（森林保护学专业论文）7种紫胶虫的系统发育与分子进化分析（homoptera：tachardiidae）.pdf

中文摘要 摘要 紫胶虫是一种具有重要经济价值的资源昆虫，属同翅目h o m o p t e r a , 蚧总科 c o c o i d e a , 胶蚧科l a c e i f e r i d a e ，胶蚧属k e r r i a ，主要分布于印度、泰国、缅甸、中国、 老挝、孟加拉国、巴基斯坦、越南等国热带和亚热带地区。全世界鉴定到种的紫胶虫有 1 9 种，本论文采用支序分类、染色体核型分析，核型似近系数的聚类分析和随机扩增多 态性d n a ( r a p d ) 分子标记、2 8 s r r n a 、e f i a 基因序列分析等技术分别从形态、细 胞和分子三个层次较为系统地研究了7 种生产用紫胶虫的系统发育关系。 1 形态学研究：选择肛突长度、膊背抬起的高度等2 2 个形态特征，以7 种紫胶虫 为内群，以格氏紫胶虫、杨梅翠胶蚧与白色角胶蚧作为复合外类群，进行支序分析，得 到7 种紫胶虫系统发育关系图。 从拓扑结构可以看出，中华紫胶虫形态特征较为特殊，首先从群体中分歧出来；其 它6 种紫胶虫又分成两大支系：信德紫胶虫、紫胶蚧具有紧密的姐妹群关系，汇聚在一 起形成一个进化枝；在另一个支系中，尼泊尔紫胶虫最早从群体中分离出来，而田紫胶 虫和云南紫胶虫关系更近，形成姐妹群再与普萨紫胶虫聚合。 2 染色体研究：使用空气干燥法进行染色体制片，在光学显微镜下分别观察7 种紫 胶虫的染色体形态，并统计染色体数量( 2 n = 1 8 ) 。通过专业软件1 m 5 0 测量和计算染色 体参数，对7 种紫胶虫分别进行核型分析，比较各种间染色体的形态结构特征，建立每 个虫种的核型模式图。 使用核型似近系数的聚类分析软件，计算出每两种紫胶虫之间的核型似近系数九值 与核型进化距离，用不加权算术平均组对法( u p g m a ) 进行聚类分析，并根据聚类结果 建立将7 种紫胶虫的聚类图，7 个虫种分别归属为i 、两大分支：在第1 分支中，田 紫胶虫与云南紫胶虫在护o 9 6 8 8 处首先聚为一类，这说明两个虫种的核型同源性最大， 亲缘关系最近。信德紫胶虫与紫胶蚧核型似近系数九为0 9 5 3 3 ，亲缘关系紧密，聚在一 起形成姐妹群。中华紫胶虫与田紫胶虫、云南紫胶虫的进化距离最近，三者聚合后再同 信德紫胶虫与紫胶蚧形成姐妹群汇聚，形成第1 枝系。在第分支中，尼泊尔紫胶虫与 普萨紫胶虫的核型似近系数为0 9 4 4 1 ，构成姐妹群，这两个虫种与其它5 种紫胶虫亲缘 关系较远，从群体中分歧出来，形成单独的枝系。 论文中还讨论和对比了田紫胶虫红、黄两种色型雌虫的核型。经t - 检验，证实两种 色型在核型上差异不显著，为进一步弄清多色型现象的遗传规律积淀了初步研究资料。 同时，本论文还对核型进化趋势以及核型与产胶质量的关系进行了初步的探讨，研究结 果显示紫胶虫核型进化的方向从3 b ( 或3 a ) 到2 b 再到3 b ( 或3 a ) ，即呈现从不对 称向着对称再向着不对称的方向进化的趋势。从核型的对称性来看，分析结果显示不对 中文摘要 称的核型对应着产胶的高质量，而随着核型对称性的增加，其胶质也相应得随之降低。 3 r a p d 分析；用r a p d 技术研究了紫胶虫7 种主要生产种1 2 个群体之间的亲缘关系， 研究中每个群体使用了2 4 个标本，共有2 8 8 个个体用于研究。在试用的4 5 种随机引物 中，筛选出9 种引物用于随机引物扩增，共得到1 2 1 个清晰稳定的位点，其中有i f 8 个 为多态性位点，多态百分率为9 7 5 2 ，每条引物检测到的位点数为1 1 1 6 个，长度在 1 5 0 3 0 0 0 b p 之间。根据扩增结果，用u p 6 m a 法对n e i s 遗传距离进行聚类分析，构建 分子系统树。7 种紫胶虫聚类结果显示：紫胶虫各种间的遗传平均距离为0 4 4 3 0 ，种 内的遗传平均距离为0 1 7 0 7 。 根据聚类分析，讨论了7 种紫胶虫的亲缘关系。从系统树的拓扑结构可以看出，7 种虫种分为两大分支j 在第1 分支中，田紫胶虫与尼泊尔紫胶虫、普萨紫胶虫亲缘关系 紧密，先聚在一起，再与云南紫胶虫合为一族，最后与中华紫胶虫聚类，形成一大支系， 其中田紫胶虫与中华紫胶虫的亲缘关系较远，分别位于分支内的两端。在第分支中， 信德紫胶虫与紫胶蚧构成一个自然进化枝，与其它5 种紫胶虫亲缘关系较远，从群体中 分歧出来，形成单独的枝系。 4 基因序列分析：分别使用两对引物对核糖体2 8 s r r n a 基因编码区( 4 5 8 b p ) 和核 基因e f l a 的部分序列( 1 1 4 5 b p ) 进行p e r 扩增和测序。用p a u p * 4 0 b 1 0 软件对两个基 因的单独数据与合并数据分别进行邻接法( n j ) 、最大简约法( m p ) 和最大似然法( m l ) 分析，重建7 种紫胶虫的系统发育关系。 研究结果支持信德紫胶虫、紫胶蚧的紧密关系。无论是e f l a 基因树、2 8 s r r n a 基 因树，还是基于合并数据建立的系统发育关系都无一例外的支持两者之间亲密的姐妹群 关系，同时也具有极高的支持率( 8 6 1 0 0 9 6 ) 。然而，云南紫胶虫、中华紫胶虫、田紫 胶虫关系、尼泊尔紫胶虫与普萨紫胶虫之间的系统发育关系在核基因与核糖体基因数据 的分析( 单独和合并分析) 中没有得到一致的结果。 通过综合比较各类数据，并结合生态学、地质演化等研究基础，我们提出了7 种紫 胶虫系统发育关系假说。