支原体培训资料ppt课件.ppt

生殖健康产品介绍 生殖道支原体 ICS 主讲 陈晖Telmail shineychan 第一部分 发现历史生物学特性支原体感染带来的危害流行病学调查 支原体基础知识介绍 支原体发现历史 1898年 由法国科学家Nocard及Roux发现此类微生物 1956年正式命名为支原体 人型支原体 Mycoplasmahominis Mh 于1937年由Dienes等从一位女性病人巴氏腺脓肿部位分离到人型支原体 解脲脲原体 Ureaplasmaurealyticum Uu 于1954年由Shepard首先分离 与人类疾病相关的几类支原体 人型支原体 M humenis MH 常见与泌尿生殖道疾病相关解脲脲原体 Ureaplasmaurealyticum UU 常见与泌尿生殖道疾病相关生殖器支原体 M genitalium MG 少见与泌尿生殖道疾病相关肺炎支原体 M pneumonie Mp 常见引起肺炎发酵支原体 myoplasmafermentans MF 少见与泌尿生殖道疾病相关穿透支原体 myoplasmapenetrans MPe 少见与艾滋病并发症相关 生物学特性 解脲脲原体 海胆 状集落 人型支原体 油煎蛋 状集落 Uu和Mh的致病机理 致病性 支原体一般只粘附在呼吸道或泌尿生殖道的上皮细胞表面 而不进入组织和血液 粘附于宿主细胞表面吸收营养 获得脂质和胆固醇 引起细胞损伤 代谢产生有毒物质 引起细胞膜损伤 粘附于精子表面 从而阻止精子运动 所产生的神经氨酸酶样物质可干扰精子与卵子的结合 这是支原体引起不孕不育的原因之一 支原体感染带来的危害 支原体与妇科炎症 大部分情况下 女性感染Uu或Mh后没有明显的临床症状或者无症状状态 初期症状主要表现为白带多 而且稀薄 部分病人由于患有宫颈炎或宫颈糜烂 Uu易上行感染盆腔或附件 引起严重的后果 如不孕不育 Mh在女性泌尿生殖道感染中起重要作用 可引起盆腔炎 肾盂肾炎 阴道炎等疾病 支原体与男性不育 与非淋菌性尿道炎的发病密切相关 Uu是男性NGU的病因 并可引起慢性前列腺炎 附睾炎 严重者可引起不育 支原体感染带来的危害 支原体感染的流行病学 20世纪90年代以来 沙眼衣原体和解脲脲原体所致的泌尿生殖系统感染的发生率在欧美国家已经超过淋病跃居首位 在我国也呈逐年上升的趋势 从各类文献报道统计国内Uu及Mh感染率在30 60 之间 成为当前性传播疾病 STD 的主要病原体 根据我国性病流行病学分析报告 非淋菌性尿道炎年均增长率43 84 已成为引起泌尿生殖系统炎症发病率最高的性传播疾病 而支原体和衣原体感染是非淋菌性尿道炎的主要病因 90 以上 Uu在泌尿生殖道感染中的检出率高 据有关资料显示 在女性常见的生殖道炎症中 解脲脲原体占非淋菌阴道炎的65 在宫颈炎和阴道炎病例中 解脲脲原体检出率为67 这说明 解脲脲原体与妇科疾病中的炎症有着密切的关系 Mh在人群中的分离率较低 Mh在男性NGU 非淋菌性尿道炎 的发病过程中并不十分重要 而在女性泌尿生殖道感染中起重要作用 但由于检测试剂的质量参差 其感染往往被忽视 Uu和Mh主要通过性接触和母婴传播 支原体感染的实验室诊断 第二部分 培养法 液体培养法和固体培养法抗原检测分子生物学方法 核酸杂交技术 PCR等 支原体常见实验室诊断方法 由于在人群中存在Uu Mh的无症状携带者及低滴度抗体 所以Uu Mh的血清学检查法极少使用 最常用的实验室诊断是培养 药敏试验 标本中的抗原的检测 核酸成分的检测等 培养法 