不同产地白花蛇舌草中对香豆酸含量测定的快速方法.pdf

时问 二 个水平问对实验结果影响都是实验误差所致 煎煮 次数 c 是提取 L艺的主要影响冈素 由表2可选出最佳工 艺 为 A B C 从表 3的方 差分析结果 呵以得 知 A B C 三个 因素各水平对实验结 果均无 著性 差异 此 确定最 佳 I 艺为 A B C 即 加 l 4倍 壁的水 煎煮 3次 每次煎 3 0 rai n 为最优提取 岂 2 1 5 最佳提取 岂验证实验按 筛选出的最佳提取 1 二 艺 B C 在相同条件下进行 3 次平行验证实验 所得实验结果 详 见表 4 j验证实验结果一 1 的芍药苷含量 正交表 最好的结 果 5号实验 比较接 近 表明优选 出的提取工艺稳定可靠 表 4 最佳工艺验证结果 Ta b 4 Re s u l t s o f t h e e r i fie a t i o n o f t he b e s t t e c h n o l o g y 2 2 洗面奶 成型 艺的研究 2 2 1 中药 液的制备按 上面筛选 出的最佳提取工 艺来提 取药液 然后 浓缩提取液至 1 2 5 2 2 2 最佳乳化条件的研究经预试 乳化温度 载药量及 乳化剂对洗面奶的制备影 响较大 但考 虑到乳 化剂的用量 已 经较大 故在初步选出的洗面奶配方的基础上分别对温度和 载药 进行 因素试验 结果见表 5和表 6 表 5 乳 化温度单因素试验结果 Tab 5 Re s u l t s o f s i n g l e f a c t o r e x p er i me n t s o f e mu l s i f y i ng t e mp e r a t u r e 表 6 载药量单因素试验结果 Ta b 6 Re s u l t s o f s i n g l e f a c t o r e x p e r i me n t s o f d r u g l o a di n g 从表 5与表 6得 知 制 备洗 面奶 的最佳温度 为 8 0 8 5 q c 左右 最佳的载药量 为6 0 2 3 最佳乳化条件 的验证实验 按选出的制备洗 面奶的最 佳乳化 条件 进行 3次平 行实 验 按 Q B T 1 6 4 5 2 0 0 4标准 对洗面奶 进行感 观和理 化指 标方面的检查 结果均符合规定 详见表7 表 7 最佳乳化条件 的验证实验结果 Ta b 7 Re s u l t s o f t h e v e r i fi c a t i o n o f t h e o p t i mu m e mu l s i f y i n g c o n d i t i o n 3 讨论 本消痘洗面奶制剂工艺稳定 合理可行 为了使所得产品洗面奶的外观色泽较浅些 曾尝试用 活 炭对中药煎出液进行脱色 但结果发现 脱色后药液中的芍 药苷含量 明显减少 表明活性炭在吸附色素的同时 也 吸附 了药液中的有效成分 因此 中药液的脱色问题有待进一步 研究 REFERENCES I 1 Y A N G L Q I A N J C H E N Y Y R e s e a r c h o n t r e a t i n g a e n e v u l g a r i s b y Q i n g F e i Y u Z h u o Wa n J C h i n J P r a c t C h i n Mo d e r n m e d 中华实用 中西医杂志 2 0 0 4 1 7 4 3 1 8 9 3 1 9 1 2 S H U T A d v a n c e o f m o d e r n s t u d y o n a e n e v u l g a r i s J M o d T r a d i t C h i n Me d 现代巾医药 2 0 0 6 2 6 1 5 6 5 7 3 G u a n g x i z h u a n g mi n o r i ty A u t o n o m o u s r e g i o n B o a r d o f H e a l t h S e l e c t e d Ma t e r i a M e d ic a o f G u n a g x i 广 西 本 草 选 修 M Na n n i n g Gu a n g x i P e o p l e P r e s s 1 9 7 4 9 4 0 4 C h P 2 0 0 5 V o l I 中国药 典 2 0 0 5年 版 一 部 S 2 0 0 5 1 0 9 收稿 日期 2 0 0 7 0 7 1 8 不同产地 白花蛇舌草 中对香豆酸含量测定的快速方法 唐旭利 刘静 李国强 邱培菊 钟惠民 1 中 国海洋大 学 山 东青岛2 6 6 0 0 3 2青岛 科技大学 山东青岛2 6 6 0 4 2 摘要 目的 建立实用的不同产地白花蛇舌草中对香豆酸的高效液相 色谱含量测定方法 方法 采用 A g i l e n t E c l i p s e D B C l 8 2 5 0 n l i n 4 6 n u n 5 Ix m 色谱柱 乙腈 0 