建议将7 种紫胶虫分别归属为两大分支：在第1 分支中，信德 紫胶虫与紫胶蚧构成紧密的姐妹群，与其它5 种紫胶虫亲缘关系较远，从群体中首先分 歧出来，形成单独的枝系；在第分支中，田紫胶虫与云南紫胶虫的亲缘关系比与其它 种更为密切，它们形成姐妹群后再依次与普萨紫胶虫、尼泊尔紫胶虫聚类；而中华紫胶 虫与这一支系的其它4 种的亲缘关系较远，是支系中最先分歧出来的物种，位于分支的 基部。 关键词：紫胶虫；支序分析；r a p d ；e f l a ；2 8 s r r n a ；系统发育 h a b s t r a c t p h y l o g e n e t i cr e l a t i o n s h i p sa n dm o l e c u l a re v o l u t i o no f 7s p e c i e s i nl a ci n s e c t s ( t a c h a r d i i d a e ：k e r r i a ) c h e nh a n g d i r e c t e db yp r o f c h e nx i a o m i n g & p r o lf e n gy i n g a b s t r a c t l a ci n s e c t sa r eo n ek i n do f r e s o u r c ei n s e c t sw i t hg r e a te c o n o m i cv a l u e ，w h i c hb e l o n gt o o r d e rh o m o p t e r a , s u p e r f a m i l yc o c o i d e a , f a m i l yl a c c i f e r i d a e , g e n u sk e r f i a i th a sm o s t l y b e e nd i s t r i b u t e do v e rt r o p i ca n ds u b t r o p i cz o n es u c ha si n d i a , t h a i l a n d ，b u r m a , c h i n a , l a o s ， b a n g l a d e s h , p a k i s t a n , v i e t n a ma n do t h e rc o u n t r i e s 加o u n dt h ew o r l d ，t h e r ea r ea b o u tm o r e t h a n2 0s p e c i e so fl a ci n s e c t si nw h i c ho n l y1 9s p e c i e sh a v eb e e ni d e n t i f i e d i nt h i s d i s s e r t a t i o n , b yu s i n gc l a d i s t i ca p p r o a c h , l i ( a r y o t y p er e s e m b l a n c e - n e a rc o e f f i c i e n t s ，t h e t e c h n i q u eo f r a n d o ma m p l i f i e dp o l y m o r p h i cd n a0 0 , p d ) a n ds e q u e n c i n go f 2 8 s r r n ag e n e a n de f i ag e n e ，t h ep h y l o g e n e t i er e l a t i o n s h i p sa m o n g7c o m m e r c i a ls p e c i e so fl a ci n s e c t s h a v eb e e nd i s c u s s e di nt h r e el e v e l so f m o r p h o l o g y , c e l la n dm o l e c u l e 1 c l a d i s t i ca n a l y s i so fm o r p h o l o g y ：b a s e do bt h em o r p h o l o g i c a ls t u d y ，2 2 a p o m o r p h i e s ，i n c l u d i n gt h el e n g t ho f a n a lt u b e r c l ea n dh e i g h to f b r a n c h i aa r es e l e c t e df o rt h e a t t e m p tt oi n t e r p r e tt h ep h y l o g e n e t i cr e l a t i o n s h i p sa m o n gt h e7c o m m e r c i a ls p e c i e sb ya c l a d i s t i ca p p r o a c hw h i l et h ek e r r i ag r e e n i , m e t a t a c h a r d i am y r i c a , t a c h a r d i n aa l b i d aa r e c h o s e da sc o m p o s i t eo u t g r o u p si nt h i ss t u d