支原体感染的实验室诊断以往主要依靠分离培养作为检测到病原体存在的直接证据 培养法也被视为标准方法 支原体中以解脲脲原体Uu 生长过程中需要分解尿素 人型支原体Mh 需要分解精氨酸 最为常见 而目前商品化的肉汤培养基也都是基于这个原理制成的 分为液体培养法和固体培养法 1 固体培养法原理 固体培养基一般为含有多胨等营养成分 细胞培养液 抑菌剂等成分的琼脂培养基 标本接种后在CO2环境下培养 于显微镜下观察有无解脲脲原体棕黑色海胆状菌落和人型支原体油煎蛋状菌落 优点 是支原体鉴定方法的 金标准 能够通过显微镜下观察支原体菌落的生长准确判断出支原体的感染情况 具有很高的特异性和敏感性 还可同时观察多种病原体菌落的生长情况 缺点 该方法临床诊断耗时较长 支原体生长过程需要CO2等 培养过程中菌株容易死亡 给临床使用带来极大不便 不能够提供药敏情况 无法对临床用药给以指导 因此该方法不适用与临床常规检测 仅作为评价其他方法的一个标准 培养法 尿素 酚红指示剂 精氨酸 酚红指示剂 Uu的培养 Mh的培养 培养基 培养基 培养法 分解利用产生NH3 使PH值升高 2 液体培养法 优点 操作方法简单 用时较短 结果易于观察 准确性好 同时可一次检测出药敏情况 为临床用药提供了客观依据 有效减少了由于抗生素滥用造成的耐药性增加 减轻了患者的治疗负担 缺点 若标本中含有能分解尿素或精氨酸的细菌 有真菌污染或被污染 都可能造成实验结果的假阳性 同时据文献报道 也可能存在不分解尿素的Uu 造成检测结果的假阴性 培养法 培养法 3 液体 固体两步培养法原理 标本首先用液体培养基进行初筛 将初筛阳性者转种至固体培养基上培养鉴定 优点 结合了液体培养法和固体培养法的优点 具有很高的特异性 可有效减少假阳性结果的产生 缺点 该种方法操作繁琐 耗时长 且由于Uu生长繁殖所需PH值为6 0 Mh生长繁殖所需PH值为7 0 在液体培养基中随着PH值的升高 会造成支原体的死亡 由此将其转种至固体培养基上后造成假阴性的结果 培养法 血清学方法 支原体特异性血清学方法中 常用的有补体结合实验 间接免疫荧光染色检查法 生长抑制试验 代谢抑制试验 酶免疫测定等 以免疫斑点法为例 原理 反应板上的固相普通型Uu混合抗原特异地与人血清中的抗Uu抗体IgG结合形成复合物 胶体金标记的抗人IgG抗体再与复合物结合 形成肉眼可见的红色圆斑 优点 操作简便 快速 可作为临床大量体检筛选实验用 缺点 阳性不明显时不易观察结果 容易漏检 且不能够提供药敏情况以指导临床用药 分子生物学方法 支原体分子生物学检测方法有基因探针和聚合酶链反应 PCR 等方法 基因探针的核酸杂交法 虽然敏感性和特异性都很高 但基因探针常用同位素标记 放射性危害大 设备要求高且繁琐难以推广 近年来发展的PCR技术 使得支原体检测变得简便 快速 敏感 特异 为支原体的检测和实验研究开辟了一个广阔的前景 目前已经有商品化试剂盒出现的荧光定量PCR技术 FQ PCR 具有较高的敏感性和特异性 兼具定量的特点 但其不能对治愈状况进行判断 因此对于临床仅具有鉴定的意义 而不能用于判断疗效 分子生物技术的开展要求有较高的实验环境和设备 目前来说很难在临床大范围推广 各种检测方法的比较 第三部分产品介绍 丽珠泌尿生殖道支原体诊断系列 解脲脲原体和人型支原体培养鉴定药敏试剂盒 冻干型 解脲脲原体和人型支原体培养鉴定药敏试剂盒 液体型 MycoplasmaICS 解脲脲原体和人型支原体培养基试剂盒 Uu MhMediaKit 解脲脲原体分离培养基试剂盒 UuIsolationMediaKit 