1 磷 酸水溶液梯度洗脱 流速 1 0 m L ra i n 检洳 1 波长 2 3 0 n m 柱温 3 0 进 样量 2 0 Ix L 测定 了6批 不同来源的白花 蛇舌草 药材 结果线性 范 围4 64 g m L r 0 9 9 9 8 平均 回收率 n 6 为 基金项 目 8 6 3科技 汁划 2 0 0 4 A A 6 2 1 0 2 0 和青 岛市自然科学基金 0 5 2 J C 5 6 资助 作者简 介 唐旭利 女 高级 程师 通讯作者 李国强 男 教授 博士生导师T e l 0 5 3 2 5 2 0 3 2 3 2 3 E m a i l l ig u o q i a n g o u e e d u e n 中国现代应用药学杂志 2 0 0 8年 l 0月第 2 5卷第 5期 9 6 8 6 H S D 0 2 2 结论 本法简便快速 重现性良好 可作为白花蛇舌草药材质量控制的有效方法 关键词 白花蛇舌草 对香豆酸 高效液相 色谱法 中图分类号 R 9 1 7 1 0 1 R 9 1 7 7 9 9 R 9 2 7 2 文献标识码 B 文章编号 1 0 0 7 7 6 9 3 2 0 0 8 0 5 0 4 0 8 03 A R a p i d Me t h o d f o r t h e Qu a n t i t a t i v e De t e r mi n a t i o n o f P c o u ma r i c A c i d i n He d y o t i s d if f u s a f r o m D i ff e r e n t So u r c e s TANG Xu l i L I U J i n g L I Gu o q i a n g Q I U P e i j u Z H O N G H u i m i n 1 O c e a n U n i v e r s i t y o f C h i n a Q i n g d a 2 6 6 0 0 3 C h i n a 2 Q i n g d a o U n i v e r s i t o f S c i e n c e a n d T e c h n o l o g Q i n g d a o 2 6 6 0 4 2 C h i n a A B S T R AC T OB J E C T I V E T o e s t a b l i s h a p r a c t i c a l H P L C m e t h o d f o r t h e d e t e r mi n a t i o n o f P c o u m a r i c a c i d i n H e d y o t i s d if f a Wi l l d ME T HOD S T h e c h r o m a t o g r a p h i c c o n d i t i o n s i n c l u d e d A g i l e n t E c l i p s e D B C l8 2 5 0 m m 4 6 m m 5 m c o l u m n m o b i l e p h a s e o f a c e t o n i t r i l e 0 1 p h o s p h a t e s o l u t i o n c o l u mn t e mp e r a t u r e o f 3 0 fl o w r a t e o f 1 0 mL mi n w a v e l e n g t h o f 2 3 0 n m a n d i n j e c t v o l m n e o f 2 0 L R E S UL T S T h e l i n e a r r a n g e w a s 4 6 4 g m L r 0 9 9 9 8 t h e a v e r a g e r e c o v e r y n 6 w a s 9 6 8 6 a n d t h e r e l a t i v e s t a n d a r d d e v i a t i o n RS D w a s 0 2 2 CoNCLUS 1 0N T h e me t h o d i s r a p i d a n d s i mp l e wi t h g o o d p r e c i s i o n a n d r e p r o d u c i b i l i t y I t c a n b e u s e d fo r q u a l i t y c o n t r o l o f H e d y o t i s d if f u s a Wi l l d K EY WoR DS e d y o t i s d if f u s a Wi l l d P e o u m a r i c a c i d H P L C 白花 蛇舌 草 为茜 草科 R u b i a c e a e 植 物 白 花 蛇 舌 草 H e d y o t i s d if f u s a Wi l l d 的干燥 或新 鲜全 草 别 名蛇 舌草 蛇 