禁食对小肠传输功能损伤的实验研究.pdf

11 8 2 论 著 重 庆 医 学 2 0 0 5年 8月 第 3 4卷 第 8期 禁食对小肠传输功 能损伤 的实验研究 向 国春 龙 庆林 王振 华 房殿 春 第三 军 医大 学西 南 医院全 军消化 专科 中心 重 庆 4 0 0 0 3 8 摘 要 目的 探 讨禁食状 态下小肠 传输功能的 变化并初步探讨其 改变原 因 方法 2 O只 大鼠随机分 为正 常组 及禁食组 两 组 禁食 后记录两组 大鼠的 小肠传输速 率 然后测定 小肠肌 间神经丛胆碱 能神经和 氮能神经含 量 结果 与 正常 大鼠相 比 禁食 大 鼠 小肠 传 输 速 率 明 显 变慢 小肠 肌 间神 经 丛 胆碱 能 神 经 含 量 减 少 但 氮能 神 经 含 量 增 加 结 论 禁 食 损 伤 小肠 运 输 功 能 可 能 与 小肠肌 间神 经丛胆碱 能神 经以及 氮能神经 改变有关 关 键 词 乙酰 胆碱 一 氧 化 氮 中 图分 类号 R3 6 5 5 7 4 文 献 标 识 码 A 文 章 编 号 1 6 7 卜8 3 4 8 2 0 0 5 0 8 1 1 8 2 一 O 2 Ex p e r i m e nt a l s t u d y on i nt e s t i n a l t r an s i t i n f a s t i ng r a t s X J A G GU O c h u n L0NG Qi n g l i n W ANG Zh e n h u a e t a Gas t r o e n t e r ol o gyRe s e ar c h Ce n t e r Sou t h ure s t H o s pi t a1 t he Thi r d M i l i t ar y M e di c i ne Uni v i s i t y ho ngq i ng 40 038 Ab s t r a c t Ob j e c t i v e To c l a r i f y t h e c h a n g e s o f i n t e s t i n a l t r a n s i t i n f a s t i n g r a t s Me t h o d s Twe n t y wi s t a r r a t s we r e r a n d o ml y d i vi de d i nt o 2 gr ou ps c ont r o l gr ou p 一 1 2 a nd f a s t i ng gr oup 一 8 The r at e o f i nt e s t i n a l t r a ns i t wa s r e c or de d a n d ni t r e r gi c an d c h ol i n e r g i c n e r v e s i n t he m y e nt e r i c pl ex us of r a t i nt e s t i ne we r e i n v e s t i g a t e d Re s ul t s I n t he r a t s of f a s t i ng gr oup t he r a t e of i n t e s t i na l t r a ns i t was de l a ye d c o m p a r e d wi t h c ont r ol gr ou p t he c ont e n t of ni t r e r gi c ne r v e s i n t h e mye nt e r i c p l e x us o f r a t i nt e s t i n e hi g he r t ha n t h at i n t h os e of c on t r o l g r o up bu t t he c o nt e n t of c hol i n e r g i c ne r ve s i n t he my e nt e r i c ne r ve s of i nt es t i n e wa s l o we r t ha n t ha t i n t ho s e of c on t r ol g r oup Con c l u s i on I t wa s f oun d i n our s t udy t ha t t he c han ge of i nt e s t i