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1(2012年浙江高考调研自选模块)请在空白处填空:大肠杆菌的培养和分离实验中,先用LB_进行扩大培养,再在LB固体平面培养基上进行_分离。在配制固体培养基时,为了使培养基凝固需用到的试剂是_ 。在培养基上完成接种后,需将培养皿倒置,目的是_ ,然后置于恒温箱中培养。解析:通用的细菌培养基是LB液体培养基,可用于大肠杆菌的扩大培养;扩大培养后再在LB固体平面培养基上划线进行分离,随后在培养基上形成一个个单独的菌落;在制作微生物的培养基过程中,可以通过添加琼脂作为凝固剂来将液体培养基转化为固体培养基或半固体培养基(加入琼脂的固体培养基与液体培养基相比,优点在于操作简便、通气问题易于解决、便于经常观察研究等);划线分离后盖好培养皿盖,将培养皿倒置放到恒温箱中培养,防止培养皿盖上形成的水滴破坏培养基上的菌落。答案:液体培养基划线琼脂防止培养皿盖上的水滴落到培养基上而污染培养基2(2011年高考课标全国卷)有些细菌可分解原油,从而消除由原油泄漏造成的土壤污染。某同学欲从受原油污染的土壤中筛选出能高效降解原油的菌株。回答问题:(1)在筛选过程中,应将土壤样品稀释液接种于以_为唯一碳源的固体培养基上。从功能上讲,该培养基属于_培养基。(2)纯化菌种时,为了得到单菌落,常采用的接种方法有两种,即_和_。(3)为了筛选出高效菌株,可比较单菌落周围分解圈的大小,分解圈大说明该菌株的降解能力_。(4)通常情况下,在微生物培养过程中,实验室常用的灭菌方法有灼烧灭菌、_和_。无菌技术要求实验操作应在酒精灯_附近进行,以避免周围环境中微生物的污染。解析:(1)可以将所需要的微生物从混杂的微生物群中分离出来的培养基为选择培养基。欲筛选出能降解原油的菌株,则培养基中应只含有原油而无其他碳源,这样不能降解原油的细菌在此培养基上不能生存,能降解原油的细菌才能在只含原油这一碳源的培养基上生存。(2)分离纯化菌种时,接种的方法有平板划线法和稀释涂布平板法,其目的都是使聚集在一起的微生物分散成单个细胞,从而能在培养基表面形成单菌落,以便于纯化菌种。(3)降解原油能力越强的菌株,在菌落周围形成的分解圈越大。(4)实验室常用的灭菌方法有灼烧灭菌(如接种环)、干热灭菌(如培养皿)和高压蒸汽灭菌(如培养基)等。无菌技术要求整个实验操作都要在酒精灯火焰附近进行,以避免周围微生物的污染。答案:(1)原油选择(2)平板划线法稀释涂布平板法(3)强(4)干热灭菌高压蒸汽灭菌火焰3(2010年高考全国卷)下列是与微生物培养有关的问题,请回答:(1)某细菌固体培养基的组成成分是KH2PO4、Na2HPO4、MgSO4、葡萄糖、尿素、琼脂和蒸馏水,其中凝固剂是_,碳源是_,氮源是_。已知只有能合成脲酶的细菌才能在该培养基上生长,故该培养基属于_培养基。按照化学成分分类,该培养基属于_培养基。从同化作用类型看,用该培养基培养的细菌属于_。(2)将少量细菌接种到一定体积的液体培养基中,适宜条件下培养,定时取样测定菌体数目,以时间为横坐标,以菌体数目的对数为纵坐标,可以得到细菌的_曲线。该曲线中以菌体数目的对数作为纵坐标的原因是_。实验室中,为了获得形态和生理特征一致的菌体,一般应在_期取材;在生产中,常收集培养至_期的细菌用于次生代谢产物的提取。解析:(1)琼脂是固体培养基的凝固剂。为微生物提供的营养物质中,含有碳元素的是葡萄糖,含有氮元素的是尿素。