y t h er e s u l t ss h o wt h a tk e r r i ac h i n e n s i si st h ee a r l i e s td i v e r g i n gm e m b e ro ft h i sg r o u pi n c a s eo f i t ss p e c i a lm o r p h o l o g i c a lc h a r a c t e r s t h eo t h e r6s p e c i e sc a no b v i o u s l yb ed i v i d e di n t o t w on a t u r a lg r o u p s i no n eg r o u p ，k e r r i as i n d i c aa n dk e r r 缸l a c c ah a v eac l o s e s tr e l a t i o n s h i p a n df o r m e da ss i s t e rt a x o n i nt h eo t h e rg r o u p k e r r i ap l 堪a n ai st h ec l o s et a x o nt 0t h e s i s t e r - b r a n c ho f k e r r i ar u r a l 括a n dk e r r i a y u n n a n e n s i sf o l l o w e db yk e r r i an e p a l e n s i s 2 k a r y o t y p i ec l u s t e r ：b yt h ea i r - d r i e dm e t h o d ，t h en u m b e r s a n dt h es h a p es t r u c t i l r e o fc h r o m o s o m e si n7s p e c i e sa r ec o m p a r e dt h r o u g ht h eo p t i cm i c r o s c o p e u s i n gs p e c i f i c s o f t w a r ei m 5 0 ，k a r y o t y p ea n a l y s e sa r en l a d ea n dt h em o d e lk a r y n t y p ec h a r t sa r eb u i l tw i t h w h i c ht h ek a r y o t y p i cp a r a m e t e r sa r ec a l c u l a t e di na d v a n c e b ya p p l y i n gk a r y o t y p er e s e m b l a n c e - n e a rc o e f f i c i e n t s a n dt h ee v o l u t i o nd i s t a n c ew i t h s p e c i f i cs o f t w a r e ，w eh a v es t u d i e dt h ep h y l o g e n e t i cr e l a t i o no f l a ci n s e c ta n db u i l tt h e d e n d r o g r a mc l u s t e r e du s i n gu p g m a t h er e s u l t ss h o wt h a tt h e7s p e c i e sc a no b v i o u s l yb ed i v i d e di n t ot w on a t u r a lg r o u p s i n i l l a b s t r a c t o n eg r o u p k e r r i ap u s a n aa n dk e r r i an e p a l e n s i sh a v eac l o s e s tr e l a t i o n s h i pa n df o r m e d 勰 s i s t e rt a x o n i nt h eo t h e rg r o u p ，t h ep r e f e r r e dh y p o t h e s i sp r o v i d e se v i d e n c ei nf a v o ro f k e r r i a c h i n e n s i sa st h ec l o s et a x o nt ot h es i s t e r - b r a n c ho fk e r r i ar u r a l 妇a n dk e r r i ay u n n a n e n s i s f o l l o w e db ya n o t h e rs i s t e r - b r a n c hf o r m e db yk e r r i as i n d i e aa n dk e r r i al a c c a m u l t i c o l o rp h e n o m e n o ni sas p e c i a lr u l ei nh e r e d i t yo fk e r r i ar u r a t i s k a r o t y p eo f f e m a l ei nt w os t 3 7 l e si sp r