STR标准物的制备.pdf

染色体 基因座 7扩增出 染色体上 基因座的A个等位基因片 段8将其插入B C 重组质粒中8经 DE测序分析证实插入片段的结构及大小8按国际标准将插入的等位基因片段 进行命名8最后经转染F扩大培养F扩增及再鉴定后制备出标准的 等位基因分型标准物9结果应用此法 制备出大量的 等位基因分型标准物8并将其成功地应用于该基因座在中国成都地区汉族及德国美茵茨地 区高加索人群体中的基因型分布频率调查9结论该法制备的5 6 7基因座等位基因分型标准物在法科学实践中 应用价值极高8 基因座是一个适合我国群体分析和法科学应用的遗传标记9 3关键词4 等位基因分型标准物短串联重复序列 基因座 遗传多态性 3中图分类号4 A A 8G 0 H I J K LM NI O PQ M N R I S J T I U M NM V 5 7 6 7 7 5 6 7 76 B 7 8 3 9B 8 9 6 9 P I O M K R D 8 6 7 5B 9 8 5 6 34 8 3 7 6 8 7 5 6 7 6 6 3 9 7 2 6 76 B 3 5 2 9 6 7 8 3 6 8 3 9 6 6 79 7 5B 6 6 A t u B C 6 D 9 3 6 6 B 3 5 3 DE4 6 6 84 6 7 6 6 3 6 7 8 7 8 3 9 3 3 3 GP L M S K R 4E 9 85 71扩增F电泳分离F 银染显色后8须根据谱带的位置判定其基因型9多国 实验室间比较的结果显示8只有与分型标准物同步 电泳对比判型85 6 7基因座基因型才有 K的可 重复性H 8 J9国外分型标准物主要依靠大试剂公司 国家自然科学基金 批准号 0 H 1和教育部留学回国人 员启动基金资助 提供8由于其制备技术保密8价格昂贵8在中国推广 应用的可能性小2同时8中国群体中识别机率和非父 排除概率高的5 6 7基因座与国外不尽一致8因此国 外试剂公司也不能提供适合中国群体的5 6 7分型 标准物H H J9为此8我们应用分子克隆技术8在国内外 首先制备出 染色体上 基因座的5 6 7分 型标准物9并应用此法制备的分型标准物8首次调 查了 基因座在中国成都地区汉族及德国美 茵茨地区高加索人群体中的基因型分布频率8评价 该分型标准物和基因座在法科学实践中的应用价 值9 L 材料和方法 L L 材料 华西医大学报 M N QO PP P P P P P P P P P P P P P P P P P P P P P P P P P P P P P P P P P P P P P P P P P P P P P P P P P P P P P P P P P P P P P P P P P Q R R L 2 QP Q Q Q Q Q P K O R S N O P P Q P K O 7 T 试剂盒及主要仪器 U VV 2 F 2 W J X G W 2 Y Z Q M C E RU V U 3 B C W E WZ F 2 RJ 3 2 1 E 2 A F W E W ZU D 3 Y C R U 1 G Y L U 3 B C W E WZ U 3 E Y2 F R S U V J X 2 2 3 Y W E 3 X C 1 2J 2 2 C FV 2 L XV 2 C W E W Z 9 9 1 2 L S E G X G W 2 YG R凝 胶 电 泳 系 统Z A B 2 2 C D E 1 E F 2 G R S K V 扩增0用a b非变性聚丙烯酰胺凝胶Z交联度为 b 电泳分离U V扩增片段0银染显色7用J C D 2 L 2 3博 士 Z德国 大学 提供的 IJ K 5 标准片段长 度为对照0从群体样本中选出 个不同大小片段长 度的等位基因0切割出含相应片段的凝胶0回收洗脱 于消毒双蒸水中0制备成U V的再扩增模板7 8 8 U V再扩增0 产物鉴定及纯化将制备好 的 份模板 进行U V扩增0反应体系 1 0 1Z 9 5 K 0 1 0 V反应条件为 e K分钟0然后 f e K 秒0 e K 秒0a e V纯化试剂盒将大小正确的 U V扩增片段产物纯化7 8 H U V扩增片段的克隆 采用平端插入克隆 试剂盒 Z J 3 2 1 E 2A F W E W 0U D 3 Y C 0将 纯化后的 个U V片段直接插入9 V方法选择出含有正确插入片段的克 隆7 8 T 重组质粒的 测序采用荧光标记双 脱 氧 核 苷 酸Z L L U 测 序 试 剂 盒Z 9 9 1 2 L S E G X G W 2 YG 0 S K 质粒 公用的正反引物对重组质粒的插入片段进行正反双 向测序循环测序方法0确定插入片段的大小和组成0 以国际通用的命名原则4 V扩 增0用j 3 LU V 9 3 B C W E G X G W 2 Y Z U 3 E Y2 F 纯 化 扩 增 产 物0最 后 将 各 IJ K 5 等位基因的U V纯化物混合0制备成等位 基因分型标准物阶梯7 8 结果 8 重组质粒插入片段的序列分析结果 用9 质粒公用引物从插入片段的两端对 个重组质粒进行测序分析0结果证明其插入的 个 片段是由Q 四核苷酸核心序列分别重复 V扩增模板0 对 个不同的等位基因分型标准参 照物片段分别进行扩增0扩增产物纯化后再混合制 备成 IJ K 5 的等位基因标准参照物阶梯Z附图 0 长度范围为 k 5 5 M 9 7 8 H 中国汉族及德国高加索人群体m n o H p h基因 座的基因型分布 将制备的 IJ K 5 等位基因分型标准参照物用 于该基因座在成都地区汉族群体 A B CD E F G H H H I H A A