EF2035-G 医院消毒卫生标准实用检验方法.doc

医院消毒卫生标准实用检验方法天津医科大学总医院 周 斌 胡志东 李质敏 田 彬关键词 消毒卫生标准 中华人民共和国国家标准（GB） 院内感染 为了更好地完成医疗工作，防止院内感染，各医院积极加强医院消毒卫生标准的实施。把过去由防疫部门定期检查的医院消毒工作改为细菌室的实时监控，主要包括环境空气、物体表面、医护人员手和消毒剂的检查。但GB159821995的采样、检验方法除环境空气条目外都是参照GB7918.287即化妆品微生物检验标准提出的，且如果按照GB7918.287制订的琼脂稀释法操作，临床细菌室的医院消毒卫生工作量过大，正常检验工作将无法开展。为此，我室经过大量实践提出既符合国家消毒卫生标准又简单实用的检验方法，分别介绍如下： 1、环境空气 1.1 环境空气消毒卫生标准，见表1。表1. 环境空气消毒卫生标准 环境类别 范 围 空气（CFU/m3） 类 普通手术室、产房、婴儿室、早产儿室、普通保护性隔离室、供应室无菌区、烧伤病房、重症监护病房 200 类 儿科病房、妇产科检查室、注射室、换药室、治疗室、供应室清洁区、急诊室、化验室、各类普通病房和房间 500 1.2 采样、检验方法。 1.2.1 室内面积30m2，设一条对角线上取3点，即中心一点、两端各距墙1m处取一点；室内面积30m2取东、西、南、北、中5点，其中东、西、南、北、中点均距墙1m。 1.2.2 必须使用90mm直径的平皿在采样点距离地面高度为80150cm处暴露5min。 1.2.3 采样后6小时内必须送检，如样本保存于04摄氏度条件时，送检时间不得超过24小时。 1.2.4 细菌室将平皿置37摄氏度，24小时培养后得出平皿的平均菌落数，代入计算公式。 1.3 营养琼脂的配制 1.3.1 成分：蛋白胨10g、牛肉粉3g、 氯化钠5g、 琼脂15g 、蒸馏水1000ml。 1.3.2 制法：将除琼脂以外的各成分溶解于蒸馏水内，加入15%氢氧化钠溶液约1ml，校正pH值至7.27.4。加入琼脂，加热煮沸，使琼脂溶化。分装烧瓶，121高压灭菌15min。 1.4 结果计算 1.4.1 结果计算公式 空气细菌菌落总数（CFU/m3）=50,000N/AT 式中: A平皿面积，cm2； T平皿暴露时间，min； N平皿平均菌落数，CFU/平皿。 1.4.2 平均菌落数与结果对应，见表2 表2.平均菌落数与结果对应表 平均菌落数（CFU/平皿） 1 2 3 4 应报告结果（CFU/m3空气） 157 314 471 500 2 物体表面。 2.1 物体表面卫生标准，见表3 表3 物体表面卫生标准 环境类别 范 围 CFU/cm2 类 普通手术室、产房、婴儿室、早产儿室、普通保护性隔离室、供应室无菌区、烧伤病房、重症监护病房 5 类 儿科病房、妇产科检查室、注射室、换药室、治疗室、供应室清洁区、急诊室、化验室、各类普通病房和房间 10 类 传染病科及病房 15 2.2 采样、检验方法。 2.2.1 选择消毒处理后4小时内进行采样。 2.2.2 用55 cm2的标准灭菌规格板，放在被检物体表面，用浸有无菌生理盐水的棉拭子一支，在规格板内横竖往返各涂抹5次，并随之转动棉拭子，剪去手接触部分，将棉拭子放入装有5mL无菌生理盐水的试管中送检。小型物体则采用棉拭子直接涂抹物体的方法采样。 2.2.3 细菌室反复震荡送检的试管后用微量移液器取0.1mL样本，用L棒在90mm琼脂平皿上均匀涂布接种,37摄氏度培养,48小时观察结果。 2.3 营养琼脂的配制，见1.3 2.4 结果计算 2.4.1 结果计算公式 物体表面细菌菌落总数（CFU/cm2）=平皿上菌落的平均数采样液稀释倍数/采样面积（cm2） 式中: 采样液稀释倍数50倍；采样面积25cm2 2.4.2 平均菌落数与结果对应，见表4 表4 平均菌落数与结果对应表 平皿上菌落平均数（CFU/平皿） 1 2 3 4 5 6 7 8 物体表面菌落总数（CFU/cm2 ） 2 4 6 8 10 12 14 15 3 医护人员手。 3.1 医护人员手卫生标准，同表3 3.2 采样、检验方法 3.2.1 在接触患者、从事医疗活动前进行采样。 3.2.2 被检人五指并拢,将浸有无菌生理盐水的棉拭子一支在一只手指曲面从指根到指端来回涂擦两次(涂擦面积约30 cm2)，并随之转动棉拭子，剪去手接触部分，将棉拭子放入装有5mL无菌生理盐水的试管中送检。 3.2.3 细菌室反复震荡送检的试管后用微量移液器取0.1mL样本，用L棒在90mm琼脂平皿上均匀涂布接种,37摄氏度培养,48小时观察结果。 3.3 营养琼脂的配制，见1.3 3.4 结果计算 3.4.1计算公式 手细菌菌落总数（CFU/cm2）=平皿上菌落的平均数采样液稀释倍数/30 式中: 采样液稀释倍数50倍；采样面积30cm2 3.4.2 平均菌落数与结果对应，见表5 表5 平均菌落数与结果对应表 CFU/平皿 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 CFU/ cm2 1.7 3.3 5.0 6.7 8.3 10.0 11.7 13.3 15 15 4 消毒剂 4.1 消毒剂卫生标准100 CFU/mL 4.2 采样、检验方法 4.2.1 采取更换前使用中的消毒剂，无菌条件下吸取1mL，加入1mL稀释液中混匀，立即送检。 4.2.2 细菌室反复震荡送检的试管后用微量移液器取0.1mL样本，用L棒在90mm琼脂平皿上均匀涂布接种,37摄氏度培养,48小时观察结果。 4.3 营养琼脂的配制，见1.3 4.4 稀释液基质的配制 4.4.1 成分：蛋白胨10g 牛肉粉3g 氯化钠5g 蒸馏水1000ml 4.4.2 制法：将上述成分溶解于蒸馏水内，校正pH值为7.4，分装烧瓶，121摄氏度高压灭菌15min。 4.5 消毒剂与稀释液对照，见表6 表6 消毒剂与稀释液对照表 消 毒 剂 类 型 稀 释 液 成 分 醇、酚类 稀释液基质 含氯、含碘、过氧化物类 稀释液基质+0.1%硫代硫酸钠 洗必泰、季胺盐类 稀释液基质+3%（W/V）吐温80+0.3%卵磷脂 醛类 稀释液基质+0.3%甘氨酸 含有表面活性剂 稀释液基质+3%（W/V）吐温80 4.6