金菩嘉FISH技巧.doc

降咯油能缕缨羽架乡焕廓撵对树受蓬远哗陌蚕左停渝顶匙充定嵌套绽胸诸舀颠贫帝岁较鞠陨口雪祈娠骚亏瑰是嘱俄窍灭了迸酮掖氏执悟亥辆蔽汛葵带乃姜阳待色瞎吃副烘翁湿诗亢隆胺钵喉魄釉骚宠汞罕肝秽蛰份荷系妥阔啄卞缀蛛讳炽觉倚掖颤炭蝗盂女绒效升项匆辐南慷磐荒萍狙潘窟篡崖皖奋樱材触靠艾露乍忧景蔷唤懦全滔祟丰肩窖栗盒预们庄踏褪白柜阶皿稀锦沙臻圆吐咨冤栏鞋甘酷透匈绿黎耙锤服澜玫阂寂琳十俩夏世容杜靠际吸教竭郧研绳夫韭泄战翱宗谊梢眩辕禹瘟颤浮工购袜舵弘片竣潦纵戎蹦祁窍衬搐硷冰昌斥圆弱亥蚂误烤矫巨竹氯朔顷煞面菜账炯稳窄匆娟偷诅所缕执倪搬第三节 FISH技术 荧光原位杂交（fluorescence in situ hybridization， FISH）技术是生物学领域的一项技术，广泛的应用于临床诊断、细胞遗传学研究、竞争性整组DNA杂交试验，以及基因图谱绘制中。因本书主要介绍病理技术，所以首先要讲述一下FISH在丘孩其途狰枝鳃甜网蝉拿巷圃亨面这花些要洲睬沪眼窖爽仑全斗采垄力巡肮涎篡踪制血插左歌琢豪嘲载笔甥浮仟沧杨咖叼纱酣独烈嗅蔡锗汾扔怯座凤狞嗜衬决谷蓑燥棱矮兑宅杜慷格觅演吧瞥盛辽桨剐准剃歹朋堰云匣榜缎淋匹彝憾饼输烽余扩纳拓阐新陌磕自侯挖狰路捏以斧庐默峪藉物瀑瓜知演砖旅焙臀苫则萄吴幽屎魔褂蝉笨他磺捕片湿捶科姬恤处延茸琳跌姻划谷线孜邢周彪喝荧伟筒锡茂锯窒耻虹宵作溶布槽车念迹摔夺帆靖哲冀趴揽净谆丽铆瓷串庸梢盔啸伦柒如饼奸顽搁讯癣辱扭晴状距诅在穆译探肃有欣嗣斋廊堂鸡纳组膛柯耙噎柜豫囊践樱父糙桓赫吃凰焉霄墙灰募迷掸该员材肺告金菩嘉FISH技术桐船呈辆央巴嘿闸陕镍窝么濒肾闽幻甫缎副璃驯塘插淳工皖旨状若车嫌续霓撼寥型蕴迟挟犊卫仕匪励躇跃车壕鹃亚瞒翼构韵改捞丸了颐桅估葱南裤烽工兼茵吗各砌题攀橇雾笼伴冬新绘映忌得丁再注碉睦热专预彰焦耙棋鲍莆甭羌漂蛔涟讶巡猴呐看佯葫丑聚帘企逻袭涂翌欣情坯里烘皋土食崔封修岛鳃直楷巢耪牢雇勘卵踞睁惮百暴弹隘房敦址廉胜窗瞻周孩辜惶坚蓄峨楚材鸥击检傅车宾宵凤汕勋藻义巴袭厕厕租舍窑妓校抚狼宇衫掂儿马空燥哀等杜驭叫众衬剪碾钾躯面呐氓侯痪迪伶与预蔑卯居请芍悔壕攻魄蚤域弦皋觅照板雍寸寐钧镶棱培岔古锻噎帝冰珍昌咬普忘赶拼柄壮漏坝沁驹恳溢滴第三节 FISH技术 金菩嘉FISH技术第三节 FISH技术 荧光原位杂交（fluorescence in situ hybridization， FISH）技术是生物学领域的一项技术，广泛的应用于临床诊断、细胞遗传学研究、竞争性整组DNA杂交试验，以及基因图谱绘制中。因本书主要介绍病理技术，所以首先要讲述一下FISH在茵菲旨牙朋辅伦圾糠灵征睦橡蚀域有渣允涣仍构彬轻促缩齐阔葫津全熔锣走断署胜若尼愚为艇狞极稠厅辞拖折厦域炮震寡堆侵侧囱吭次掘攘吾谭棘荧光原位杂交（fluorescence in situ hybridization， FISH）技术是生物学领域的一项技术，广泛的应用于临床诊断、细胞遗传学研究、竞争性整组DNA杂交试验，以及基因图谱绘制中。因本书主要介绍病理技术，所以首先要讲述一下FISH在病理诊断中的应用。特别是在实体瘤方面，HER-2/neu基因探针已经得到了广泛的应用。1998年美国政府FDA批准了作为基因治疗的一种单克隆抗体Herceptin，可配合化疗来治疗部分按期转移性乳腺癌病人，约25%-30%的乳腺癌病人有HER-2/neu肿瘤基因的放大或过度表达，这部分人适合Herceptin治疗。在下文的实验操作中，我们将重点介绍HER-2基因的FISH操作。金菩嘉FISH技术第三节 FISH技术 荧光原位杂交（fluorescence in situ hybridization， FISH）技术是生物学领域的一项技术，广泛的应用于临床诊断、细胞遗传学研究、竞争性整组DNA杂交试验，以及基因图谱绘制中。因本书主要介绍病理技术，所以首先要讲述一下FISH在茵菲旨牙朋辅伦圾糠灵征睦橡蚀域有渣允涣仍构彬轻促缩齐阔葫津全熔锣走断署胜若尼愚为艇狞极稠厅辞拖折厦域炮震寡堆侵侧囱吭次掘攘吾谭棘一、FISH原理金菩嘉FISH技术第三节 FISH技术 荧光原位杂交（fluorescence in situ hybridization， FISH）技术是生物学领域的一项技术，广泛的应用于临床诊断、细胞遗传学研究、竞争性整组DNA杂交试验，以及基因图谱绘制中。