该培养基中只有能合成脲酶的细菌才能生长,故为选择培养基。该培养基中含有葡萄糖,因而适合进行异养型微生物的培养。(2)细菌一般以二分裂方式增殖。在适宜条件下,细菌数目呈指数形式增加。细菌的生长速率随着时间的推移发生有规律的变化,如果以时间为横坐标,以细菌数目的对数为纵坐标作图,可以得到反映细菌生长规律的曲线。在细菌生长的对数期可获得形态和生理特征一致的菌体,细菌在稳定期会产生大量的次生代谢产物。答案:(1)琼脂葡萄糖尿素选择合成异养型(2)生长培养的细菌以指数形式增殖,取对数便于反映细菌群体的生长规律对数稳定1(2012年金丽衢联考)(1)微生物有多种用途,如对_和_菌进行诱变和筛选,可获得用于生产抗生素的高产菌株。(2)大肠杆菌在人体肠道内依靠_方式进行增殖,在基因工程中既可作为_,也可以_,利用_培养基可以对其进行扩大培养,培养后再在_培养基中进行单菌落分离。(3)在组织培养过程中,培养基必须是无菌的,一般的灭菌方法是_。在腌制泡菜过程中主要利用_来抑制杂菌的繁殖。 (4)在酿酒过程中由于_的原因,导致醋杆菌繁殖而影响酒的风味。解析:(1)90%以上的微生物是对人类有利的,许多抗生素来源于放线菌和霉菌,如青霉素已大规模生产。(2)大肠杆菌属于原核生物,以二分裂的方式进行繁殖,分裂速度很快;大肠杆菌在现代生物技术中有着广泛的应用,在基因工程中常作为受体细胞,大肠杆菌细胞内的质粒也可用作基因载体;利用液体培养基扩大培养大肠杆菌,培养后再在固体平面培养基上划线进行分离,随后培养基上便形成一个个单独的菌落。(3)实验中除用具无菌外,各种培养基也必须是无菌的,培养基是微生物生存的环境和营养物质,一般采用的灭菌方法是高压蒸汽灭菌法;在制作泡菜过程中,加入盐水,提高盐的浓度,可以抑制其他微生物的增长。(4)酿酒过程是酵母菌厌氧呼吸的过程,如果氧气充足,醋杆菌等杂菌会生长,导致酒具有酸味,影响酒的口感。答案:(1)放线菌霉(2)分裂(或二分裂)受体细胞提供基因载体(LB)液体(LB)固体(3)高压蒸汽灭菌高浓度的盐(4)氧气浓度提高(或溶解氧增加,或温度改变)2用含“牛肉膏、蛋白胨、水、氯化钠、琼脂”等成分的培养基可检验硬币上是否有细菌,培养一段时间后,可在此固体平板培养基上形成很多不同的_,从中选择不同的类型分别接种到固体培养基的试管斜面上,可用于分离细菌,这种方法叫_。如果想要扩大培养这个菌种,一般可以在培养基上做什么调整?_。培养基在用于培养之前都必须进行_操作,而且不同的培养基都必须有相应的适宜_。解析:菌落由单个细菌在适宜固体培养基表面或内部生长繁殖到一定程度,形成肉眼可见的有一定形态、结构等特征的子细胞群落。硬币上是否有细菌,可通过是否在培养基上长成菌落来加以检验。每个细菌可长成一个菌落,通过划线分离法可用于细菌的进一步纯化。想要扩大培养某个菌种,可用液体培养基,具体做法是不改变培养基的其他成分,只是去除琼脂。培养基培养细菌之前要先调pH,后灭菌,为细菌的分裂、繁殖提供一个良好的环境。答案:菌落划线分离法去除配方中的琼脂灭菌pH3从自然菌样中筛选较理想生产菌种的一般步骤是:采集菌样富集培养纯种分离性能测定。(1)不同微生物的生存环境不同,获得理想微生物的第一步是从适合的环境采集菌样,然后再按一定的方法分离、纯化。培养嗜盐菌的菌样应从_环境等采集,培养厌氧菌的菌样应从_等采集。