新面膜论文.docx

玉容美白面膜的初步研制摘要：中药用于美白和延缓皮肤衰老具有悠久的历史。本文以白芨、白茯苓 、白扁豆、白术、白蒺藜、白芷、黄芪、金银花、连翘、冰片为基础，提取其中的有效成分，提高其有效成分的利用率，通过正交实验确定提取工艺，并且通过抗皮肤衰老试验和测定酪氨酸酶活性确定其功效。关键词：有效成分、提取工艺、抗衰老、酪氨酸酶活性“一白遮百丑”这话虽然有些夸张，但不难看出，在中国传统的审美观中，女子只要肤色白皙，就达到了美的一半，其他缺陷或多或少就会被人们忽略。目前，在崇尚自然、回归自然的要求下，从天然产物中选择一种高效、无毒的美白产品意义重大。该美白面膜配方源于慈禧光绪医方选议中的“玉容散”，其处方为：白芨 20g白茯苓15g白扁豆15g白术10g白蒺藜10g白芷15g黄芪15g金银花10g 连翘10g 冰片3g。主要功效为美白消斑，改善肤质，延缓衰老。此外还具有祛痘抗炎的作用。本方中白芨、白茯苓 、白扁豆、白术、白芷、黄芪中的多糖成分，白蒺藜中的多种黄酮和皂苷类化合物、金银花中的黄酮类成分均具有较好的抗氧化活性。此外尚靖等报道了本方中含有的白术、白芨、白茯苓、白蒺藜对酪氨酸酶有抑制作用。本草品汇精要中记载了白茯苓的去黑白面方“白茯苓为末，合蜜和，敷面疗面疮及产妇如雀卵黑疱”。本草纲目记载白蒺藜，“洗面黑，祛斑洗瘢疮”。白蒺藜提取物含多种黄酮和皂苷类化合物。具有较强的抗氧化性。白蒺藜对酪氨酸酶和黑素细胞具有双向调节作用。对黑素细胞和酪氨酸酶具有低浓度抑制，高浓度激活的作用。白芷：向来就被视为美容要药，我国最早的药学专著神农本草经中就曾记载，白芷“润泽颜色可作面脂”本草纲目记载:白芷，色白，味辛行手阳明胃经，性温气厚，行足阳明，芳香上达，人手太阳肺经。主头、目、眉、齿诸病，主漏、带、痈疽诸病。故白芷可去头面之风，除皮肤燥痒之痹，可以起到芳香开窍、清热化浊消肿止痒之功效。其对美白祛斑有显著的作用，并可改善人体微循环，促进皮肤新陈代谢，延缓皮肤衰老，还能消除色素在组织中过度堆积，去除面部色斑。黄芪能对抗自由基损伤和脂质过氧化作用，增强细胞的生命力和抵抗力，这些都与抗衰老有密切关系。其具有排毒生肌，抗氧化、清除自由基、维持皮肤的正常组织形态等功能，因而可达到保养皮肤、抵抗衰老的作用。本草纲目中指出:“金银花主治寒热身肿，解毒，久服轻身、延年、益寿。金银花中总黄酮有作为天然抗氧化剂的能力。此外，金银花的化学成分研究表明，除黄酮类具有抗氧化作用外，其含有机酸类、三萜皂昔类和挥发油等具有抑菌、抗病毒、抗炎、解热的功效。现代药理研究证明，连翘对病原微生物有抑制作用，同时具有抗细菌、真菌、抗病毒的作用，能杀灭钩端螺旋体菌。有解热、抗炎作、抗氧化作用。而冰片在本方中主要其促进透皮吸收的作用。实验部分1. 提取工艺的研究在本处方起作用的主要成分除了多糖以外，还有黄酮类和皂苷类，在提取工艺方面我们采用先水提提取多糖，然后再进行醇提提取其他有效成分。并通过测定多糖跟总皂苷的含量来对提取工艺进行筛选。实验结果见表1、表2。多糖含量测定方法：（1）蒽酮试剂的制备：称取蒽酮0.2g，溶于100ml80%硫酸中，冷至室温备用，此液应当天配制。（2）对照品溶液的制备：精密称取在五氧化二磷减压干燥器中干燥12h的葡萄糖对照品10.3mg置100量瓶中，加水溶解后定容至刻度，摇匀，制得对照品溶液。（3）供试品溶液的制备：取20ml水提取液，加入95%的乙醇至醇的浓度到70%，静置12h后，以3000rpm的转速离心10min,弃去上清液，残渣用水溶解后定容至100ml，作为储备液，在取储备液1ml加水定容至100ml。（4）含量测定：精密吸取葡萄糖对照品（0.103mg/ml）0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2ml以及制备好的供试品溶液1.0ml于10ml具塞试管中，加水定容至2ml，再加入新鲜配制的蒽酮试液6ml，摇匀后至沸水浴中准确反应10min，取出后至冰水浴中冷却15min,以相应的溶液为空白，在625nm处测定吸光度。表1 水提正交实验结果编号 溶剂量/倍 提取次数/次 提取时间/ h 药材中粗多糖的含量（mg/g） 1 8 1 1.5 88.4 2 8 2 2 176.0 3 8 3 3 97.0 4 10 1 2 89.0 5 10 2 3 168.5 6 10 3 1.5 146.2 7 12 1 3 87.7 8 12 2 1.5 77.5 9 12 3 2 133.4 均值1 120.5 88.4 104.0均值2 134.6 140.7 132.8均值3 99.5 125.5 117.7极差 35.1 52.3 28.8根据正交实验结果，水提工艺确定为10倍量水提取2次，每次2h。总皂苷含量测定方法：（1）对照品溶液的制备：精密称取在五氧化二磷减压干燥12h的黄芪甲苷对照品10.0mg,置10ml容量瓶中，加甲醇溶解，再以甲醇稀释至刻度，摇匀即得。