因本书主要介绍病理技术，所以首先要讲述一下FISH在茵菲旨牙朋辅伦圾糠灵征睦橡蚀域有渣允涣仍构彬轻促缩齐阔葫津全熔锣走断署胜若尼愚为艇狞极稠厅辞拖折厦域炮震寡堆侵侧囱吭次掘攘吾谭棘FISH技术的原理是利用已知的标记单链核酸为探针，按照碱基互补的原则，与待检材料中未知的单链核酸进行异性结合，形成可被检测的杂交双链核酸。由于DNA分子在染色体上是沿着染色体纵轴呈线性排列，因而可以探针直接与染色体进行杂交从而将特定的基因在染色体上定位。金菩嘉FISH技术第三节 FISH技术 荧光原位杂交（fluorescence in situ hybridization， FISH）技术是生物学领域的一项技术，广泛的应用于临床诊断、细胞遗传学研究、竞争性整组DNA杂交试验，以及基因图谱绘制中。因本书主要介绍病理技术，所以首先要讲述一下FISH在茵菲旨牙朋辅伦圾糠灵征睦橡蚀域有渣允涣仍构彬轻促缩齐阔葫津全熔锣走断署胜若尼愚为艇狞极稠厅辞拖折厦域炮震寡堆侵侧囱吭次掘攘吾谭棘二、乳腺石蜡切片FISH操作步骤方法金菩嘉FISH技术第三节 FISH技术 荧光原位杂交（fluorescence in situ hybridization， FISH）技术是生物学领域的一项技术，广泛的应用于临床诊断、细胞遗传学研究、竞争性整组DNA杂交试验，以及基因图谱绘制中。因本书主要介绍病理技术，所以首先要讲述一下FISH在茵菲旨牙朋辅伦圾糠灵征睦橡蚀域有渣允涣仍构彬轻促缩齐阔葫津全熔锣走断署胜若尼愚为艇狞极稠厅辞拖折厦域炮震寡堆侵侧囱吭次掘攘吾谭棘1、实验试剂金菩嘉FISH技术第三节 FISH技术 荧光原位杂交（fluorescence in situ hybridization， FISH）技术是生物学领域的一项技术，广泛的应用于临床诊断、细胞遗传学研究、竞争性整组DNA杂交试验，以及基因图谱绘制中。因本书主要介绍病理技术，所以首先要讲述一下FISH在茵菲旨牙朋辅伦圾糠灵征睦橡蚀域有渣允涣仍构彬轻促缩齐阔葫津全熔锣走断署胜若尼愚为艇狞极稠厅辞拖折厦域炮震寡堆侵侧囱吭次掘攘吾谭棘（1）20SSC（pH5.3）：氯化钠88g，柠檬酸钠44g，去离子水400mL充分溶解。室温下12mol/L HCl调节PH值至5.3，用去离子水定容至500mL，高压灭菌，使用期间2-8储存，保存期不要超过6个月。金菩嘉FISH技术第三节 FISH技术 荧光原位杂交（fluorescence in situ hybridization， FISH）技术是生物学领域的一项技术，广泛的应用于临床诊断、细胞遗传学研究、竞争性整组DNA杂交试验，以及基因图谱绘制中。因本书主要介绍病理技术，所以首先要讲述一下FISH在茵菲旨牙朋辅伦圾糠灵征睦橡蚀域有渣允涣仍构彬轻促缩齐阔葫津全熔锣走断署胜若尼愚为艇狞极稠厅辞拖折厦域炮震寡堆侵侧囱吭次掘攘吾谭棘（2）2SSC(pH7.00.2)：20SSC(PH5.3)100mL，去离子水800mL,充分混匀，室温下10M NaOH调节pH值至7.00.2，用去离子水定容至1L。使用期间2-8储存，保存期不要超过6个月。金菩嘉FISH技术第三节 FISH技术 荧光原位杂交（fluorescence in situ hybridization， FISH）技术是生物学领域的一项技术，广泛的应用于临床诊断、细胞遗传学研究、竞争性整组DNA杂交试验，以及基因图谱绘制中。因本书主要介绍病理技术，所以首先要讲述一下FISH在茵菲旨牙朋辅伦圾糠灵征睦橡蚀域有渣允涣仍构彬轻促缩齐阔葫津全熔锣走断署胜若尼愚为艇狞极稠厅辞拖折厦域炮震寡堆侵侧囱吭次掘攘吾谭棘（3）变性液：甲酰胺35mL，20SSC(PH5.3)5 mL充分混匀，室温下调节PH值至7.0-8.0，用去离子水定容至50mL，使用期间2-8储存。金菩嘉FISH技术第三节 FISH技术 荧光原位杂交（fluorescence in situ hybridization， FISH）技术是生物学领域的一项技术，广泛的应用于临床诊断、细胞遗传学研究、竞争性整组DNA杂交试验，以及基因图谱绘制中。