针草 二叶律 白花十字草 龙舌草 鹤舌草等 一般生长于亚 热带地p t 我国主要分 布在广东 广西 云南 福建 江苏 浙 江等省 具有清热解毒 活血化瘀 利湿通淋之功效 民间和 临床常用于治疗肿瘤 黄疸忡肝炎 肠炎 肺炎等疾病 白 花蛇舌草主要含蒽醌 黄酮 三萜 环烯醚 苷萜 甾醇等化学 成分 一般认 为其有机酸成分 齐墩果酸 熊果酸和对香豆 酸为其主要有效成分 文献关于 白花蛇舌 草药材和 制剂质 量控制研究 多选择 齐墩果 酸和熊果 酸为指标成 分 而利用 对香豆酸做 为含量测定指标 的报道相对较少 且 流动相 中多 采用有机盐调 节峰形 易 造成仪器故 障 为了建立 方便 快捷实用 的对香豆酸 含量测定方 法 笔者运用 A g i l e n t 1 1 0 0 高效液相 色谱 仪 采用 乙腈一 磷 酸溶 液体 系 优化 了色谱 条 件 指标成分对 香豆酸 出峰时问短 分离度 好 本方法方 便 实用 准确 快速 可作为药材 白花蛇舌草水溶性成分 的质量 控制方法 1 仪器与试药 A g i l e n t l 高效液 相色谱仪 配备 G 1 3 7 9 A脱气 机 G 1 3 1 1 A 四 元 泵 G I 3 1 3 A 自 动 进 样 仪 G 1 3 1 6 A 柱 温 箱 G 1 3 1 5 B D A D B S 1 2 4 S电 子 天 平 德 国 H e i d o l p h旋 转 蒸 发仪 乙腈 色 谱 纯 F i s h e r 甲 醇 色 谱 纯 B u r d i c k J a c k s o n 磷酸 色谱纯 天津科密欧化学开发中心 水 娃 哈哈纯净水 对香豆酸对照 品 P c o u m a r i c a c i d 购 自S i g m a 公 司 批号 0 6 5 KI 2 9 8 纯度 9 8 O 6批白花蛇舌草药材分别购自于广东 江苏 浙江等不同 省区 经山东中医药大学 中药鉴定室周风琴教授鉴定均为正 品 白花蛇舌草 H e d y o t is d iffu s a Wi l l d 中国现代应用药学杂志 2 0 0 8年 l O月第 2 5卷第 5期 2 方法与结果 2 1 色谱 条件 A g i l e n t Z o r b a x X D B C l 8 2 5 0 mm 4 6 m m 5 m 色谱 柱 柱温 3 0 流速 1 0 m L mi n 检测波长 2 3 0 n m 进 样 量2 0 流动相为乙腈 1 磷酸溶液梯度洗脱 洗脱程序 见表 1 表 l 乙腈J o 1 磷酸水梯度洗脱程序 Tab 1 Gr a d i e n t mo de o f Ac e t o n i t r i l e 0 1 p ho s p h a t e s o l u t i o n 2 2 提取工艺优化 采用均匀设计 法 以对香豆酸 峰面积 干浸膏得 率为指 标 考察 了药材 的提取溶剂 料 液 比 提取温度 提取时问等 因素对提取工艺的影 响 确定 白花蛇舌 草优化 的提取工艺 条件为 水 为提取溶剂 料液 比 l 1 0 0 提取温 度 9 5 提取 时间 4 h 2 3 供试品溶液的制备 精密称取 0 5 g粉碎过 4 0目筛的白花蛇舌草药材 置于 1 0 0 m L圆底烧瓶中 加水 5 0 m L 在 9 5 下回流提取 4 h 过滤 浓 缩 加水定容至 2 5 m L 摇匀 过 0 4 5岬 微孔滤膜 备用 2 4 对照品溶 液的制备 取经五氧化二磷真空干燥 2 4 h的对香豆酸 1 0 m g 精密 称定 置 5 0 m L量瓶 中 加入 甲醇溶解 定容至刻度 配成 0 2 m g m L 的溶液 过0 4 5 m微孔滤膜 备用 2 5 标准曲线 的制备 分别精密吸取上述浓度为 0 2 m g mL 的对 照品溶液 C h i n J MAP 2 0 08 O c t o b e r Vo 1 2 5 No 5 4 0 9 0 5 2 0 4 0 6 0 8 0 m L 置于 2 5 mL量 瓶 中 甲醇稀 释至 刻度 配置成 浓度 为 4 1 6 3 2 4 8 6 4 g mL 系列 浓度 溶 液 过0 4 5 m微孔滤膜 分别进样2 O Ix L 以对照品溶液质 量浓度 C g m L 为横坐标 峰面积 A为纵坐标 绘 制标 准曲线 得回归方程 A 2 1 6 1 9 C 1 6 6 5 2 r 0 9 9 9 8 表 明对香豆酸在 4 6 4 Ix g mL 内 呈 良好线性关系 2 6 疆复进样精密度试验 将对香豆素对照品溶液 8 Ix g mL 连续进样6次 每 次2 0 L 其峰面积的 R S D值为 1 2 表明仪器的精密度良 好 2 7 稳定性试验 取新制备的同 一 份供试品溶液 分别在放置 0 1 2 4 8 l 2 2 4 h时进样分析 计算 的对 香豆素的相对 峰面积 R S D为 0 8 表明供试 品溶液在室温下放置 2 4 h 稳定 2 8 回收率试验 分别精密称定粉碎过 4 0目筛的 6批 白花蛇舌草药材 各 0 5 g 加 入精确质量 的对 香豆酸对照 品 按 2 3 项方法 制 备供试品溶液 在 2 1 