（2）样品溶液的制备：取乙醇提取物20ml,加入水饱和的正丁醇萃取5次，,将萃取物浓缩至干后转移至50ml容量瓶中，加入甲醇溶解，在加入甲醇稀释至刻度，摇匀，作为储备液，再去1ml至25ml容量瓶中，加入甲醇至刻度。摇匀。（3）含量测定：精密吸取黄芪甲苷对照品（1mg/ml）0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2ml以及0.2ml样品溶液置10ml具塞试管中，水浴挥干，加入5%香草醛-冰醋酸溶液0.2ml和高氯酸0.8ml，密塞摇匀，水浴65加热15min，取出，冰水冷却5min，准确加入冰醋酸5ml，摇匀。以相应的溶液为空白，在567nm下测定吸光度。表2 醇提正交实验结果编号乙醇浓度/%溶剂量/倍提取次数/次提取时间 /h药材中总皂苷的含量（mg/g）1234567896565657575758585858101281012810121232313121.52331.52231.58.1014.336.6217.4320.313.8918.2113.033.03均值1均值2均值3极差9.6813.8811.424.214.5815.894.5111.388.3411.6015.056.7110.4812.1412.361.88根据正交实验结果，醇提工艺确定为10倍量75%乙醇提取2次，每次3h。2. 活性试验部分2.1抗皮肤衰老试验试验方法：选取小鼠24只，于屏障系统下适应7天。适应期结束后随机分为3组：空白对照组，模型组，给药组。造模，模型组和给药组腹腔注射半乳糖，120mg/kg。造模45天，造模第31天开始给药. 给药前24h将小鼠背部皮肤脱毛，给药剂量为1g/kg，将提取的有效成分涂抹于小鼠背部脱毛区，连续给药15天。末次给药后1h，处死小鼠，取小鼠背部皮肤，冷冻保存，拟做皮肤组织匀浆。取背部脱毛后的皮肤组织块50mg左右，经预冷生理盐水漂洗，除去皮下脂肪和其他结缔组织，滤纸拭干，称重，眼科剪剪碎组织块后倒入匀浆管中，量取该组织块9倍重量预冷生理盐水，先取少量倒入装有组织块内切式匀浆器中，约匀浆15分钟(在冰水中进行)，然后将余下的生理盐水加入，制成1O的组织匀浆。将10%组织匀浆稀释成1%组织匀浆进行SOD与MDA活力测定。结果见表3。表3 抗氧化试验结果的比较(xs, n=8)组别 SOD活力（U/mgprot）MDA含量（nmol/mgprot）空白组288.791.91.4600.095模型组 147.568.2# 1.8520.093#高剂量组 345.8128.1* 1.3300.164*以上数据结果表明，模型组与空白组相比，SOD活力与MDA含量均存在显著性差异，P0.05。说明造模成功。在给药后，SOD活力明显提高，与模型对照组相比存在显著性差异，P0.05。MDA含量明显下降，与模型组相比较存在显著性差异，P0.05说明提取的有效成分具有抗氧化的功效。2.2抑制酪氨酸酶活性方法：在pH6.8磷酸缓冲液中，用酪氨酸酶催化多巴变成多巴醌，有肾上腺素红色，利用分光光度计在475nm处的特定吸收测定生成多巴醌时的吸光度。精确反应10min，总反应量为5ml，以A/min计算活力，1活力单位(U)=0.001A/min。将提取物配成含原生药0.2g/ml的溶液，取上清液进行测定。多巴浓:0.0507mol/L;酪氨酸酶浓度:0.02mg/ml。结果见表4。 表4 对酪氨酸酶的影响药物多巴（ml）药量（mg/ml）酶活力（U）s抑制率（%）空白对照组0.5PBS22.80.9给药组0.5207.10.268.5以上数据结果表明，提取的有效成分能显著的抑制酪氨酸酶的活性。讨论皮肤衰老是机体衰老的一个重要组成部分，皮肤衰老不仅有损于美容，且与许多皮肤病如脂溢性角化、日光性角化、基底细胞癌、鳞状细胞癌的发生也有着病因学的关系。因此，预防和延缓皮肤衰老已成为生命科学研究的热点之一。皮肤衰老的特征是失去弹性和柔软性，出现皱纹、干燥角化、色素过量沉积(老年斑)等。关于皮肤衰老学说有多种。自由基学说认为，皮肤老年斑的形成是由于体内自由基的作用，引起脂质过氧化，脂质过氧化的最终产物是丙二醛(MDA)，它与体内的一些生物大分子交联而形成Schif碱，即脂褐质(LF)，LF难溶于水，不易被排除，大量堆积于皮肤细胞内出现黄褐色老年斑。随着年龄增加，体内如SOD等清除自由基能力下降，自由基大量增加可引起胶原蛋白交联，老化，失去弹性。而黑色素细胞中的酩氨酸酶在黑色素合成过程中起关键作用，黑色素代谢的一般过程是，黑素细胞中酪氨酸在酪氨酸酶的作用下，生成多巴、多巴醌，最后生成真黑素，并从黑素细胞分泌到邻近的角质形成细胞中去，体现出皮肤的颜色。酪氨酸酶是黑素合成最关键的限速酶，它的活性对黑色素的合成起决定性作用，活性越高，生成的黑素也越多。因此酪氨酸酶的活性直接影响了皮肤的美白效果。本实验采用了D-半乳糖所致的小鼠衰老模型，该模型为抗衰老研究中常用的模型，耗时短且结果稳定可靠，我们的实验亦计实了该模型亦可导致小鼠皮肤出现明显衰