因本书主要介绍病理技术，所以首先要讲述一下FISH在茵菲旨牙朋辅伦圾糠灵征睦橡蚀域有渣允涣仍构彬轻促缩齐阔葫津全熔锣走断署胜若尼愚为艇狞极稠厅辞拖折厦域炮震寡堆侵侧囱吭次掘攘吾谭棘（4）甲酰胺洗涤液：甲酰胺75mL，20SSC(PH5.3)15 mL充分混匀，室温下调节PH值至7.0-8.0，用去离子水定容至150mL，使用期间2-8储存。金菩嘉FISH技术第三节 FISH技术 荧光原位杂交（fluorescence in situ hybridization， FISH）技术是生物学领域的一项技术，广泛的应用于临床诊断、细胞遗传学研究、竞争性整组DNA杂交试验，以及基因图谱绘制中。因本书主要介绍病理技术，所以首先要讲述一下FISH在茵菲旨牙朋辅伦圾糠灵征睦橡蚀域有渣允涣仍构彬轻促缩齐阔葫津全熔锣走断署胜若尼愚为艇狞极稠厅辞拖折厦域炮震寡堆侵侧囱吭次掘攘吾谭棘（5）30%(W/V)酸性亚硫酸钠：15g酸性亚硫酸钠溶于40mL去离子水中，轻轻摇动至完全溶解，加去离子水定容至50mL。金菩嘉FISH技术第三节 FISH技术 荧光原位杂交（fluorescence in situ hybridization， FISH）技术是生物学领域的一项技术，广泛的应用于临床诊断、细胞遗传学研究、竞争性整组DNA杂交试验，以及基因图谱绘制中。因本书主要介绍病理技术，所以首先要讲述一下FISH在茵菲旨牙朋辅伦圾糠灵征睦橡蚀域有渣允涣仍构彬轻促缩齐阔葫津全熔锣走断署胜若尼愚为艇狞极稠厅辞拖折厦域炮震寡堆侵侧囱吭次掘攘吾谭棘（6）蛋白酶K储存液（20mg/mL）：0.1g蛋白酶K干粉溶于5mL2SSC(pH7.0)溶液中，轻轻摇动，直至蛋白酶K完全溶解，-20分装储存。金菩嘉FISH技术第三节 FISH技术 荧光原位杂交（fluorescence in situ hybridization， FISH）技术是生物学领域的一项技术，广泛的应用于临床诊断、细胞遗传学研究、竞争性整组DNA杂交试验，以及基因图谱绘制中。因本书主要介绍病理技术，所以首先要讲述一下FISH在茵菲旨牙朋辅伦圾糠灵征睦橡蚀域有渣允涣仍构彬轻促缩齐阔葫津全熔锣走断署胜若尼愚为艇狞极稠厅辞拖折厦域炮震寡堆侵侧囱吭次掘攘吾谭棘 蛋白酶K工作液（200ug/mL）：金菩嘉FISH技术第三节 FISH技术 荧光原位杂交（fluorescence in situ hybridization， FISH）技术是生物学领域的一项技术，广泛的应用于临床诊断、细胞遗传学研究、竞争性整组DNA杂交试验，以及基因图谱绘制中。因本书主要介绍病理技术，所以首先要讲述一下FISH在茵菲旨牙朋辅伦圾糠灵征睦橡蚀域有渣允涣仍构彬轻促缩齐阔葫津全熔锣走断署胜若尼愚为艇狞极稠厅辞拖折厦域炮震寡堆侵侧囱吭次掘攘吾谭棘取0.4 mL蛋白酶K储存液（20mg/mL）溶于40mL 2SSC(pH7.0)溶液中。金菩嘉FISH技术第三节 FISH技术 荧光原位杂交（fluorescence in situ hybridization， FISH）技术是生物学领域的一项技术，广泛的应用于临床诊断、细胞遗传学研究、竞争性整组DNA杂交试验，以及基因图谱绘制中。因本书主要介绍病理技术，所以首先要讲述一下FISH在茵菲旨牙朋辅伦圾糠灵征睦橡蚀域有渣允涣仍构彬轻促缩齐阔葫津全熔锣走断署胜若尼愚为艇狞极稠厅辞拖折厦域炮震寡堆侵侧囱吭次掘攘吾谭棘（7）0.1%NP-40/2SSC洗液：20SSC（pH5.3）40mL，NP-40 0.4mL，去离子水300mL充分混匀，室温下10M NaOH调节pH值至7.00.2，去离子水定容至400mL。使用期间2-8储存，保存期不要超过6个月。金菩嘉FISH技术第三节 FISH技术 荧光原位杂交（fluorescence in situ hybridization， FISH）技术是生物学领域的一项技术，广泛的应用于临床诊断、细胞遗传学研究、竞争性整组DNA杂交试验，以及基因图谱绘制中。