n a l t r a ns i t i n f as t i n g r a t s i s c o r r e l a t e d wi t h t he c han ge of ni t r e r gi c a n d c h ol i ne r gi c n e r v e s i n t he my e nt e r i c p l e x us o f r a t i nt e s t i n e Ke y wo r d s a c e t yl c h ol i ne ni t r i c oxi de 有 实验 表明 长期间断禁食可诱发 大鼠 胃电节律失常及 胃 排空延缓 并导致大 鼠胃窦肌间神经丛胆碱 能神经及氮能神经 等改变一 但长期 间断禁食 对小肠运 动影 响 尚不 清楚 本实 验 中 我们给大 鼠不规则进 食 研究禁 食对 大 鼠小 肠传输 速率 的影响 并进一步观察小肠肌问神经丛 内胆碱 能神经及氮能神 经 含 量 变化 以 期 阐 明 其 病 理 学 机 制 1材 料 与 方 法 1 1材料健康成年 Wi s t a r 大 鼠 2 O只 体重 2 5 0 3 6 0 g 雌 雄各半 由第 三军医大学实验动物 中心提供 随机分 为两组 正 常对照组 1 2只 正 常进 食 饮水 禁食 组 8只 按单 日少量 进 食 双 日禁食 方法饲养 4周 饮水不 限 1 2 小肠传输速 率测定 4周后测定 正常大 鼠及禁食 大鼠小 肠传输速率 方法如 下 大 鼠禁食 水 1 2 h后 抽 取 1 mg ml 美 蓝 液 0 4 ml 胃 内 灌 注 3 0 mi n后脱 臼处 死 大 鼠 立 即 剪 开 腹 腔 游离小肠 置 于冰上 迅速测定小肠 总长度 回盲瓣 至幽门的距 离 以及小肠 内蓝 色末 端距 幽 门 的距离 计算 小肠 传输 速率 小肠传输速率 一蓝色末端 距幽门的距离 小肠 总长度 1 3肌问神 经丛标本 制作 参 照 肖岚 等一 肠道铺 片法 大 鼠 断头处死 迅速剖空肠近侧 距 幽门约 1 0 c m 一段长 约 2 c m 生 理盐水 冲去肠 内容 物 用 丝线结 扎肠 管两端 肠 腔内注 入 4 多聚 甲醛使之稍扩 张 再 置于该 液 中固定 2 h 4 入 2 O 蔗 糖过夜 次 日取 出用 P B S 0 0 1 M p H7 2 冲洗 肠管 剪成 长 约 1 c m 的小段 将一粗 细合适 的玻璃棒插 入肠 管 然 后用镊 子 在肠系膜附着处沿肠管纵轴划 痕 用镊尖沿划 痕轻 轻剥离纵肌 层 制成肌 间神经丛铺 片标 本 保存 于 P B S中待用 1 4肌 间神经丛 组化 染色 K a mo v s k y R o o t S直接法 显示 胆 碱 神经 将制备好的小肠 肌 间神 经丛铺 片 标本用 P B S冲洗 3 次 移入新鲜 的孵 育液 中 碘 化 乙酰硫代胆 碱 1 2 5 mg 0 8 2 醋 酸钠 1 5 8 ml 0 6 醋 酸 0 5 ml 2 9 4 柠 檬 酸钠 1 5 ml 0 7 5 0A硫酸铜 2 5 ml 0 1 6 5 铁氰化钾 2 5 m1 蒸馏水 2 2 m 1 3 7 下孵育 6 0 mi n 对照实验 孵 育液 中不 加碘化 乙酰硫代 胆 碱 还 原型尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸脱 氧酶 NAD P H d 组 化 法显示 氮能神经 将 制 备好 的小肠 纵肌 层 标本 用 P B S冲 洗 3 次 移 入 新 鲜 的 孵 育 液 中 8 一 NADPH 1 0 mg NB T 2 mg 1 0 Tr i t onX一 1 00 l ml DM S0 1 ml 0 1 M Tr i sHL l PH7 6 1 0m1 3 7 C下 孵 育 3 0 mi n 对 照 实 验 孵 育 液 叶 j不 加 碘 8 一 NADPH 取 出标本 P B S冲洗 3遍 铺 于玻 片上 晾干后 逐级 酒精 脱水 二 甲苯透 明 中性树胶封 片 然后分别进 彳图像 定量 分析 计 算 阳性神经 的平 均面密度 1 5 统 计学处理 数据采用均 数 标准差 S 表示 采 用 单 t 检 验进行统计学处理 定 显著水平 为 a 一0 0 5 2结 果 2 1 禁食对大鼠小肠传输速率 的影 响 应用美蓝推进法测 定 各组大 鼠小肠传输 功能 结果显示 间断禁食大 鼠小肠染色长 度 明显短 于正 常大鼠 P 0 0 5 