猪生长激素的人工合成.docx

关于人工合成猪生长激素的研究摘 要针对猪生长激素的性质、用途以及人工合成方法和市场开放状况，本文利用文献计量学的方法，对人工合成猪生长激素进行分析讨论，试图通过统计分析掌握猪生长激素，为养猪产业提供客观依据。关键词猪生长激素；PGH；重组腺病毒；人工培养 正文一：性质和用途： 猪生长激素（pig growth hormone（PGH），是由猪脑垂体中的嗜酸性下细菌合成和分泌的一种单链多肽激素，由190个氨基酸构成单链，其分子量22000g/mol。它作为一种特殊的生物活性蛋白分子，不同于食品添加剂中禁用的性激素等有机甾体激素，具有刺激骨及软骨组织生长1、调节蛋白质、脂质和糖类代谢的功能，能显著提高猪的生长速度、瘦肉率和饲料报酬2（即饲料效率），改善胴体品质；具有明显的经济效益和社会效益。 PGH的使用方法是注射，将PGH注射进入猪体内，能够加快猪的生长代谢，使猪在短时间内迅速长大，胴体品质也得到改善。二：人工合成方法：1、 PGH基因的克隆：根据GenBank上公布的PGH基因序列（收录号为U19788），设计、合成一对上、下游5端各含一个Bgl II酶切位点的引物（P1:5-TTAGATCTATGGCTGCAGGCCCTCGGACCTCC-3；P2:5-TTAGATCTC -TAGAAGGCACAGCTGCTCTCCACAGATCT-3），以含有PGH基因的质粒pMD18-PGH为模板，经过PCR扩增，回收PGH基因片段后，插入到载体TOPO-PCR2.1Cloning中，构建重组质粒TOPO-PGH。取纯化的重组质粒TOPO-PGH后，用Bgl II酶切出PGH基因片段，经过一系列操作后腺病毒载体与PGH基因片段连接，用大肠杆菌培养此病毒。根据Hirt的方法3抽提腺病毒DNA。2、 大量培养重组腺病毒：首先帅选出能生产PGH的接种腺病毒，将病毒接种入293细胞，在适合环境下大量培养293细胞。3、 提取所需产物：用感染细胞的裂解液或者细胞培养液做SDS-PAGE电泳分析及Western Blot检测，检测培养的293细胞中是否有PGH蛋白。电泳能够检测到PGH基因的表达产物占全菌蛋白的百分比。产物以包涵体的形式存在，适合规模化工业生产的需要。筛选出含有重组质粒的病毒之后，包涵体用低浓度尿素（2M）和高pH（12）缓冲液溶解，通过降低pH至8.5进行复性。进一步凝胶层析进行纯化，得到纯度较高的PGH蛋白。附：载体：复制缺陷型重组腺病毒源基因：PGH基因目标基因：重组DNA分子 重组腺病毒Ad-PGH培养基：人胚肾细胞HEK-293株PGH的基因片段 Bgl II酶猪生长激素人工培养方法DNA连接酶电泳分析和Western Blot检测后筛选出含有重组质粒的病毒，并进行提取293细胞在适合环境下大量繁殖初步培养、筛选、提取病毒，接种入293细胞 接种重组腺病毒（Ad-PGH）大肠杆菌复制缺陷型重组腺病毒的质粒结果：体外细胞培养的结果表明，重组DNA分子在293细胞中能生物合成分泌的重组PGH蛋白，分子大笑与标准的PGH蛋白相似，而Western Blot检测结果也证实所表达的重组蛋白为PGH蛋白。这种方法利用价格不昂贵的293细胞培养病毒，而不用价格昂贵且产量不高的大肠杆菌培养。最后能够培养出大量高质量的猪生长激素。三生长激素的发展前景 有资料表明，PGH一旦大规模应用于养猪业，将会对猪的生产，育种和饲料的调配产生重大的影响。 PGH应用于育肥猪生长速度一般都能提高15%-20%，这对生产性能偏低的中国猪种提高的幅度还要更大些。这意味着肉猪将提前一个月出栏，从而加速猪群的周转，减少流动资金的占有，整个改变养猪场的生产计划。应用PGH，按照瘦肉率提高10%，也会改变猪的育种方案和育种目标。如果肉猪屠宰的瘦肉率60%比较适于中国的消费者，就没有必要选择瘦肉率太高的猪种。只要瘦肉率达到50%多的猪种，靠PGH的调节，也会很容易实现60%的胴体瘦肉率。 从经济效益看，PGH可明显提高增重率和饲料报酬率，同时因增加瘦肉率而使其食用价值和商品价值提高，因而增加养猪的效益。 但是，问题是现在人们对转基因生物的不信赖，使得PGH的使用不是很受欢迎，也没有根据说人工合成猪生长激素是完全无害的，所以，PGH使用并不是很广泛。但是如果有足够证据证实人工合成猪生长素对人体无害，则这个问题便迎刃而解了。 总之，如果当PGH批准上市后，畜牧业的发展必然出现崭新的局面，人类的生活也必然得到很大的改善。参考文献1Raschke MJ. Bail. Windhagen HJ.et al. Recombinant growth hormone accelerates bone regenerate consolidation in distraction osteogenesisJ. Bone.1999.24(2):P81-88.2Sorensen MT. Oksbjerg N.Agergaard N.et al. Tissue deposition rates in relation to muscle fibre and fat cell characteristics in lean female pigs(Sus scrofa)following treatment with porcine growth hormone(PGH)J. Comp Biochem Physiol A Physiol. 1995.113(2):P91-96.3Campbell R G, Johnson R J, King R H. et al. Interaction of dictary protein content and exogenous porcine growth hormone administration on prot