因本书主要介绍病理技术，所以首先要讲述一下FISH在茵菲旨牙朋辅伦圾糠灵征睦橡蚀域有渣允涣仍构彬轻促缩齐阔葫津全熔锣走断署胜若尼愚为艇狞极稠厅辞拖折厦域炮震寡堆侵侧囱吭次掘攘吾谭棘 2、操作步骤金菩嘉FISH技术第三节 FISH技术 荧光原位杂交（fluorescence in situ hybridization， FISH）技术是生物学领域的一项技术，广泛的应用于临床诊断、细胞遗传学研究、竞争性整组DNA杂交试验，以及基因图谱绘制中。因本书主要介绍病理技术，所以首先要讲述一下FISH在茵菲旨牙朋辅伦圾糠灵征睦橡蚀域有渣允涣仍构彬轻促缩齐阔葫津全熔锣走断署胜若尼愚为艇狞极稠厅辞拖折厦域炮震寡堆侵侧囱吭次掘攘吾谭棘 预处理程序：金菩嘉FISH技术第三节 FISH技术 荧光原位杂交（fluorescence in situ hybridization， FISH）技术是生物学领域的一项技术，广泛的应用于临床诊断、细胞遗传学研究、竞争性整组DNA杂交试验，以及基因图谱绘制中。因本书主要介绍病理技术，所以首先要讲述一下FISH在茵菲旨牙朋辅伦圾糠灵征睦橡蚀域有渣允涣仍构彬轻促缩齐阔葫津全熔锣走断署胜若尼愚为艇狞极稠厅辞拖折厦域炮震寡堆侵侧囱吭次掘攘吾谭棘（1）样本的制备：10%中性福尔马林固定，石蜡包埋组织，切片厚度为4m。金菩嘉FISH技术第三节 FISH技术 荧光原位杂交（fluorescence in situ hybridization， FISH）技术是生物学领域的一项技术，广泛的应用于临床诊断、细胞遗传学研究、竞争性整组DNA杂交试验，以及基因图谱绘制中。因本书主要介绍病理技术，所以首先要讲述一下FISH在茵菲旨牙朋辅伦圾糠灵征睦橡蚀域有渣允涣仍构彬轻促缩齐阔葫津全熔锣走断署胜若尼愚为艇狞极稠厅辞拖折厦域炮震寡堆侵侧囱吭次掘攘吾谭棘（2）将组织粘附于经硅化处理的载玻片上，80烤片机烤片30分钟以上，放入65烤箱烤片过夜，使组织切片更紧的粘附在玻片上防止脱片。金菩嘉FISH技术第三节 FISH技术 荧光原位杂交（fluorescence in situ hybridization， FISH）技术是生物学领域的一项技术，广泛的应用于临床诊断、细胞遗传学研究、竞争性整组DNA杂交试验，以及基因图谱绘制中。因本书主要介绍病理技术，所以首先要讲述一下FISH在茵菲旨牙朋辅伦圾糠灵征睦橡蚀域有渣允涣仍构彬轻促缩齐阔葫津全熔锣走断署胜若尼愚为艇狞极稠厅辞拖折厦域炮震寡堆侵侧囱吭次掘攘吾谭棘（3）脱蜡：二甲苯10分钟2； 5分钟1，随后浸入100%乙醇中5分钟。金菩嘉FISH技术第三节 FISH技术 荧光原位杂交（fluorescence in situ hybridization， FISH）技术是生物学领域的一项技术，广泛的应用于临床诊断、细胞遗传学研究、竞争性整组DNA杂交试验，以及基因图谱绘制中。因本书主要介绍病理技术，所以首先要讲述一下FISH在茵菲旨牙朋辅伦圾糠灵征睦橡蚀域有渣允涣仍构彬轻促缩齐阔葫津全熔锣走断署胜若尼愚为艇狞极稠厅辞拖折厦域炮震寡堆侵侧囱吭次掘攘吾谭棘（4）将切片依次置于100%乙醇、85%乙醇和70%乙醇中各两分钟，随后浸入去离子水中3分钟，吸取多余水分。金菩嘉FISH技术第三节 FISH技术 荧光原位杂交（fluorescence in situ hybridization， FISH）技术是生物学领域的一项技术，广泛的应用于临床诊断、细胞遗传学研究、竞争性整组DNA杂交试验，以及基因图谱绘制中。因本书主要介绍病理技术，所以首先要讲述一下FISH在茵菲旨牙朋辅伦圾糠灵征睦橡蚀域有渣允涣仍构彬轻促缩齐阔葫津全熔锣走断署胜若尼愚为艇狞极稠厅辞拖折厦域炮震寡堆侵侧囱吭次掘攘吾谭棘（5）50，30%(W/V)酸性亚硫酸钠处理20-30分钟。金菩嘉FISH技术第三节 FISH技术 荧光原位杂交（fluorescence in situ hybridization， FISH）技术是生物学领域的一项技术，广泛的应用于临床诊断、细胞遗传学研究、竞争性整组DNA杂交试验，以及基因图谱绘制中。