e l i m i n a r i l yr e p o r t e di nt h i sp a p e r t h et w os t y l e ss h a r et h e $ a m e k a r o t y p ef o r m u l aa n dt y p eo fc h r o m o s o m e sw h i l ed i f f e r e n c e si nt h es h a p e so fc h r o m o s o m e s e x i s t u s i n gt h et - t e s tt oa n a l y z et h es i xk a r y o t y p i cp a r a m e t e r s ( a r mr a t i o ，c e n t r o m e r ei n d e x ， r e l a t i v el e n g t hi n d e xe t c ) b e t w e e nt h et w oc o l o rs t y l e s ，t h er e s u l ts h o w st h ed i f f e r e n c e sa r e n o td i s t i n c t t h ee v o l u t i o nt r e n do f c h r o m o s o m e sa n dt h er e l a t i o n s h i pb e t w e e nl a cq u a l i t ya n d k a r y o t y p ea 心。a l s od i s c u s s e da tt h es a m et i m e t h er e s u l ts h o w st h a tt h ee v o l u t i o nt r e n do f c h r o m o s o m e si sa p p r o x i m a t e l yf r o m3 b ( o r3 a ) t o2 bt o3 b ( o r3 a ) ，a l o n gt h ed i r e c t i o nf r o m a s y m m e t r yt os y m m e t r yt h e nt oa s y m m e t r y o nt h ea n a l y s i so fs y m m e t r yi nk a r y o t y p e ，t h e r e s u l ts h o w st h a tt h ea n i s o m e r o u sk a r y o t y p eu s u a l l yr e p r e s e n tw i t hp r o d u c i n gh i 曲q u a l i t yo f l a e w h e nt h es y m m e t r yo fk a r y o t y p ei n c r e a s e s ，t h eq u a l i t yo fl a ci sa b o u tt og od o w n a c c o r d i n g l y 3 r a p dm a r k e r ：t h et e c h n i q u eo fr a n d o ma m p l i f i e dp o l y m o r p h i cd n a ( 廿d ) i su s e dt os t u d yt h er e l a t i o n s h i p so f1 2p o p u l a t i o n sf r o m7s p e c i e si nt h eg e n u sk e r r i a at o t a l o f 2 8 8s a m p l e sa r eu s e di nt h i ss t u d ya n d2 4s a m p l e sf o re a c hp o p u l a t i o n i n4 5p r i m e r su n d e r p r e d e t e r m i n e do p t i m a lr e a c t i o nc o n d i t i o n s ，9p r i m e r sa r ei n f o r m a t i v ea n dy i e l d e da t o t a lo f 1 2 1c l e a ra n dr e p r o d u c i b l el o c i t h ep e r c e n t a g eo fp o l y m o r p h i cl o c i ( p p b ) i s9 7 5 2 t h e a m p l i f i e d d n a l o c i o f i n d i v i d u a l p r i m e r a r e l l 1 6 a n d t h e i r m o l e c u l a rs i z e i s l 5 0 3 0 0 0 b p t h ed e n d r o g r a ma r ec o n s t r u c t e db a s e do nn e i sg e n e t i cd i s t a n c eb yt h eu p g m am e t h o d t h e c l u s t e rr e s u l t ss h o wt heg e n e t i cd i s t a n c