人型支原体分离培养基试剂盒 MhIsolationMediaKit 试剂盒组成 冷冻干燥培养基20个含营养物质 底物 抑菌剂 杀菌剂 指示剂等成分稀释液10ml 瓶 7瓶主要含指示剂 用于冷冻培养基的溶解试剂条20条每个试剂条含有24个微孔无菌石蜡油10ml 瓶 2瓶起密封作用说明书1份报告单 报告单 各20张吸头20个 试剂盒组成 试剂盒组成 检测原理 试剂盒主要由选择性培养基和试剂条组成 培养基中含有蛋白胨 酵母抽提物 马血清 生长因子等营养物 并加有尿素 精氨酸及酚红指示剂 当有Uu和Mh生长时 尿素和精氨酸被分解生成碱性物质而引起PH值上升 培养基由黄色变成红色 同时 培养基中加有抑菌剂 杀菌剂 可抑制或杀灭泌尿生殖道中细菌和真菌的生长 试剂条的各孔分别用于质控对照以及Uu和Mh的培养鉴定 半定量计数和药物敏感性实验 从上至下 从左至右编号 3号孔 林可霉素4号孔 红霉素5号孔 林可霉素 Uu抑制剂6号孔 红霉素 Mh抑制剂 解脲脲原体和人型支原体培养鉴定药敏试剂盒 试剂盒组成 药物敏感性试验 解脲脲原体和人型支原体培养鉴定药敏试剂盒 试剂盒组成 尿液 尿道分泌物 前列腺液 精液 宫颈分泌物无菌涤纶拭子采集 检测方法 标本采集 标本 冻干培养基的稀释 稀释液 培养基 接种与培养 培养基 标本 石蜡油 接种到试剂条除C 外各孔中 50 l 23 每孔一滴 解脲脲原体和人型支原体培养鉴定药敏试剂盒 结果判断 C 孔 空白孔 阴性 试验有效 判断余下各孔结果 C 孔 空白孔 阳性 表示污染 试验无效 C孔 对照孔 阳性 有Uu和 或 Mh生长 判断试剂条余下各孔结果 C孔 对照孔 阴性 报告Uu和Mh阴性结果 解脲脲原体和人型支原体培养鉴定药敏试剂盒 结果判断 注 研究表明 女性下生殖道中存在Uu正常寄生的情况 Uu在女性下生殖道中是一种条件致病菌 Uu培养阳性的结果是否具有临床意义 需要结合临床症状和半定量计数结果解释 Uu半定量计数结果大于等于10000CCU的情况 处于感染状态的危险性高 解脲脲原体和人型支原体培养鉴定药敏试剂盒 结果判断 解脲脲原体和人型支原体培养鉴定药敏试剂盒 结果判断 解脲脲原体和人型支原体培养鉴定药敏试剂盒 解脲脲原体和人型支原体培养鉴定药敏试剂盒 结果判断 在试剂条计数孔上得出的只是浓度指示值 准确的浓度测定值可以通过菌落形成单位 CFU 计算法或颜色改变单位 CCU 测定法测定 一次的阴性结果并不能确定没有感染 因为所有的微生物检测结果很大程度上依赖于标本的采集 阳性结果并不能作为充分的临床诊断依据 临床诊断需要实验室检验结果与临床症状相结合 注意事项 解脲脲原体和人型支原体培养鉴定药敏试剂盒 采用了冷冻干燥培养基 贮存运输更加方便 有效期长达18个月 集Uu和Mh的分离鉴定 半定量计数 药敏试验于一体 覆盖三大类九种最常用的抗生素 提供最全面的临床诊断及用药信息Uu和Mh检出率高 特异性好 培养基经低温冷冻干燥 有效期达18个月 操作简便 经济适用 解脲脲原体和人型支原体培养鉴定药敏试剂盒 产品特点 混合液体培养基2 9ml 瓶 20瓶含营养物质 底物 抑菌剂 杀菌剂 指示剂等成分试剂条20条每个试剂条含有24个微孔无菌石蜡油10ml 瓶 2瓶起密封作用说明书1份报告单 报告单 各20张吸头20个 试剂盒组成 试剂盒组成 检测原理 试剂盒主要由选择性培养基和试剂条组成 培养基中含有蛋白胨 酵母抽提物 马血清 生长因子等营养物 并加有尿素 精氨酸及酚红指示剂 当有Uu和Mh生长时 尿素和精氨酸被分解生成碱性物质而引起PH值上升 