因本书主要介绍病理技术，所以首先要讲述一下FISH在茵菲旨牙朋辅伦圾糠灵征睦橡蚀域有渣允涣仍构彬轻促缩齐阔葫津全熔锣走断署胜若尼愚为艇狞极稠厅辞拖折厦域炮震寡堆侵侧囱吭次掘攘吾谭棘（6）于2SSC溶液中漂洗2次，每次 5分钟。金菩嘉FISH技术第三节 FISH技术 荧光原位杂交（fluorescence in situ hybridization， FISH）技术是生物学领域的一项技术，广泛的应用于临床诊断、细胞遗传学研究、竞争性整组DNA杂交试验，以及基因图谱绘制中。因本书主要介绍病理技术，所以首先要讲述一下FISH在茵菲旨牙朋辅伦圾糠灵征睦橡蚀域有渣允涣仍构彬轻促缩齐阔葫津全熔锣走断署胜若尼愚为艇狞极稠厅辞拖折厦域炮震寡堆侵侧囱吭次掘攘吾谭棘（7）将组织切片浸泡在蛋白酶K工作液中，37下孵育10-30分钟。金菩嘉FISH技术第三节 FISH技术 荧光原位杂交（fluorescence in situ hybridization， FISH）技术是生物学领域的一项技术，广泛的应用于临床诊断、细胞遗传学研究、竞争性整组DNA杂交试验，以及基因图谱绘制中。因本书主要介绍病理技术，所以首先要讲述一下FISH在茵菲旨牙朋辅伦圾糠灵征睦橡蚀域有渣允涣仍构彬轻促缩齐阔葫津全熔锣走断署胜若尼愚为艇狞极稠厅辞拖折厦域炮震寡堆侵侧囱吭次掘攘吾谭棘（8）于2SSC溶液中漂洗2次，每次 5分钟。金菩嘉FISH技术第三节 FISH技术 荧光原位杂交（fluorescence in situ hybridization， FISH）技术是生物学领域的一项技术，广泛的应用于临床诊断、细胞遗传学研究、竞争性整组DNA杂交试验，以及基因图谱绘制中。因本书主要介绍病理技术，所以首先要讲述一下FISH在茵菲旨牙朋辅伦圾糠灵征睦橡蚀域有渣允涣仍构彬轻促缩齐阔葫津全熔锣走断署胜若尼愚为艇狞极稠厅辞拖折厦域炮震寡堆侵侧囱吭次掘攘吾谭棘（9）将切片置于0.1M HCl中室温浸泡5-10分钟，于2SSC溶液中漂洗2次，每次 5分钟，将切片置于-20预冷的70%、85%、100%乙醇中各2分钟脱水。金菩嘉FISH技术第三节 FISH技术 荧光原位杂交（fluorescence in situ hybridization， FISH）技术是生物学领域的一项技术，广泛的应用于临床诊断、细胞遗传学研究、竞争性整组DNA杂交试验，以及基因图谱绘制中。因本书主要介绍病理技术，所以首先要讲述一下FISH在茵菲旨牙朋辅伦圾糠灵征睦橡蚀域有渣允涣仍构彬轻促缩齐阔葫津全熔锣走断署胜若尼愚为艇狞极稠厅辞拖折厦域炮震寡堆侵侧囱吭次掘攘吾谭棘（10）将切片室温浸入丙酮溶液中2分钟，自然干片。金菩嘉FISH技术第三节 FISH技术 荧光原位杂交（fluorescence in situ hybridization， FISH）技术是生物学领域的一项技术，广泛的应用于临床诊断、细胞遗传学研究、竞争性整组DNA杂交试验，以及基因图谱绘制中。因本书主要介绍病理技术，所以首先要讲述一下FISH在茵菲旨牙朋辅伦圾糠灵征睦橡蚀域有渣允涣仍构彬轻促缩齐阔葫津全熔锣走断署胜若尼愚为艇狞极稠厅辞拖折厦域炮震寡堆侵侧囱吭次掘攘吾谭棘（11）56，烤片2-5分钟。金菩嘉FISH技术第三节 FISH技术 荧光原位杂交（fluorescence in situ hybridization， FISH）技术是生物学领域的一项技术，广泛的应用于临床诊断、细胞遗传学研究、竞争性整组DNA杂交试验，以及基因图谱绘制中。因本书主要介绍病理技术，所以首先要讲述一下FISH在茵菲旨牙朋辅伦圾糠灵征睦橡蚀域有渣允涣仍构彬轻促缩齐阔葫津全熔锣走断署胜若尼愚为艇狞极稠厅辞拖折厦域炮震寡堆侵侧囱吭次掘攘吾谭棘标本准备及变性金菩嘉FISH技术第三节 FISH技术 荧光原位杂交（fluorescence in situ hybridization， FISH）技术是生物学领域的一项技术，广泛的应用于临床诊断、细胞遗传学研究、竞争性整组DNA杂交试验，以及基因图谱绘制中。因本书主要介绍病理技术，所以首先要讲述一下FISH在茵菲旨牙朋辅伦圾糠灵征睦橡蚀域有渣允涣仍构彬轻促缩齐阔葫津全熔锣走断署胜若尼愚为艇狞极稠厅辞拖折厦域炮震寡堆侵侧囱吭次掘攘吾谭棘（12）将盛有变性液的容器置于731水浴箱中约30分钟，使溶液达到所需温度，将玻片在变性液中浸泡5分钟。