小肠传输 速率 也显 著慢 于正 常 大 鼠 P 0 0 1 提 示 长 期 禁 食 对 小 肠 运 输 功 能 具 有 损 伤 作 用 表 1 小 肠 传 输 速 率 的 变 化 P 0 0 5 V S正 常组 一 j O 0 1 V S正 常组 2 2大鼠小肠肌间神经丛胆碱能神经 及氮能神经 的分 布与 定 量 光镜下 正常大 鼠小肠肌 间神经 丛中的胆碱能神经纤维 呈 网状分 布 可 见粗大 的神经节 及成 串的神经 元胞 体 相互连 接 成 网 正常大 鼠小肠肌 间神经 丛中的氮 能神经主 要由神经 节 节间束 及神经纤维 交织称蓝 色网格状 节间束多 与纵 肌平行 神经节粗大 其 中可见深 浅不一 大小不等 的蓝色神经元 神 经 维普资讯 重庆 医学 2 0 0 5年 8月第 3 4卷第 8期 元细胞呈 卵圆型或 锥形 细胞核不着色 禁食组 大鼠小肠肌 间 神经丛 中的胆 碱能神经节 及节 间束 纤维 较细小 胞 体稀疏 氮 能神经纤维 及神经节增 粗增大 可见神 经元胞体融合 图像分 析显 示 禁食组大 鼠小肠肌 间神经 丛胆碱能神经平均面密度 为 1 9 6 4 0 3 4 明显低 于正 常 对照组 1 9 3 3 0 5 2 P o 0 1 禁食组大 鼠小 肠肌 间神经 丛氮能 神经平 均 面密度为 1 3 9 5 3 6 1 显著 高于正 常对 照组 1 1 3 5 3 4 2 P O 05 3讨 论 既往研究 证明禁食状 态下 胃肠 道电活 动可发生 明显 的变 化 Mi c h e l e 报 道大鼠禁食 6 h 小 肠峰 电就 明显地 表 现为 不规 律峰电活动 负载有峰 电的慢 波数不超 过 3 O 和规 律峰 电活 动 所有慢波均有峰 电活 动 两个时相 李红芳等 也报道大 鼠 禁食 4 8 h后 十二指肠 电活动 明显受抑制 且禁食 时间越长 抑 制越 强烈 但 禁食 对 胃肠道 运动 的影响 尚不清楚 本 实验 中 我们 发现 大鼠禁食后小肠传输速率 明显变慢 提示禁食会损伤 小肠 运输 功能 但 这种损伤机制不明 胃肠 道的活动有赖于肌 肉 黏 膜上 皮及血 管功能 的协 调 这些效应器有组织 的活动受肠神经系统 E Ns 的调 控 胆 碱能 神经和氮能神经 为肠神 经系统重要组成成分 本实验 中 我 们测 定禁 食大鼠小肠肌间神 经系统 胆碱能神 经和 氮能神 经含 量发 现 大 鼠经间断禁食 4周后 小肠运输功能受损 同时 小肠 肌 间神经 丛胆碱能 神经 和氮能神经也发生 了改变 禁食组大 鼠 小肠肌 间神经 丛中的胆 碱能神经节及节间束纤维较细小 胞体 稀疏 氮能神经纤维及神经节增粗增大 可见神经元胞体 融合 进一 步进行 图像 分析显示 禁食组大 鼠小肠 肌间神经丛胆碱能 神经 平均 面 密度 为 1 9 6 4 0 3 4 明显 低 于 正常 对 照 组 1 9 33 4 0 5 2 P 0 0 1 而禁食 组 大 鼠小 肠 肌 间神经 丛 氮能神经平均 面密 度为 1 3 9 5 3 6 1 显 著高 于正常对 照 组 1 1 3 5 3 4 2 P 0 0 5 由于胆碱能 神经递 质为 胃肠 11 83 道重 要的兴奋性神经 其 释放 的 乙酰胆碱 使食 管蠕 动加 强 胃 张力增加 胃窦蠕 动亢进 对小肠 和大肠 的运 动也具 有兴 奋作 用 而氮能神经 为主要的抑 制性神 经 其 释放 的抑制 性神 经递 质一氧化氮 NO 能 舒张 消化 道平 滑肌 减 少小 肠移行 性 复合 运动 并抑制兴奋性 神经递质的释放 禁食大 鼠小肠 肌间 神经 丛胆碱能神经和氮 能神经 的改变 必然会 影响到 肠管 的运 动 由此 可见 长期禁食 损伤小肠运输功能 可能 与小肠 肌间神 经丛胆碱能神经减少 以及氮 能神 经增加密切相关 参考文献 1 龙庆林 王振 华 氮能 神经 递质 和胆 碱 能神 经递 质对 大 鼠胃电节律 的影响 J 重庆医学 2 0 0 3 3 2 9 l 1 5 5 2 肖岚 蔡文琴 孙 榆 大 鼠空肠 肌间 神经丛 NA D P H一 黄递 酶 的光镜及 电镜 观察 J 解剖学报 1 9 9 6 2 7 1 8 5 3 李红芳 汪龙德 秦 晓 民 禁 食对 大 鼠胃肠 电活 动的影 响 及神经机制 J 甘肃中医学院学报 1 9 9 6 1 3 2 4 3 E 4 赵 晶京 王振华 罗元辉 等 乙酰胆 碱对大 鼠 胃电节 律作 用机制 的实 验研 究 J 重庆医学 2 0 0 3 3 2 9 1 1 5 