培养基使用.doc

大肠杆菌参照食品安全国家标准食品微生物学检验 大肠埃希氏菌O157：H7NM检验GBT 4789.36-2008进行鉴定：1、改良EC肉汤(mEC+n)用途：用于0157选择性增菌(GB2008标准) 配方：（g/L）胰蛋白胨 乳糖 三号胆盐 磷酸氢二钾 磷酸二氢钾 氯化钠 pH值6.90.1 20.0 5.0 1.12 4.0 1.5 5.0 25 原理： 胰蛋白胨提供碳氮源；氯化钠可维持均衡的渗透压；乳糖是可发酵的糖类；磷酸氢二钾和磷酸二氢钾为缓冲剂；三号胆盐和新生霉素能抑制通常在食品中存在的杂菌。用法： 称取本品36.62g，加热溶解于1000ml蒸馏水中，分装三角瓶，每瓶225ml，121高压灭菌15分钟，冷至50后，每225ml培养基中加入一支改良EC肉汤抑菌剂(含新生霉素4.5mg)，混匀，备用。质量控制：在361培养18-24小时。质控菌株菌株编号生长情况其它特征大肠埃希氏O157菌ATCC35150+产气 大肠埃希氏菌ATCC25922+产气金黄色葡萄球菌ATCC25923-/2、改良山梨醇麦康凯(CT-SMAC)琼脂产品用途：用于大肠杆菌0157的分离培养。产品用法：称取本品51.5g，加热溶解于1000ml蒸馏水中，分装三角瓶，每瓶200ml，121高压灭菌15分钟，冷至451左右时加入一支改良山梨醇麦康凯琼脂添加剂(含头孢克肟0.01mg，亚碲酸钾0.5mg)，混匀，倾入无菌平皿，备用。贮存：放于阴凉干燥处保存。3、改良山梨醇麦康凯琼脂添加剂产品用法：每200ml改良山梨醇麦康凯琼脂中添加1支。 保存：2-8，有效期：一年4、O157显色培养基用途：用于O157菌的显色培养，O157菌显亮红色、淡红色或红色。大肠杆菌O157显色培养基是青岛海博生物公司改良的培养基，用于食品、病人粪便样品中O157菌的快速检测。O157菌显紫色，大肠杆菌和大肠菌群显暗蓝色；其它细菌显黄色或无色。本培养基的特异性高，可以克服SMAC培养基引起的假阳性和假阴性结果，是一种很理想的快速检测培养基。 成份 (g/L) 特殊营养物质 50.0 混合显色剂 2.5 琼脂 15.0 pH 7.0 0.1 25 CT 添加剂1ml/支*5 此配方可以进行改良或增加营养成份以获得最佳的结果。 注意：此培养基仅供实验室使用。 用法 称取本品17.2g加入200ml蒸馏水，加热煮沸溶解并不停搅拌，加热10-20分钟。冷却至45-50时，加入CT添加剂混匀，倾入无菌平皿。 注意：制备好的培养基一定要保持表面干燥，可在37的培养箱中倒置放置1-2小时。 贮存 制备好的平板可保存2-5天，应避免光线直接照射。干燥培养基应放置于阴暗干燥处，保存温度2-8，注意避光保存。 失效 干燥培养基超过保质期、结块和颜色变化都不能使用。 操作步骤 A、按国家标准、SN标准、FDA标准或其它方法制备样品液； B、取25克样品液加入225ml mEC肉汤或mTSB肉汤中，37增菌培养18-24小时； C、用3mm接种环取1环增菌液，划线接种到O157菌显色培养基上，做2个平板； D、37培养18-24h，O157:H7菌显紫色，大肠杆菌和大肠菌群显暗蓝色，其它细菌显黄色或无色； E、对典型菌落可做O157:H7菌血清学试验和全套生化试验。 质量控制 a、外观 此干燥培养基的粉末均匀，具有良好的流动性，呈淡蓝色。制备好的平板呈蓝色色固体培养基。 b、微生物试验 在361培养18-24h小时： 质控菌株 ATCC 生长情况 菌落颜色 大肠杆菌 O157 + 紫色 金黄色葡萄球菌 25923 -/+ 黄色 大肠杆菌 25922 + 暗蓝色 沙门氏菌 + 蓝色 奇异变形杆菌 + 无色 方法的局限性 本培养基对典型大肠杆O157:H7必须做血清学试验或生化试验。 典型特征 典型O157:H7菌显紫色，大肠杆菌和大肠菌群显暗蓝色。5、三糖铁（TSI）琼脂产品用途：用于肠杆菌科细菌的生化反应筛选。