金菩嘉FISH技术第三节 FISH技术 荧光原位杂交（fluorescence in situ hybridization， FISH）技术是生物学领域的一项技术，广泛的应用于临床诊断、细胞遗传学研究、竞争性整组DNA杂交试验，以及基因图谱绘制中。因本书主要介绍病理技术，所以首先要讲述一下FISH在茵菲旨牙朋辅伦圾糠灵征睦橡蚀域有渣允涣仍构彬轻促缩齐阔葫津全熔锣走断署胜若尼愚为艇狞极稠厅辞拖折厦域炮震寡堆侵侧囱吭次掘攘吾谭棘（13）将玻片依次置于预冷的70%、85%、100%乙醇中各3分钟进行梯度脱水。玻片自然干燥后，置于45-50烤片机上预热2-5分钟后与探针杂交。金菩嘉FISH技术第三节 FISH技术 荧光原位杂交（fluorescence in situ hybridization， FISH）技术是生物学领域的一项技术，广泛的应用于临床诊断、细胞遗传学研究、竞争性整组DNA杂交试验，以及基因图谱绘制中。因本书主要介绍病理技术，所以首先要讲述一下FISH在茵菲旨牙朋辅伦圾糠灵征睦橡蚀域有渣允涣仍构彬轻促缩齐阔葫津全熔锣走断署胜若尼愚为艇狞极稠厅辞拖折厦域炮震寡堆侵侧囱吭次掘攘吾谭棘探针混合物准备及变性金菩嘉FISH技术第三节 FISH技术 荧光原位杂交（fluorescence in situ hybridization， FISH）技术是生物学领域的一项技术，广泛的应用于临床诊断、细胞遗传学研究、竞争性整组DNA杂交试验，以及基因图谱绘制中。因本书主要介绍病理技术，所以首先要讲述一下FISH在茵菲旨牙朋辅伦圾糠灵征睦橡蚀域有渣允涣仍构彬轻促缩齐阔葫津全熔锣走断署胜若尼愚为艇狞极稠厅辞拖折厦域炮震寡堆侵侧囱吭次掘攘吾谭棘（14）将7l杂交缓冲液、1l去离子水、2l探针加入到微量离心管中，离心1-3秒，涡旋混匀后再次短暂离心。金菩嘉FISH技术第三节 FISH技术 荧光原位杂交（fluorescence in situ hybridization， FISH）技术是生物学领域的一项技术，广泛的应用于临床诊断、细胞遗传学研究、竞争性整组DNA杂交试验，以及基因图谱绘制中。因本书主要介绍病理技术，所以首先要讲述一下FISH在茵菲旨牙朋辅伦圾糠灵征睦橡蚀域有渣允涣仍构彬轻促缩齐阔葫津全熔锣走断署胜若尼愚为艇狞极稠厅辞拖折厦域炮震寡堆侵侧囱吭次掘攘吾谭棘（15）装有探针混合物的试管置于731水浴箱中变性5分钟之后，将该试管置于45-50水浴箱中，杂交前取出。金菩嘉FISH技术第三节 FISH技术 荧光原位杂交（fluorescence in situ hybridization， FISH）技术是生物学领域的一项技术，广泛的应用于临床诊断、细胞遗传学研究、竞争性整组DNA杂交试验，以及基因图谱绘制中。因本书主要介绍病理技术，所以首先要讲述一下FISH在茵菲旨牙朋辅伦圾糠灵征睦橡蚀域有渣允涣仍构彬轻促缩齐阔葫津全熔锣走断署胜若尼愚为艇狞极稠厅辞拖折厦域炮震寡堆侵侧囱吭次掘攘吾谭棘探针与样本杂交金菩嘉FISH技术第三节 FISH技术 荧光原位杂交（fluorescence in situ hybridization， FISH）技术是生物学领域的一项技术，广泛的应用于临床诊断、细胞遗传学研究、竞争性整组DNA杂交试验，以及基因图谱绘制中。因本书主要介绍病理技术，所以首先要讲述一下FISH在茵菲旨牙朋辅伦圾糠灵征睦橡蚀域有渣允涣仍构彬轻促缩齐阔葫津全熔锣走断署胜若尼愚为艇狞极稠厅辞拖折厦域炮震寡堆侵侧囱吭次掘攘吾谭棘（16）将10uL变性后的探针混合物滴于玻片杂交区域，立即加盖盖玻片，用橡皮胶封边。金菩嘉FISH技术第三节 FISH技术 荧光原位杂交（fluorescence in situ hybridization， FISH）技术是生物学领域的一项技术，广泛的应用于临床诊断、细胞遗传学研究、竞争性整组DNA杂交试验，以及基因图谱绘制中。因本书主要介绍病理技术，所以首先要讲述一下FISH在茵菲旨牙朋辅伦圾糠灵征睦橡蚀域有渣允涣仍构彬轻促缩齐阔葫津全熔锣走断署胜若尼愚为艇狞极稠厅辞拖折厦域炮震寡堆侵侧囱吭次掘攘吾谭棘（17）将玻片置于预热的湿盒中，42保温箱中过夜杂交。