方式。6.霉菌总数报告：同菌落总数报告方式。三、 微生物各种记录的填写1. 微生物检测原始记录（原料奶）2. 微生物检测原始记录（成品）3. 微生物检测原始记录（原辅料）4. 微生物坏包分析记录5. 温度监控记录6. 化验室消毒记录7. 杯碟法抗生素分解酶检验原始记录8. 抗生素、两盐检测原始记录9. 配药记录四、 消毒灭菌方式1. 湿热灭菌：高压灭菌锅，115-121摄氏度，15-20min。2. 干热灭菌：160-180摄氏度,2h。3. 氯先锋熏蒸：氯先锋0.45g/L水溶液。4. 紫外线灭菌：紫外线灯灭菌30-120min。5. 酒精棉球：75酒精与脱脂棉制成酒精棉球。6. 灼烧灭菌：酒精灯外焰灼烧。五、 检验计划依据文件：生鲜牛乳企业标准液态奶事业部微生物检验方法林甸伊利原奶收购标准原料奶收购微生物检测说明1.原料奶1.1 杯碟法抗生素分解酶：每天抽检8个原奶样。1.2 菌落总数、耐热芽孢总数、嗜冷菌总数：菌落总数每天抽检，三天覆盖所有奶车、抽取五车做平行样，嗜冷菌每天抽检十车、抽取三车做平行样，耐热芽孢总数每天抽检五车。2.纯牛奶成品2.1 杯碟法抗生素分解酶：每罐半成品对应成品，检测样品为前一天产品。3.纯牛奶成品微生物样（保温五天）3.1 菌落总数、耐热芽孢总数、大肠菌群：灌装机两次CIP清洗间隔时间内，取五包成品，大肠菌群每批做一包，菌落总数、耐热芽孢总数任选一包做平行样，其余做单样。4.优酸乳成品微生物样：每天抽检一包，菌落总数、大肠菌群、霉菌。5.谷物奶成品：每批一包，杯碟法抗生素分解酶，前一天产品。6.谷物奶保温样：每天抽检一包，菌落总数、大肠菌群、霉菌。7.水处理软化水：每周一次，菌落总数、大肠菌群。8.车间软化水：每周一次，菌落总数、大肠菌群。9.配料用水：每年送检一次，细菌总数、大肠菌群、致病菌。.10.前处理：化料罐、APV均质机缓冲管、利乐均质机缓冲管、APV保温管、利乐保温管、奶仓、闪蒸取样口，每天最少涂一个点，每半月覆盖所有涂抹点，菌落总数，小于等于20cfu/cm2。11.灌装间：灌装机成型杆、灌注头、纸盒平台、层流板、灌装工手、包材，每天最少涂一个点，每周覆盖所