J K 9 L P A J A B CD E F G H H H IQ J R S P LTU I UT J J SV H Q AQ J W S OJ L V I P X J I W SY P V H L S A L 附表中国汉族及德国高加索人群体 W N P e V L f U L gh d J S gh d W N P e V L f U L gh d J S g cc h cc M i N M jGG k i M E N l i mG k m F cc M i N M O Mi k F EM E N l M lM k n G cc M i N l i Mi k F EM E N l l Mi k F E cc M M N M M Gj k M EM E N l E lM k n G cc M M N M l jE k E MM E N l j Mi k F E cc M M N M E Mi k F EEE k i M j N M j Mi k F EGG k i cc M M N M j lM k n GE j E j k i M j N M Gll k i cc M M N M Gnn k i M j N M nMM k i cc M M N M n lM k n GM j N M m Mi k F EEE k i cc M M N M F lM k n GM j N M F El k j F cc M M N M O Mi k F EM j N M O Mi k F EMM k i cc M M N l i Mi k F EM j N l i Mi k F E cc M M N l M Mi k F EM j N l l Mi k F E cc M l N M l mG k m Fll k i M G N M Gll k i cc M l N M E El k j FMM k i M G N M nEE k i cc M l N M jmm k i M G N M m Mi k F EMM k i cc M l N M G Mi k F EMM k i M G N l i Mi k F EMM k i cc M l N M n Gj k M EMM k i M G N l M Mi k F E cc M l N M m lM k n GM n N M n jE k E MMM k i cc M l N M F jE k E MM n N M mEE k i cc M l N M O jE k E MMM k i M n N M Fll k i cc M l N l i El k j FM n N M O Mi k F E cc M l N l l Mi k F EM n N l iMM k i cc M E N M E M M O k i OMM k i M n N l l Mi k F E cc M E N M j Mi k F Ell k i M m N M mMM k i cc M E N M G lM k n Gjj k i M m N M Fll k i cc c c c M E N M n Gj k M EM m N M OMl k i M E N M m mG k m F M E N M F Gj k M E M E N M O Om k j jll k i o I P P L P p lqM l l k F r s qj E t qi k M M l M p lqO G k E r s ql O t qi k m j M M 讨论 随着B uv分析技术在法科学领域中的广泛应 用w实行B uv分析的质量控制和质量保证显得日 益重要w唯有建立标准化的B uv分析技术w才能确 保法医B uv检测分析结果的准确性x公正性和可 靠性 由于D y z基因座有杂合度高x易于扩增x检材 用量微等诸多优点 M l w M E w使其成为了当今法科学领 域中的应用研究热点w被誉为是新一代的法医B uv 指纹技术 要准确的对它进行分型w实现其分型的标 准化w就必须制备和构建一套优质x能大量复制的等 位基因分型标准参照物系统 只有具备了一套精确 的国际标准化命名的标准参照物w才有可能对D y z 分型结果做出正确的判型和命名w也才可能在各实 验室之间得到可重复性的结果 G w n w M i w M M 我们采用分 子克隆技术w在国内首先制备出精确的B CD E F G基 因座的O个等位基因标准片段w通过测序后又按国 际命名原则进行了命名w得到了可以大量复制的 B CD E F G等基因分型标准参照物w为该位点分型技 术标准化及B uv数据库的建立奠定了基础 应用这一方法制备的标准分型参照物w我们调 查了B CD E F G基因型在成都地区汉族群体及德国美 茵茨地区高加索群体中的分布 在中国群体中共发 现j j种基因型w在德国群体中共发现E i种基因型w 两个群体最常见的基因型分别为M E N M E O k i O h 和 基因型M M N M j E j k i h 对该基因座基因型作卡方 检验w其观察值与期望值在两群体中均吻合良好w符 合 J A e N Y J R平衡 根据本次调查结果w按 u 等 M j 的方法计算 B CD E F G基因座在中国汉族群体及德国群体中的个 人识别机率 V W T JW Q A L I J S P W w其值分别达 到O G k O h和F n k l h 与C染色体上其它的D y z基 因座w例如 B CD M O w B CD l F m M G 相比较w B CD E F G单 一基因座就显示了其很高的多态性和鉴别机率w在 法科学个人识别和亲子鉴定中有很高的实用价值w 