eb e t w e e ni n t e r - p o p u l m i o ni s0 0 4 4 3 0 7 9 1 7 i n w h i c ht h ea v e r a g eg e n e t i cd i s t a n c ea m o n gs p e c i e si s0 4 4 3 0w h i l eu n d e rs p e c i e si so 1 7 0 7 b y a n a l y s eo fm o l e c u l a rd e n d r o g r a m ，t h eg e n e t i cr e l a t i o n s h i p sa m o n gp r o d u c t i o ns p e c i e sh a v e b e e nd i s c u s s e d t h er e s u l t ss h o wt h a tt h e7s p e c i e sc a no b v i o u s l yb ed i v i d e di n t ot w on a t u r a lg r o u p s i n o n eg r o u p k e r r i as i n d i c aa n dk e r r i al a c c ah a v eac l o s e s tr e l a t i o n s h i pa n df o r m e da s s t c r t a x o n i nt h eo t h e rg r o u p ，t h ep r e f e r r e dh y p o t h e s i sp r o v i d e se v i d e n c ei nf a v o ro fk e r r i a n e p a l e n s i sa st h ec l o s et a x o nt ot h e s i s t e r - b r a n c ho fk e r r i ar u r a l i sa n dk e r r i ap u s a n a f o l l o w e db yk e r r i ay u n n a n e n s i s o b v i o u s l yk e r r h ，c h i n e n s i si st h ee a r l i e s td i v e r g i n gm e m b e r o f t h i sg r o u pa n di ti sp l a c e da st h eb a s eb r a n c hi nt h eg r o u p 4 g e n es e q u e n c i n ga n dm o l e c u l a re v o l u t i o n ：u s i n gt w op a i r so fp r i m e r s ( 2 8 s 1a n d2 8 s 一2 ，e f - 2a n de f - 3 ) ，4 5 8 b pf r a g m e n t so fr i b o s o m eg e n e2 8 s r r n aa n d a b s t r a c t l1 4 5 b pf r a g m e n t so fn u c l e a rg e n ee f i aa l es e q u e n c e d b ym e g am i c r o s o f t ，w eh a v e c a l c u l a t e dt h er a t eo ft r a n s v e r s i o na n dt r a n s i t i o n , t h en u c l e o t i d ef r e q u e n c i e so f4k i n d so f b a s e sa n dt a m u r a - n e id i s t a n c eo f t h et w og e n e sw i t h i n7s p e c i e so f l a ci n s e c t m o l e c u l a r p h y l o g e n e t i c t r e e sa l er e c o n s t r u c t e db yn e i g h b o r - j o i n i n g ，m a x i m n m p a r s i m o n ya n dm a x i m u ml i k e l i h o o d m e t h o d sw i t l lp a u l 4 0 b 1 0m i c r o s o f ta n dt h e p h y l o g e n e t i cr e l a t i o n s h i p sa m o n gt h e7c o m l n e r c i a ls p e c i e sh a v eb e e ni n t e r p r e t e db a s e do n t h er e s u l t so fm o l e c u l a rt r e e s s i m u l t a n e i t yb o o t s t r a pm e t h o d sa r eu s e dt h ec h e c kt h e r e l i a b i l i t yo f e a c hb r a n c hi nm o l e c u l a rp h y l o