甲型肝炎病毒IgM抗体测定.ppt.ppt

甲型肝炎病毒IgM抗体的测定 捕获法 酶联免疫吸附试验 ELISA法 将抗体 抗原 包被在固相表面后 按不同的步骤加入待测抗原 抗体 和酶标抗体 抗原 充分反应后用洗涤的方法 使固相上形成的抗原抗体复合物与其他物质分离 洗去游离的酶标抗体 抗原 最后加入底物 根据酶对底物催化的显色反应程度 而对标本中的抗原 抗体 进行定性或定量 ELISA类型 夹心法间接法测抗体竞争法捕获法 捕获法测IgM抗体 血清中针对某些抗原的特异性IgM常和特异性IgG同时存在 后者会干扰IgM抗体的测定 因此测定IgM抗本多用捕获法 1 包被抗体 用抗人 链抗体包被固相载体上 形成固相抗人 链 2 加入病人的血清标本 3 加入特异性抗原试剂 4 加入针对特异性抗原的酶标抗体 5 加底物显色 免疫球蛋白的结构 一 基本结构 四肽链结构 由两条相同的轻链 LightChain 和两条相同的重链 Heavychain 通过链间二硫键连结形成 分子式为 H2L2 四条肽链两端游离的NH2和COOH方向一致分别命名为N端和C端 一 轻链和重链 轻链 L链 链 链轻链决定型别 型 型正常人 2 1 重链 H链 根据其抗原性的差异 人类Ig的H链分为 链 链 链 链 链 重链决定Ig类别IgGIgAIgMIgDIgE 捕获法 主要用于血清中某种抗体亚型成分 如IgM 的测定 实验原理 用抗人 链抗体包被酶标板 用以捕获血清中IgM类抗体 然后用特异性HAVAg与IgM抗体结合 再加酶标抗HAV抗体 最后加底物显色 显色深浅与HAVIgM的含量成正相关 试剂盒组成 1抗 链包被干板条4 12孔2抗 HAVIgM阴性对照1ml 1瓶3抗 HAVIgM阳性对照1ml 1瓶4HA Ag2 6ml 1瓶5酶结合物2 6ml 1瓶6浓缩洗涤液20ml 1瓶 用蒸馏水1 20稀释 7显色剂A3ml 1瓶8显色剂B3ml 1瓶9终止液3ml 1瓶 操作步骤 1 将微孔条固定在支架上 按顺序编号 2 分别将待测标本 阴 阳性对照100 l 2滴 加入相应的孔中 设空白对照孔 置37 20分钟 3 洗涤 甩去孔内液体 用洗涤液注满各孔 静置5秒 共三次 每次洗后均需扣干 4 每孔加HA Ag50 l 酶结合物50 l 空白对照除外 振荡混匀 置37 20分钟 5 洗涤 重复上述36 显色 每孔加显色剂A液50 l 再加显色剂B液50 l 振荡混匀 置37 15分钟 7 每孔加终止液50 l 结果判定 酶标仪读数 450nm波长630nm副波长读数 临界值 阴性对照孔OD均值 2 1 阴性对照OD小于0 05以0 05计算 结果判定 S CO 1为HAV IgM阳性 S CO 1为HAV IgM阴性 Cutoffvalue 临界值 Cutoffvalue 临界值 阴阳性判断值 简称CO值 夹心法 若S CO值 1 为阳性 S CO值1 为阴性 HAVHBV肝炎病毒 HCVHDVHEV其他 HGV TTV SEN TLMV 甲型肝炎急性期血清标志物出现过程 要点 1 HAV的传播途径 粪 口 2 HAV的潜伏期 30天 2周 3 血清标志物出现的规律4 免疫学检测指标 HAVAg抗HAV总抗体抗HAV IgM 临床意义 血清中抗HAVIgM出现于感染的早期 发病后数日 抗体的效价很快升到峰值并持续较长时间 2 4周 经1 2个月后抗体的效价和阳性率明显不降 于3个月后消失 因此抗HAVIgM阳性 尤其是效价较高时 表明处于感染的早期 被公认为