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文档简介
胃癌医学检验论文 1材料与方法 1.1研究对象 186例非贲门胃癌患者,来自中山大学附属医院住院及门诊患者,经临床、胃镜及病理诊断证实。男81例,女105例,平均发病年龄(55.1914.05)岁。随机选取298例来自武汉大学中南医院的健康体检者,其中男198例,女100例,平均年龄(39.2014.12)岁。以上个体均为无血缘关系的广东汉族人,既往无糖尿病、系统性红斑狼疮、风湿性关节炎、炎症性肠病等自身免疫性疾病史。 1.2研究方法 1.2.1Hp的检测 采用ELISA检测Hp感染。 1.2.2基因组DNA提取 抽取静脉血4ml,常规酚/氯仿抽提基因组DNA。 1.2.3PCR扩增与限制性片段长度多态性分析(PCR睷FLP) 1.2.3.1TLR4Asp299Gly,Thr399Ile基因多态性检测 将PCR产物用限制性内切酶酶切后以8%的非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分离、GV1染色。 1.2.3.2CD14C159T基因多态性检测 引物设计及反应条件参照文献,引物为F:5TGCCAGGAGACACAGAACCC3,R:5TGTCATTCAGTTCCCTCCTC3,PCR产物用限制性内切酶酶切后以8%的非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分离、GV1染色。 1.2.4统计学分析 病例组和对照组人群Hardy瞁einberg平衡采用2拟和优度检验,等位基因及基因型频率采用直接计数法计算,2检验差异的显著性水平(检验水准为=0.05),相对风险度用OR(Oddsratio)值及95%可信区间(95%CI)来评价。 2结果与讨论 我们的研究中,正常人的Hp感染率是61.3%,通过对湖北汉族人群Hp感染的检测,发现非贲门胃癌组Hp感染率显著高于对照组(P0.0001,OR=7.573,95%CI:3.58515.995)。Correa等认为,胃黏膜在有害因素作用下产生损伤,黏膜细胞再分裂、增生以修复损伤的过程中可启动细胞凋亡,以清除无法修复的具有遗传缺陷的细胞,但有些胃黏膜细胞可因某种原因逃避凋亡,细胞寿命得以延长,增加其进一步受损的机会,胃黏膜经肠化、异型增生逐渐向恶性细胞转化。虽然Hp具体致癌机制至今仍未清楚,但Correa提出的以炎症为触发因素的胃癌发生机制理论受到人们的重视,也肯定了炎症在Hp胃癌的发生中的作用。活体内,胃上皮细胞可以表达TLR,故很有可能TLRs表达于胃上皮细胞并与Hp相互作用,从而调节致炎细胞因子和趋化因子的生成,引起胃黏膜的炎症。进而在Hp感染性活动性胃炎的背景下,通过胃上皮的前期病损、肠化生和不典型增生逐渐发展,导致了胃癌的形成。TLR4/CD14基因突变可使机体的免疫系统失去正常处理胃腔HpLPS等病原分子的能力,进而使胃黏膜在其长期刺激下产生感染、炎症乃至癌变。TLR4基因突变可导致对LPS无反应,或LPS信号途径的抑制。野生型TLR4的表达增强可使LPS信号传导增强。 通过对TLR4基因Asp299Gly和Thr399Ile多态性的检测,未发现其896bp处AG和1196bp处CT的突变,提示此2个等位基因突变在中国湖北汉族人群中少见,说明TLR4基因不是胃癌的易感基因。就此我们对中国汉族人与日本人及德国人的TLR4Asp299Gly和Thr399Ile基因多态性分布进行了比较,中国汉族人与日本人的分布频率及基因型频率的分布无明显差异性,均未检测到突变体,但与德国人(9%)的突变频率存在显著差异性(P0.0001)。欧洲人和亚洲人在该位点等位基因频率和基因型频率分布的不同,将有助于阐明不同种族和不同地区人群在疾病发生机制上的差异。CD14基因位于5号染色体长臂(5q2331),CD14启动子区-159位点存在单个碱基的替换,该等位基因位于Sp1转录因子结合位点附近,主要影响CD14的表达,且TT纯合子患者单核细胞表面CD14的表达密度。有研究认为在-159位点的T/C的突变可能导致CD14启动子的活化增强,促进CD14基因的转录,使单核细胞高表达CD14,且CD14可以调节LPS诱导的IL1及TNF的分泌,从而使炎症应答增强。因此,CD14159基因多态性可能是导致个体在对Hp感染的免疫应答中不同的CD14表达水平及免疫应答程度的基因方面的因素。为此我们对该位点的多态性进行了检测,发现TT基因型在非贲门胃癌患者中(45.35%)高于正常人群(29.2%),二者存在显著差异,T等位基因亦显著高于对照组(P=0.0078)。当我们按照Hp的感染情况分组后,我们发现非贲门胃癌Hp+组TT基因型亦高于对照组Hp+组。我们的结果表明CD
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