g e n e t i ct r e e s t h er e s u l t sc o n s i s t e n t l ys u p p o r t st h es i s t e r - g r o u pr e l a t i o n s h i pb e t w e e nk e r r i as i n d i c a a n dk e r r i al a c c a , w h i l et h eg e n e t i cr e s u l t so f o t h e r5s p e c i e ss h o ws o m ed i f f e r e n c eb yd i v e r s e m e t h o d sb a s e do nd i f f e r e n ts e q u e n c ed a t ai nr e s e a r c ho f p h y l o g e n e t i cr e l a t i o n s h i p s ， s y n t h e s i z i n gt h ea n a l y s i so fm o r p h o l o g i c ，c e l l u l a ra n dm o l e c u l a rl e v e l sa n dc o m b i n i n g t h er e s u l t so fe c o l o g ya n dg e o l o g y , w ep u tf o r w a r dt h eh y p o t h e s i so fp h y l o g e n e t i c r e l a t i o n s h i p sa m o n gt h e7s p e c i e so fl a ci n s e c t t h er e s u l t ss h o wt h a tt h e7s p e c i e sc a r l o b v i o u s l yb ed i v i d e di n t ot w on a t u r a lg r o u p s i no n eg r o u p ，k e r r i as i n d i c aa n dk e r r i al a c c a h a v eac l o s e s tr e l a t i o n s h i pa n df o r m e d 船s i s t e rt a x o n i nt h eo t h e rg r o u p t h ep r e f e r r e d h y p o t h e s i sp r o v i d e se v i d e n c ei nf a v o ro f k e r r i a p u s a n aa st h ec l o s et a x o nt ot h es i s t e r - b r a n c h o fk e r r i ar u r a l i sa n dk e r r i ay u n n a n e n s i sf o l l o w e db yk e r r i an e p a l e n s i s o b v i o u s l yk e r r i a c h i n e n s i si st h ee a r l i e s td i v e r g i n gm e m b e ro ft h i sg r o u pa n di ti sp l a c e da st h eb a s eb r a n c hi n t h eg r o u p k e y w o r d s ：l a ci n s e c t c l a d i s t i ca n a l y s i s , r a p d ，e f l 2 8 s r r n 丸p h y l o g e n e v 目录 5 1 1 实验材料6 5 5 1 2 实验用试剂、药品及仪器设备6 5 5 1 3 总d n a 提取与基因片段p c r 扩增6 6 5 1 4 片段序列扩增产物的检测 5 i 5 基因片段序列扩增产物的回收与测序6 7 5 1 6 基因片段序列比对 5 1 7 基因片段序列数据分析 5 1 8 数据的加权7 0 5 2 研究结果 5 2 1 目的基因片段p e r 扩增的电泳图谱7 l 5 2 2 序列碱基组成和替换特征 5 2 3 基于核糖体2 8 s r r n a 数据的系统发育分析7 5 5 2 4 基于核基因e f l a 数据的系统发育分析7 6 5 2 5 基于合并数据的系统发育分析 5 , 3 讨论 5 3 17 种紫胶虫物种之间的系统发育关系 5 3 1 1 信德紫胶虫、紫胶蚧的紧密关系 5 3 1 2 云南紫胶虫的系统学位置8 0 5 3 1 3 中华紫胶虫、田紫胶虫关系、尼泊尔紫胶虫、普萨紫胶虫之间的关系8 2 5 3 2 两种基因在解决紫胶虫部分物种系统发育关系方面的应用价值8 1 5 3 3 建树方法。8 5 第六章总结 6 1 主要结论8 7 参考文献。9 3 致谢 1 0 0 附录。1 0 3 表目录 表1 - 1 全世界的紫胶虫种类( 已鉴定种类) 2 表2 - 27 种紫胶虫的各形态特征的测量值比较 表2 _ 3 紫胶虫的种问分类特征赋值结果与极化方向 表3 - i 两点四区命名系统( l e v a n ，1 9 6 4 ) ：3 0 目录 表3 47 种紫胶虫染色体核型分析的相关参数计算列表 表3 - 5 紫胶虫染色体数目统计。 