培养基由黄色变成红色 同时 培养基中加有抑菌剂 杀菌剂 可抑制或杀灭泌尿生殖道中细菌和真菌的生长 试剂条的各孔分别用于质控对照以及Uu和Mh的培养鉴定 半定量计数和药物敏感性实验 解脲脲原体和人型支原体培养鉴定药敏试剂盒 试剂盒组成 药物敏感性试验 解脲脲原体和人型支原体培养鉴定药敏试剂盒 试剂盒组成 尿液 尿道分泌物 前列腺液 精液 宫颈分泌物无菌涤纶拭子采集 检测方法 标本采集 标本 接种与培养 培养基 标本 石蜡油 接种到试剂条除C 外各孔中 50 l 23 每孔一滴 解脲脲原体和人型支原体培养鉴定药敏试剂盒 结果判断 C 孔 空白孔 阴性 试验有效 判断余下各孔结果 C 孔 空白孔 阳性 表示污染 试验无效 C孔 对照孔 阳性 有Uu和 或 Mh生长 判断试剂条余下各孔结果 C孔 对照孔 阴性 报告Uu和Mh阴性结果 解脲脲原体和人型支原体培养鉴定药敏试剂盒 结果判断 注 研究表明 女性下生殖道中存在Uu正常寄生的情况 Uu在女性下生殖道中是一种条件致病菌 Uu培养阳性的结果是否具有临床意义 需要结合临床症状和半定量计数结果解释 Uu半定量计数结果大于等于10000CCU的情况 处于感染状态的危险性高 解脲脲原体和人型支原体培养鉴定药敏试剂盒 结果判断 解脲脲原体和人型支原体培养鉴定药敏试剂盒 功能强大 集Uu和Mh的培养 分离鉴定 半定量计数 药敏试验于一体 一次性检测 快速全面辅助指导疾病诊断 合理的用药指导 覆盖三大类九种最常用的抗生素 提供最全面的临床诊断及用药信息结果准确可靠 独特的空白孔和对照孔设计 确保实验结果准确可靠 操作简便 经济适用 液体型设计 方便直接使用 解脲脲原体和人型支原体培养鉴定药敏试剂盒 产品特点 解脲脲原体和人型支原体培养基试剂盒 冷冻干燥培养基20瓶含营养物质 底物 抑菌剂 杀菌剂 指示剂等成分稀释液10ml 瓶 6瓶主要含指示剂 用于冷冻培养基的溶解说明书1份20人份 盒 试剂盒组成 解脲脲原体和人型支原体培养基试剂盒 3 接种 尿液 尿道分泌物 前列腺液 精液 宫颈分泌物无菌涤纶拭子采集 1 标本采集 2 冻干培养基的稀释 培养基 标本 4 培养 将培养基置于35 37 温箱中培养 于48小时观察结果 稀释液 培养基 标本 检测方法 解脲脲原体和人型支原体培养基试剂盒 培养基由橙黄色变为红色 透明清亮 无明显浑浊 判断为Uu或 和 Mh阳性 培养基变红 只说明培养基中有Uu或 和 Mh生长 但不能认为24小时培养阳性的为Uu 48小时阳性的为Mh 一次的阴性结果并不能确定没有感染 因为所有的微生物检测结果很大程度上依赖于标本的采集 阳性结果并不能作为充分的临床诊断依据 临床诊断需要实验室检验结果与临床症状相结合 支原体生长应保持培养基透明清亮 遇杂菌污染引起浑浊变红者不得报告支原体阳性 结果判断及注意事项 解脲脲原体和人型支原体培养基试剂盒 解脲脲原体分离培养基试剂盒 Uu干粉培养基20瓶含营养物质 底物 抑菌剂 杀菌剂 指示剂等成分Uu培养基稀释液10ml 瓶 6瓶主要含指示剂 用于冷冻培养基的溶解说明书1份20人份 盒 试剂盒组成 解脲脲原体分离培养基试剂盒 检测原理及方法 Uu分解尿素产生的产物能使培养基的PH值上升 培养基加入尿素作为底物 酚红作为指示剂 如有Uu生长 培养基变成红色 1 标本采集 2 冻干培养基的稀释 解脲脲原体分离培养基试剂盒 3 接种 4 培养 将培养基置于35 37 温箱中培养 于48小时观察结果 5 结果判断 培养基由橙黄色变为红色 透明清亮 无明显浑浊 判断为Uu阳性 