项色谱条件下进样测定 对香 豆酸平 均回收率为 9 6 8 6 R S D 0 2 2 n 6 2 9 含量测定 取6份不同来源的白花蛇舌草药材 按 2 3 项方法制 备供试品溶液 在 2 1 项色谱 条件下进样测定 对 香豆 酸 色谱峰与相邻色谱峰之间分离度大于 2 0 以对香豆酸计 理 论塔板数不小于 1 0 0 0 0 样品溶液及对照品的色谱图见图 l 结果 见表 2 廿 0 1 0 2 0 3 0 0 1 0 2 0 3 0 t ra i n t m i n 图 1 样 品溶液 A一 6号样 和对 照品 B一对香豆 酸 的色 谱 图 F i g 1 C h r o ma t o g r a ms o f s a mp l e A N o 6 a n d s t a n d a r d B P c o n ma r i e a c i d 表 2不同来源 白花蛇舌草 药材 中对香豆酸含量测定结果 Ta b 2 C o n t e n t s o f P c o u ma r i c a c i d i n d i f f e r e n t He d v o t i s d i fl u s a W i l l d s a mp l e s 41 0 C h i n J MAP 2 0 08 Oc t o b e r Vo l 2 5 No 5 3 讨论 3 1 流动相的选择 对香豆酸属酚酸类成分 在 H P L C分析中色谱峰常形成 脱尾 影响含量测定精度 虽有文献报道 采用 N H A c改 善 峰形 但在实际运 用中 流动相 中的盐类成分 易造成仪 器 腐蚀损坏 采用磷酸抑制脱尾 可收到同样效果 并对仪器 损 害较小 利于长时间分析测 定 3 2 提取工艺 药材的提取工艺是客观反映所测定成分含量的重要步 骤之一 与正交设计相比 均匀设计方法在多因素 多水平 工艺考察中更具 有优越性 均匀设计 的实验点 在实验范 围 内仅要求充分的 均匀分散 舍 弃 r实验点 的整齐性 同时 可照顾到试 验结 果评判分 析的多指标 权重 因此 均匀设计 法更适合精准的工 艺条件优化研究 3 3 含量测定 不 同来源白花蛇舌草 中对香豆酸的含量测定结果表明 商 品白花蛇舌 草药材 中对 香豆酸含量 差异较大 以广 东 浙 江含量较高 与道地野生药材的自然分布规律一致 REFERENCES 1 H U A N G H L L U O G M L I U x W e t u 1 P r o g r e s s i n r e s e a r c h o f He d y o t i s D i f f u s a Wi l l d J Wo r l d S c i T e c h n o l M o d T r a d i t C h i n Me d 世界科学技 术 一中医药现代化 2 0 0 3 5 6 3 7 3 8 2 C U I J S H I S S WAN G S C e l a 1 R e c e n t d e v e l o p m e n t o f s t u d i e s o n t h e c h e mi c a l c o n s t i t u e n t s a n d p h a r ma c o l o g i c a l f u n c t i o n s o f O l d e n l a n d i a D if f u s a Wi l d J S h a r Ig h a i J T r a d i t C h i n Me d 上 海中医药杂志 2 0 0 5 3 9 7 5 7 5 9 3 L U P D A I Q H S u m ma r i z a t i o n o n t h e c h e mi c a l c o n s t i t u e n t s o f O l d e n l a n d i a D i f f u s a Wi l l d J J B e ij i n g U n i v T e c h n o l 北京工 业大学学报 2 0 0 0 2 6 3 6 8 7 2 4 Z H AN G C H G U O X j L I F e t a 1 H P L C d e t e r m i n a t i o n o f t h e c o n t e n t s o f o l e an o l i c a c i d a n d u r s o l i e a c i d i n He d y o t i s d i ff u s a Wi l l d J J S h e n y a n g P h a rm U n i v 沈 阳药 科 大 学 学报 2 0 0 4 2 1 5 3 5 8 3 6 0 5 T AN N H WA N G S M Y A N G Y B e t a 1 A n t i e a n c e r a c t i v i t y a n d p ri n c i p l e s o f H e d y o t i s D i ff u s a J N a t P r o d R e s D e