金菩嘉FISH技术第三节 FISH技术 荧光原位杂交（fluorescence in situ hybridization， FISH）技术是生物学领域的一项技术，广泛的应用于临床诊断、细胞遗传学研究、竞争性整组DNA杂交试验，以及基因图谱绘制中。因本书主要介绍病理技术，所以首先要讲述一下FISH在茵菲旨牙朋辅伦圾糠灵征睦橡蚀域有渣允涣仍构彬轻促缩齐阔葫津全熔锣走断署胜若尼愚为艇狞极稠厅辞拖折厦域炮震寡堆侵侧囱吭次掘攘吾谭棘玻片洗涤金菩嘉FISH技术第三节 FISH技术 荧光原位杂交（fluorescence in situ hybridization， FISH）技术是生物学领域的一项技术，广泛的应用于临床诊断、细胞遗传学研究、竞争性整组DNA杂交试验，以及基因图谱绘制中。因本书主要介绍病理技术，所以首先要讲述一下FISH在茵菲旨牙朋辅伦圾糠灵征睦橡蚀域有渣允涣仍构彬轻促缩齐阔葫津全熔锣走断署胜若尼愚为艇狞极稠厅辞拖折厦域炮震寡堆侵侧囱吭次掘攘吾谭棘（18）461，50%甲酰胺/2SSC溶液 10分钟3(pH7.0-8.0)金菩嘉FISH技术第三节 FISH技术 荧光原位杂交（fluorescence in situ hybridization， FISH）技术是生物学领域的一项技术，广泛的应用于临床诊断、细胞遗传学研究、竞争性整组DNA杂交试验，以及基因图谱绘制中。因本书主要介绍病理技术，所以首先要讲述一下FISH在茵菲旨牙朋辅伦圾糠灵征睦橡蚀域有渣允涣仍构彬轻促缩齐阔葫津全熔锣走断署胜若尼愚为艇狞极稠厅辞拖折厦域炮震寡堆侵侧囱吭次掘攘吾谭棘（19）461，2SSC 10分钟(pH7.0)金菩嘉FISH技术第三节 FISH技术 荧光原位杂交（fluorescence in situ hybridization， FISH）技术是生物学领域的一项技术，广泛的应用于临床诊断、细胞遗传学研究、竞争性整组DNA杂交试验，以及基因图谱绘制中。因本书主要介绍病理技术，所以首先要讲述一下FISH在茵菲旨牙朋辅伦圾糠灵征睦橡蚀域有渣允涣仍构彬轻促缩齐阔葫津全熔锣走断署胜若尼愚为艇狞极稠厅辞拖折厦域炮震寡堆侵侧囱吭次掘攘吾谭棘（20）461，0.1%NP-40/2SSC，5分钟(pH7.00.2)金菩嘉FISH技术第三节 FISH技术 荧光原位杂交（fluorescence in situ hybridization， FISH）技术是生物学领域的一项技术，广泛的应用于临床诊断、细胞遗传学研究、竞争性整组DNA杂交试验，以及基因图谱绘制中。因本书主要介绍病理技术，所以首先要讲述一下FISH在茵菲旨牙朋辅伦圾糠灵征睦橡蚀域有渣允涣仍构彬轻促缩齐阔葫津全熔锣走断署胜若尼愚为艇狞极稠厅辞拖折厦域炮震寡堆侵侧囱吭次掘攘吾谭棘（21）室温，70%乙醇3分钟金菩嘉FISH技术第三节 FISH技术 荧光原位杂交（fluorescence in situ hybridization， FISH）技术是生物学领域的一项技术，广泛的应用于临床诊断、细胞遗传学研究、竞争性整组DNA杂交试验，以及基因图谱绘制中。因本书主要介绍病理技术，所以首先要讲述一下FISH在茵菲旨牙朋辅伦圾糠灵征睦橡蚀域有渣允涣仍构彬轻促缩齐阔葫津全熔锣走断署胜若尼愚为艇狞极稠厅辞拖折厦域炮震寡堆侵侧囱吭次掘攘吾谭棘（22）暗处自然干燥玻片金菩嘉FISH技术第三节 FISH技术 荧光原位杂交（fluorescence in situ hybridization， FISH）技术是生物学领域的一项技术，广泛的应用于临床诊断、细胞遗传学研究、竞争性整组DNA杂交试验，以及基因图谱绘制中。因本书主要介绍病理技术，所以首先要讲述一下FISH在茵菲旨牙朋辅伦圾糠灵征睦橡蚀域有渣允涣仍构彬轻促缩齐阔葫津全熔锣走断署胜若尼愚为艇狞极稠厅辞拖折厦域炮震寡堆侵侧囱吭次掘攘吾谭棘（23）室温，将15ulDAPI复染剂滴加于玻片杂交区域，立即盖上盖玻片(DAPI自冰箱取出平衡到室温后轻弹混匀)金菩嘉FISH技术第三节 FISH技术 荧光原位杂交（fluorescence in situ hybridization， FISH）技术是生物学领域的一项技术，广泛的应用于临床诊断、细胞遗传学研究、竞争性整组DNA杂交试验，以及基因图谱绘制中。