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文档简介

实验六细菌的荚膜染色法 1 实验的目的要求 学习并掌握荚膜染色法 2 荚膜染色的基本原理 荚膜是包围在细菌细胞外的一层粘液状或胶质状物质 含水量高 其成分为多糖 糖蛋白或多肽 由于荚膜与染料的亲和力弱 不易着色 而且可溶于水 易在用水冲洗时被洗去 所以通常用衬托法染色 负染色法 使菌体和背景着色 而荚膜不着色 在菌体周围形成一透明圈 也可采用Anthony氏染色法 用结晶紫使细胞和荚膜都着色 再用硫酸铜水溶液洗 荚膜被脱色 但硫酸铜吸附在荚膜上呈现淡蓝色 与深紫色的菌体区分 3 实验材料 菌种 胶质芽孢杆菌 试剂 绘图墨水1 甲基紫水溶液6 葡萄糖水溶液20 硫酸铜水溶液 甲醇香柏油二甲苯 仪器和用具 载玻片盖玻片滤纸 显微镜镜头纸 4 方法 湿墨水法干墨水法 P78 Anthony氏法 P79 5 湿墨水法 制备细菌墨水混合液加盖玻片镜检 6 制备细菌墨水混合液 1 滴绘图墨水 2 制备混合液 绘图墨水 滴1滴绘图墨水在载玻片中央 挑取少量菌苔 与墨水混合均匀涂布 7 加盖玻片 在盖玻片上放一张滤纸 轻轻按压吸干多余混合液 1 加盖玻片 将盖玻片一端浸泡在细菌墨水混合液中缓缓盖上盖玻片 2 吸去多余液体 勿留气泡 8 镜检 1 镜检 用低倍镜高倍镜观察 制片置显微镜载物台上 2 结果 背景灰色 菌体较暗 菌体周围荚膜呈现明亮透明圈 9 干墨水法 制备细菌墨水混合液涂片固定染色镜检 10 制备细菌墨水混合液 1 滴葡萄糖溶液 2 涂片 6 葡萄糖 在载玻片一端滴一滴6 葡萄糖水 挑取少量菌苔 混匀后再加一环墨水 再次混匀 11 涂片 1 先将推片一端放在混合液上 2 将推片向另一端平行滑动 3 使混合液均匀铺成薄层 4 干燥 室温自然晾干 12 固定 干燥 甲醇固定 自然干燥 甲醇 滴甲醇浸没涂片1分钟 倾去甲醇 室温自然干燥 注意 固定及干燥均不能加热和用热风吹干 因为荚膜含水量高 加热会使其失水变形 同时 菌体失水收缩 会与周围染料脱离产生透明区 导致不产荚膜的细菌被误认为有荚膜 13 染色 1 滴甲基紫染液 2 水洗 不要直接冲菌膜 甲基紫染液 甲基紫染液染色1 2分钟 3 自然干燥 14 镜检 1 镜检 用低倍镜高倍镜观察 制片置显微镜载物台上 2 结果 背景灰黑色 菌体紫色 菌体周围荚膜呈现明亮透明圈 15 Anthony氏法 制片固定染色镜检 16 制片 固定 生理盐水 1 滴生理盐水 挑取少量菌苔 与生理盐水混匀均匀涂布 2 涂片 滴半滴生理盐水在载玻片中央 3 干燥固定 室温自然晾干 17 染色 1 结晶紫染液 1 滴孔结晶紫染液 滴结晶紫染色2分钟 3 脱色 20 CuSO4水溶液 18 镜检 1 镜检 用低倍镜高倍镜观察 制片置显微镜载物台上 2 结果
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