表3 - 6 中华紫胶虫染色体参数 3 0 3 3 3 3 表3 - 7 云南紫胶虫染色体参数。3 5 表3 - 8 紫胶蚧染色体参数 表3 - 9 田紫胶虫染色体参数 3 6 表3 1 0 普萨紫胶虫染色体参数3 8 表3 1 l 尼泊尔紫胶虫染色体参数4 0 表3 1 2 信德紫胶虫染色体参数4 l 表3 1 3 田紫胶虫两种色型染色体的相对长度、臂比和类型对比4 3 表3 1 4 田紫胶虫两种色型的染色体核型分析比较4 4 表3 1 57 种紫胶虫染色体核型似近系数和进化距离。4 5 表3 1 67 种紫胶虫染色体核型分析比较4 8 表4 17 种紫胶虫( 1 2 个群体) 供试样本基本情况5 2 表4 2 随机引物的碱基序列及扩增条带5 6 表4 3 引物s 7 对紫胶蚧兰吉尼品系2 4 个体的r a p d 数据矩阵5 8 表4 - 4 紫胶虫1 2 个不同群体的遗传距离( d ) 和遗传一致性( i ) 5 9 表4 57 种紫胶虫的遗传距离( d ) 和遗传一致性( i ) 5 9 表5 17 种紫胶虫供试样本基本情况6 6 表5 2 用于p c r 扩增及测序的引物序列 表5 - 3 用于p c r 扩增及测序的d n a 模板用量6 9 表5 _ 4 用于p c r 扩增及测序的反应体系6 9 表5 57 种紫胶虫核基因e f l a 碱基频率比较7 3 表5 - 67 种紫胶虫2 8 s r r n a 基因碱基频率比较7 3 表5 77 种紫胶虫核基因e f l a 序列间1 6 种不同的核苷酸对类型7 4 表5 - 87 种紫胶虫2 8 s r r n a 基因序列间1 6 种不同的核苷酸对类型7 4 表5 - 9 核基因e f l a 序列各种间t a m u r a - n e i 距离7 5 表5 1 02 8 s r r n a 基因序列各种问t a m u r a - n e i 距离7 5 表5 - 1 l 两个基因序列位点特征比较7 5 图目录 图2 1 紫胶蚧( k e r r i a l a c c a ) 的外部形态特征一1 7 图2 - 2 普萨紫胶虫( k e r r i a p u s a n a ) 的外部形态特征1 8 图2 3 尼泊尔紫胶虫( k n e p a l e n s i s ) 的外部形态特征1 8 图2 4 田紫胶虫( r u r a l i s ) 的外部形态特征 。1 9 目录 图2 - 5 信德紫胶虫s 触托田的外部形态特征 图2 - 6 中华紫胶虫( i ：西加翱s 括) 的外部形态特征2 l 图2 7 云南紫胶虫( k y u n n a n e n s i s ) 的外部形态特征。： 图2 - $ 基于形态学特征构建盼7 种紫胶虫系统发育关系 2 l 2 4 图3 - 1 中华紫胶虫染色体图，3 4 图3 2 中华紫胶虫核型模式图 图3 - 3 云南紫胶虫染色体图3 5 图3 4 云南紫胶虫染色体核型图 图3 - 5 紫胶蚧染色体 3 5 图3 - 6 紫胶蚧染色体核型模式图。 图3 7 田紫胶虫染色体图3 8 图3 - 8 田紫胶虫染色体核型模式图3 8 图3 - 9 普萨紫胶虫染色体图 图3 1 0 普萨紫胶虫染色体核型模式图3 9 图3 1 l 尼泊尔紫胶虫染色体图4 0 图3 1 2 尼泊尔紫胶虫染色体核型模式图 图3 ，1 3 信德紫胶虫染色体图4 l 图3 ，1 4 信德紫胶虫染色体核型模式图4 2 图3 - 1 5 田紫胶虫黄色型( 早) 染色体核型图4 4 图3 1 6 田紫胶虫红色型( 早) 染色体核型图 图3 1 7 田紫胶虫两种色型( 早) 染色体模式图4 5 图4 - 2 引物s 7 对云南紫胶虫ky u n n a n e n s i s 2 4 个体的r a p d 扩增结果5 7 图4 3 引物s 1 0 3 对田紫胶虫( 黄色型) 丘r u r a l i s 2 4 个体的r a p d 扩增结果5 7 图4 - 4 引物$ 4 3 对云南紫胶虫ky u n n a n e n s i s 2 4 个体的r a p d 扩增结果5 7 图4 - 5 紫胶虫1 2 群体的u p g m a 聚类树状图6 l 图5 - lp c r 扩增核基因e f l a 片段电泳检测结果7 2 图5 - 2p c r 扩增核糖体2 8 s r r n a 基因片段电泳检测结果7 2 图5 - 3p c r 扩增核基因e f l a 片段与核糖体2 8 s r r n a 基因电泳检测结果7 2 图5 _ 4 基于核糖体2 8 s r r n a 基因序列构建的7 种紫胶虫系统发育关系7 7 图5 。5 基于核基因e f l a 序列构建的7 种紫胶虫系统发育关系 7 9 图5 - 6 基于基因合并数据构建的7 种紫胶虫系统发育关系8 i 图5 - 7 核糖体r n a 的结构8 4 图6 _ l 基于综合分析构建的7 种紫胶虫系统发育关系假说 9 1 1 1 引言 1 1 1 研究背景 第一章前言 昆虫是自然界中种类最为繁多、数量最为庞大的生物类群。据估计，其中昆虫种类 约有1 0 0 0 多万种，已定名的种类约有1 8 0 万种，占已知生物总数的三分之二以上“一。据 已有的化石记录，昆虫的起源可以追溯到古生代泥盆纪，距今约3 5 4 亿以前，较之人 类的历史要久远得多，当人类在地球出现并由发源地向外发展时，昆虫已经是陆地和淡 水生态系统中高度发展的组成部分了。因此，人类从诞生之日起，就与昆虫发生着紧密 地联系。这种联系就如同矛盾的两个对立面一样，既相互对