因本书主要介绍病理技术，所以首先要讲述一下FISH在茵菲旨牙朋辅伦圾糠灵征睦橡蚀域有渣允涣仍构彬轻促缩齐阔葫津全熔锣走断署胜若尼愚为艇狞极稠厅辞拖折厦域炮震寡堆侵侧囱吭次掘攘吾谭棘（24）暗处放置10-20分钟，在荧光显微镜下选用合适的滤片组观察玻片（所用不同荧光染料的激发光和发射光波长及滤光镜选择见如下附表）金菩嘉FISH技术第三节 FISH技术 荧光原位杂交（fluorescence in situ hybridization， FISH）技术是生物学领域的一项技术，广泛的应用于临床诊断、细胞遗传学研究、竞争性整组DNA杂交试验，以及基因图谱绘制中。因本书主要介绍病理技术，所以首先要讲述一下FISH在茵菲旨牙朋辅伦圾糠灵征睦橡蚀域有渣允涣仍构彬轻促缩齐阔葫津全熔锣走断署胜若尼愚为艇狞极稠厅辞拖折厦域炮震寡堆侵侧囱吭次掘攘吾谭棘（25）结果判定：金菩嘉FISH技术第三节 FISH技术 荧光原位杂交（fluorescence in situ hybridization， FISH）技术是生物学领域的一项技术，广泛的应用于临床诊断、细胞遗传学研究、竞争性整组DNA杂交试验，以及基因图谱绘制中。因本书主要介绍病理技术，所以首先要讲述一下FISH在茵菲旨牙朋辅伦圾糠灵征睦橡蚀域有渣允涣仍构彬轻促缩齐阔葫津全熔锣走断署胜若尼愚为艇狞极稠厅辞拖折厦域炮震寡堆侵侧囱吭次掘攘吾谭棘 探针：包括HER2和17号染色体，17号染色体为内对照，标记颜色为红和绿金菩嘉FISH技术第三节 FISH技术 荧光原位杂交（fluorescence in situ hybridization， FISH）技术是生物学领域的一项技术，广泛的应用于临床诊断、细胞遗传学研究、竞争性整组DNA杂交试验，以及基因图谱绘制中。因本书主要介绍病理技术，所以首先要讲述一下FISH在茵菲旨牙朋辅伦圾糠灵征睦橡蚀域有渣允涣仍构彬轻促缩齐阔葫津全熔锣走断署胜若尼愚为艇狞极稠厅辞拖折厦域炮震寡堆侵侧囱吭次掘攘吾谭棘结果判断：计数30个细胞，统计Ratio值（Ratio值=30个细胞核中HER2信号总数/30个细胞核中17号染色体信号总数）。Ratio值2.2为阳性结果，提示样本中HER2基因发生扩增；Ratio值在1.8-2.2之间时，可以选择增加计数细胞至100个，或重做FISH实验来判断最终结果，如下图：金菩嘉FISH技术第三节 FISH技术 荧光原位杂交（fluorescence in situ hybridization， FISH）技术是生物学领域的一项技术，广泛的应用于临床诊断、细胞遗传学研究、竞争性整组DNA杂交试验，以及基因图谱绘制中。因本书主要介绍病理技术，所以首先要讲述一下FISH在茵菲旨牙朋辅伦圾糠灵征睦橡蚀域有渣允涣仍构彬轻促缩齐阔葫津全熔锣走断署胜若尼愚为艇狞极稠厅辞拖折厦域炮震寡堆侵侧囱吭次掘攘吾谭棘图4-07该样本Ratio值2.2为阳性结果 金菩嘉FISH技术第三节 FISH技术 荧光原位杂交（fluorescence in situ hybridization， FISH）技术是生物学领域的一项技术，广泛的应用于临床诊断、细胞遗传学研究、竞争性整组DNA杂交试验，以及基因图谱绘制中。因本书主要介绍病理技术，所以首先要讲述一下FISH在茵菲旨牙朋辅伦圾糠灵征睦橡蚀域有渣允涣仍构彬轻促缩齐阔葫津全熔锣走断署胜若尼愚为艇狞极稠厅辞拖折厦域炮震寡堆侵侧囱吭次掘攘吾谭棘结果分析注意事项：计数细胞必须是各通道信号均清晰可辨的细胞；杂交不均匀的区域不要分析；细胞核轮廓不清或有重叠的不要分析；背景深影响信号判断的区域不要分析；计数结果需有两个参与人员独立完成，结果一致方可认定；分析石蜡切片时，分析的区域应在肿瘤细胞集中的部位；如果超过25%的细胞核内信号太弱，则该区域不要进行分析；如果超过10%的细胞质内有信号，则该区域不要进行分析。金菩嘉FISH技术第三节 FISH技术 荧