8 5 Na k a mu r a E L e e KP S o I e t a 1 E f f e c t s o f e n d o g e n o u s a n d e xo ge n ous n i t r i c ox i de on e l e c t r i c a l r e s p on s e s of c i r c u l a r s mo ot h mu s c l e i s ol a t e d f r om t h e gu i n e a pi g s t o ma c h a n t r u m J J S mo o t h Mu s c l e R e s 2 0 0 4 4 0 4 5 1 8 3 E 6 K i k k a wa M R o l e o f n i t r e r g i c i n p u t i n me c h a n i c a l l y a n d c he mi c a l l y i ndu c e d ga s t r i c r e l ax a t i o n i n c on s c i ous do gs E J J S mo o t h Mu s c l e R e s 2 0 0 4 4 0 2 5 3 7 Va n Ge l d r e L A L e f e b v r e R A Ni t r e r g i c r e l a x a t i o n i n r a t g a s t r i c f u n d u s i n f l u e n c e o f me c h a n i s m o f i n d u c e d t o n e a n d p o s s i b l e r o l e o f s a r c o p l a s mi c e n d o p l a s mi c r e t i c u l u m C a AT P a s e J L i f e S c i 2 0 0 4 7 4 2 6 3 2 5 9 上 接 第 1 l 8 1页 下降 0 1 9 P一0 5 1 西布曲 明组 A1 c的下降约为安慰剂组 的 4倍 本研究结果 与 S e r a n o R i o s 等 的 研究结 果相 似 提 示西布 曲明用 于肥胖 的 2型糖 尿病患 者可 以发挥 明显 的降血 糖作用 显著改善该类患者的血糖控制 就该药对空腹血糖 血脂 的影 响来看 仅在 用药 第 5个 月 末西布 曲明组空腹血糖 明显低 于对照组 在用药第 3 个月末 西 布 曲明组甘油三酯和低密度脂 蛋白明显低于安慰剂组 在 用药 6个月后两组的血糖 血 脂谱 没有 显著差 异 可能 与纳 入病 例 不多 观察例数较少有 关 用药第 6个月末西布 曲明组 的空腹 血糖水平较 试 验 初期 下降 0 3 6 mmo l I 对 照组 则 升 高0 2 0 retoo l I 提示 西布曲明对于该组 患者 空腹血 糖也 有有 益 的影 响 西布 曲明对 于肥胖 的糖 尿 病患 者 的血糖 影 响机 制如 何 本研究发现 在用 药第 2 个 月末和第 4个月末西布曲 明组 的体 重明显低 于安慰剂组 P 0 0 1 用药第 6 个月末西 布曲明组 的 B MI 较试 验初期下降 2 2 k g m 对照组仅下降 0 5 8 k g m 前 者下降约为后者的约 4倍 下降程度 与 A1 c 下降程 度相 一致 S e r a n o R i o s 等研究证实西布曲 明用 于磺 脲类药 物失效 的肥胖 的 2型糖 尿病 患者 可 以明显减轻 体重 减少 B M 减少 腰围 同时伴有 空腹血糖 Al c 较 基线 的明显下降 提示西 布曲 明对 于肥胖 的糖尿 病患者的血糖 影响 可能因 为减轻患 者体 重的结 果 关于西布 曲明用于该组特殊 病人 的安 全性 的问题 本研究 发现除安慰剂 组 自觉无效退 出研究者稍 多以外 西布 曲明组在 出现不 良反应 如心悸 头 昏的例数略 多于安慰 剂组 但两组不 良反应发生率 没有 显著差异 且均 未影 响随后的治疗 提示西 布 曲明用 于肥胖 的 2型糖 尿病患 者是安 全 的 国外有 学者报 道 类似的治疗可 以明显提高糖尿病 患者的生活质量 参考 文献 1 2 3 3 4 Nor r i s SI Zha ng X Av e ne l l A e t a 1 Ef f i c a c y of p ha r mac ot