特别是对强奸案件中的混合斑鉴定w它具有其它基 因座不可比拟的识别机率w是C染色体上一个不可 多得的D y z基因座 参考文献 M9 f w9 A Af w W J y w R Q W J L I L I I M ky U W J e AY I R J W A kvS W J L I A I l n O lo A A T J A LvH wf X P H H Wvw SSW A vw R A R P I S V V R T P U P J S J I A P P J S J I P A S J V P L kvS S d m j n EvH Q W J A z 9 w SSW A vw f W P W k z V A A Q Q I P J L W H P W W QV J P R Y e SV H Q I P W W QL U W J P P A S mM期 张林等 C染色体D y z基因座B CD E F G cc c c c c c c c c c c c c c c c c c c c c c c c c c c c c c c c c c c c c c c c c c c c c c c c c c c c c c c c c c c c c c c c c c 等位基因分型标准物的制备及群体遗传学研究 万方数据 A 7 7 B 0 C 7 8 A 7 D B 7 7 A 8 B D 7 A D 7 0 1 1 2 34 4 5 0 E 4 4F D D A G7 H 7 7 I J A K L 7 8 8 A B 7 M A K D 7 B 7 I J A K N 9 OI 0 1 1 4 3P P Q P R 5 P 0 S 侯一平 李英碧 吴谨等 法医I J 分型的可重复性 中国 法医学杂志 0 1 1 T 30 C Q C R 5 0 S C E 陈国弟 辛军平 张林等 中国成都地区汉族群体4个U F V 基因座的遗传多态性 中国法医学杂志 0 1 1 1 30 2 Q 2 R 5 P 0 0 TL A A U I K H I I W 7 A H K X A A 7 7 D 8 B 7 Y D I J B 7 D A 8D A A J D A D D 8 V 0 1 T T 30 S 5 0 P 0 4 1U D 8 W L L U G K Z G F 8 D 7 B D U C T 4 8B M D K 8 87 7 A 7 X 7 DU D D 0 1 1 T 31 E 5 S 0 0 6I J N 7 7 7 B U X I J D 7 8 7 0 1 1 2 7 D 7 D B D 7 8 7 7 B I J N 7 7 7 B U X 8 W N V O 8 7 A K 7 U F VQ 7 8 R K 9 L 8 0 1 1 2 3 0 6 E 50 4 1 0 0a G a H a a 8 7 ZA a I J D 7 8 7 5X 7 7 B I J N 7 7 7 B U X 8 7 B 7 8 K 9 L 8 0 1 1 E 30 0 6 5 0 E 4 0 PbA 8 7 K 8J c d 7 N W A K 8 D 7 D 7 A Y 7 8 7 A K e D D 7 K O A B 7 8 8 A 8 B D 7 A D 7 7 0 1 1 4 30 S 5 C C 2 0 Cc M bA 8 7 K 8 J d 7 N W A K 8 D A Y 7 8 W N V K B 7 B 7 D 8 B D 7 a 7 D M 0 1 1 4 30 T 5 0 0 S 0 2J L A K 7 B 8 K O 8 8 8 7 A 7 W 7 DJ A D 8U D cU 0 1 E C 3E 6 5 C C P 0 0 4I H V 9 U LI I 7 7 B D 7 7 7 A 7 K O 87 B D 7 A A A 7 O A 7 A 7 7 V D 0 1 1 S 3S 5 0 0 E E Q P 6 6 6 0 6 P 1收稿 P 6 6 6 0 P 0 0修回R fffffffffffffffffffffff 编辑于长谋 成人肾母细胞瘤g例报告 刘成文0李平0娄彦艳0李甘地P 0 华西医科大学附属第一医院 肿瘤中心Q成都S 0 6 6 2 0 R 3P附属第一医院 病理科 h关键词i 成人肾母细胞瘤 h中图分类号i VE C E 0 0 患者 男 P 1岁 因无痛性全程血尿C月于P 6 6 6年0月 P S日入院j无尿频k尿痛k畏寒k发热等不适j查体5腹平软 右肾区稍饱满 余无异常j腹部a超5右肾大小正常 下极肾 实质内查见大小约C D 的稍强不均匀团块 周边可见低回 声j腹部N F5右肾中份至下极前外侧可见一稍低密度占位 大小约4 D lC D lC D 左右 肿块位于右肾实质并突破肾 包膜 肿块与邻近正常肾实质分界尚清j肾图5双肾功能未见 明显异常j考虑右肾肿瘤 同月C 0日于外科行右肾肿瘤根治 性切除术j术中见右肾下份内前份有一直径C D 大小的肿 块突出 外生性生长 侵及肾包膜 与周围组织无粘连 剖面 有局灶样坏死出血 呈鱼肉样改变 肾门及腔静脉旁无肿大 淋巴结j术后病理切片见肿瘤由梭形间质细胞及上皮细胞两 种成分组成 间质细胞形成片团状的特异性m胚基n状 上皮 细胞形成原始腺管状j免疫组化染色结果5梭性细胞为N d Q oR N Q pR I Q oR 3腺管N dQ qR N Q oR I Q oR j 结合形态学改变 病理诊断为肾母细胞瘤Q G A r瘤R j术后 给予异环磷酰胺 阿霉素和顺铂三药联合化疗 未行放疗j 讨论 G A r瘤是由后肾