(2)富集培养指创设仅适应于该条件的微生物旺盛生长的特定的环境条件,使待分离微生物在群落中的数量大大增加,从而达到从自然界中分离到所需的特定微生物目的的微生物培养方法。对嗜盐菌富集培养的培养基应是_的选择培养基;对高温淀粉酶的富集培养应选择_的选择培养基,并在_条件下培养。(3)实验室最常用的灭菌方法是利用高温处理达到杀菌的效果。高温灭菌的原理是高温使微生物的_等物质发生_。_灭菌法是微生物研究和教学中应用最广、效果最好的湿热灭菌法。(4)下面两图是采用纯化微生物培养的两种接种方法接种后培养的效果图解,请分析接种的具体方法。获得图A效果的接种方法是_,获得图B效果的接种方法是_。解析:嗜盐菌生活在高盐环境中,如海滩等环境。耐高温淀粉酶应存在于以淀粉为唯一碳源且在高温环境中生存的微生物体内。从不同菌落之间的关系可以看出,A纯化微生物的接种方法是稀释涂布平板法,B纯化微生物的接种方法是平板划线法。答案:(1)高盐无氧环境(2)加盐以淀粉为唯一碳源高温(3)蛋白质和核酸变性高压蒸汽(4)(稀释)涂布分离法划线分离法4(2010年高考重庆卷)炭疽病是由炭疽杆菌引起的一种人畜共患传染病。炭疽杆菌两端截平、呈竹节状排列,菌落呈卷发状。对炭疽病疑似患者,可根据噬菌体的宿主专一性,通过实验确诊。(1)细菌培养:采集疑似患者的样本,分离培养,获得可疑菌落。(2)细菌鉴定:实验流程如下图所示对配制的液体培养基等需采取_方法灭菌;实验所用液体培养基的碳源为_(填“无机碳”或“有机碳”)。挑选可疑菌落制片后,用_观察,可看到呈竹节状排列的杆菌。接种可疑菌后,35 培养24小时,液体培养基变浑浊,原因是_。对照组试管中应加入_,与实验组同时培养6小时后,若实验组液体培养基的浑浊度比对照组_(填“高”或“低”),则可明确疑似患者被炭疽杆菌感染;反之则排除。对排除的疑似患者及易感人群,可接种炭疽杆菌疫苗,刺激机体产生相应抗体。与产生抗体相关的细胞除T细胞、B细胞外,还有_。解析:培养基灭菌时常用的灭菌方法为高压蒸汽灭菌法;炭疽杆菌为异养菌,碳源必须是有机碳;菌落中菌体的排列状态可用显微镜观察;接种可疑菌后,在适宜条件下培养一段时间,液体培养基变浑浊,是细菌大量繁殖造成的;实验组加入了生理盐水配制的澄清噬菌体液,对照组应加入等量的生理盐水;噬菌体可以破坏炭疽杆菌,所以加入噬菌体后,实验组中的炭疽杆菌数量减少,则实验组液体培养基的浑浊度比对照组低;抗体是在体液免疫过程中形成的,与此相关的细胞除T细胞、B细胞外,还有吞噬细胞和效应B细胞。答案:(2)高压蒸汽(98 kPa蒸汽)有机碳显微镜细菌大量繁殖等量生理盐水低吞噬细胞、效应B细胞5某化工厂的污水池中,含有一种有害的、难于降解的有机化合物A。研究人员用化合物A、磷酸盐、镁盐以及微量元素配制的培养基,成功地筛选到能高效降解化合物A的细菌(目的菌)。实验的主要步骤如图所示。请分析回答问题:(1)培养基中加入化合物A的目的是筛选_,这种培养基属于_培养基。(2)“目的菌”生长所需的氮源和碳源来自培养基中的_,实验需要振荡培养,由此推测“目的菌”的代谢类型是_。(3)培养若干天后,应选择培养瓶中化合物A含量_的培养液,接入新的培养液中连续培养,使“目的菌”的数量_。(4)转为固体培养时,常采用_的方法接种,获得单菌落后继续筛选。(5)若研究“目的菌”的生长规律,将单个菌落进行液体培养,可采用_的方法进
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