人型支原体分离培养基试剂盒 人型支原体干粉培养基20瓶含营养物质 底物 抑菌剂 杀菌剂 指示剂等成分Mh培养基稀释液10ml 瓶 6瓶主要含指示剂 用于冷冻培养基的溶解说明书1份20人份 盒 试剂盒组成 人型支原体分离培养基试剂盒 检测原理及方法 Mh分解精氨酸产生的产物能使培养基的PH值上升 培养基加入精氨酸作为底物 酚红作为指示剂 如有Mh生长 培养基变为红色 1 标本采集 2 冻干培养基的稀释 3 接种 4 培养 于48小时观察结果 结果判断 培养基由橙黄色变为红色 透明清亮 无明显浑浊 判断为Mh阳性 人型支原体分离培养基试剂盒 enter 第四部分 支原体检测市场状况分析 产品应用领域 Uu和Mh培养鉴定药敏试剂盒Uu和Mh培养基试剂盒解脲脲原体分离培养基试剂盒人型支原体分离培养基试剂盒 STD门诊病人的病症诊断 用药指导及治疗效果评估 妇产科病人的病症诊断 用药指导及治疗效果评估 妇产科定期体检 妇产科手术前检查 不孕不育专科病人的病症诊断 用药指导及治疗效果评估 男性专科病人的病症诊断 用药指导及治疗效果评估 其他主要支原体检测试剂 进口产品 法国梅里埃 国产产品 冻干 上海其昌达 上海奥普 珠海黑马 液体 黑马 银科 浪峰 益民 天洋 丽拓等 丽珠支原体诊断系列冻干培养基优点 抑制剂 1 种类 2种真菌抑菌剂 4种广谱杀菌剂 1种革兰氏阴性菌抑菌剂 1种化学抑制剂 有效杀灭样品中的杂菌 2 特点 1 冷冻干燥培养基对抑菌剂的稳定性要求较低 抑菌剂选择面广 往往特异性较好 2 液体培养基由于自身生产工艺的限制 一些在液体状态和较高温度下易失效的抑菌剂就不能选用 选择面窄 如杀菌能力很强的青霉素类抗生素在液体状态下半衰期只有数小时 将会大量流失 稳定性好同液体培养基比较 冻干培养基运输过程影响小 营养成分 抑菌剂 杀菌剂等有效成分可以较好保存 液体培养基对运输的温度要求高 运输过程中如温度较高培养基溶解 在高温下抗生素 马血清等有效成分部分失效 灵敏度 特异性下降 易出现假阴性和假阳性 有时候还会出现培养基未使用就长菌现象 丽珠支原体诊断系列冻干培养基优点 保存条件简单冻干培养基保存条件2 8 不需冷冻 液体液体培养基要求高 需冷冻保存冷冻干燥培养基含水量低于3 室温放置数个月 质量不受影响 丽珠支原体诊断系列冻干培养基优点 培养基 冷冻干燥培养基 复溶即可使用 稳定性 较液体培养基好 运输过程影响小 营养成分 抑菌剂 杀菌剂等有效成分保存良好 保存条件 2 8 不需冷冻 有效期 18个月 Mh检测灵敏度高 含独特的针对人型支原体的营养成分 并使用冷冻干燥工艺保存 大大提高人型支原体的检出率 产品比较 梅里埃产品 梅里埃试条 药敏试验抗生素的比较 梅里埃药敏抗生素的说明 四环素 第一代的四环素类药 约6 10 Uu株对四环素耐药 红霉素 Mh对红霉素天然耐药 环丙沙星 第三代的喹诺酮类药 敏感性较差 主要是对肠杆菌 球菌有抗菌作用 且对未成年人骨骼发育有延缓作用 因此未成年人禁止使用 原始霉素 至今没有国产药和进口药 毒性大 价格贵 美满霉素 为红霉素衍生物 对Uu有较好的抑菌作用 敏感性好 罗红霉素 红霉素的改进 副作用较小 敏感性好 左氧氟沙星 是氧氟沙星的左旋体 其体外抗菌活性约为氧氟沙星的两倍 抗菌活性强 不良反应少 司帕沙星 第三代喹诺酮类药 实验数据表明抗菌活性为环丙沙星的4倍以上 厌氧菌 支原体属 衣原体属均有很强抗菌活性 与梅里埃产品的比较 国产试剂特点 主要为液体试剂 批间差及板间差大 不方便储存及运输 药敏多一些 但多出药的意义不大 厂