产品用法：称取本品64.5g，加热溶解于1000ml纯化水中，加热煮沸1分钟，分装于16mm150mm试管，121高压灭菌15分钟制成斜面长4-5cm，底部长2-3cm。沙门氏菌参照食品安全国家标准食品微生物学检验沙门氏菌检验GB 4789.42010进行鉴定：1、缓冲蛋白胨水（BPW）产品用途：用于阪崎杆菌前增菌培养，亦可用于沙门氏菌和李斯特氏菌前增菌培养。产品用法：称取本品20.0g ,加热溶解于1000ml蒸馏水中，121高压灭菌15分钟备用。贮存条件：请放置阴凉干燥处保存。2、四硫磺酸盐煌绿增菌液基础(TTB)用途：用于沙门氏菌选择性增菌培养，需加入煌绿和碘液 配方：（g/L）牛肉粉 蛋白胨 氯化钠 碳酸钙 胆盐 硫代硫酸钠 pH值8.40.2 4.5 9.0 2.7 40.5 5.0 50.0 25 原理： 蛋白胨和牛肉粉提供碳源、氮源和维生素满足细菌生长的需求；氯化钠可维持均衡的渗透压；碳酸钙能中和细菌产酸及吸收有毒的代谢产物；硫代硫酸钠和四硫磺酸钠结合可抑制肠道共生菌(四硫磺酸钠是在培养基加入碘和碘化钾时形成)，而具有四硫磺酸钠还原酶的细菌能在此培养基中繁殖；胆盐可抑制大肠群菌和其它革兰氏阳性杆菌。 用法： 称取本品93.55g，溶解于1050ml蒸馏水中，加热煮沸，临用前加入20%碘液20ml，0.5%煌绿2ml，现配现用，不宜久置。质量控制：在421培养18-24小时。质控菌株菌株编号生长情况其它特征金黄色葡萄球菌ATCC25923-/大肠埃希氏菌ATCC25922+/-/沙门氏菌ATCC14028+/3、亚硒酸盐胱氨酸增菌液（SC）产品用途：用于沙门氏菌选择性增菌培养（GB、SN标准）产品用法：称取本品23.0g,加热溶解于 1000ml 蒸馏水中，无菌操作，分装无菌三角瓶或试管中备用。当天制作当天使用，无需高压灭菌。贮存方法：请放置阴凉干燥处保存4、亚硫酸铋琼脂（BS）用途：用于沙门氏菌的选择性分离（GB、SN标准） 配方：（g/L）蛋白胨 牛肉浸粉 硫酸亚铁 亚硫酸铋 磷酸氢二钠 葡萄糖 煌绿 琼脂 pH值7.70.2 10.0 5.0 0.3 8.0 4.0 5.0 0.025 20.0 25 原理： 蛋白胨、牛肉浸粉提供碳源、氮源、维生素和矿物质；葡萄糖提供能源；亚硫酸铋指示剂抑制革兰氏阳性菌和大肠菌群，但不影响沙门氏菌的生长；磷酸氢二钠是缓冲剂；硫酸亚铁用于产生硫化氢，并与铁产生沉淀，使阳性培养物为具有金属光泽的棕色到黑色菌落；琼脂是培养基的凝固剂。用法： 称取本品50.3g，加入1000ml蒸馏水中,加热煮沸至完全溶解，冷至45-50，摇匀，倾入无菌平皿备用。无需高压灭菌。保存于黑暗处，48小时内使用。质量控制：在361培养18-24小时。质控菌株菌株编号生长情况其它特征金黄色葡萄球菌ATCC25923-/大肠埃希氏菌ATCC25922+/-棕色菌落沙门氏菌ATCC14028+黑色菌落，有金属光泽福氏志贺氏菌ATCC12022+棕色菌落5、XLD培养基产品用途：选择性培养基，主要用于分离志贺氏菌属，亦可用于分离沙门氏菌产品用法：称取本品5.52g，加热搅拌溶解于100ml蒸馏水中，煮沸2分钟，冷至50左右时，倾入无菌平皿，无需高压灭菌。贮存条件：请放置阴凉干燥处保存粪链球菌参照中华人民共和国出入境检验检疫行业标准出口商品中粪链球检验方法SNT 0475-95进行鉴定：1、叠氮钠葡萄糖肉汤用途：用于链球菌的增菌培养 配方：（g/L）胰蛋白胨 牛肉浸粉 氯化钠 葡萄糖 叠氮钠 pH值7.0-7.415.0 4.5 7.5 7.5 0.2 25 原理： 胰蛋白胨和牛肉浸粉提供氮源、维生素、氨基酸和碳源；葡萄糖提供碳源；叠氮化钠可抑制革兰氏阴性菌。用法： 称取本品34.7g，加热搅拌溶解于1000ml蒸馏水中，分装，121高压灭菌15分钟，备用。质量控制：在361培养18-24小时。质控菌株菌株编号生长情况其它特征肠球菌+/大肠埃希氏菌ATCC25922-/粪肠球菌ATCC29212+/金黄色葡萄球菌ATCC25923-/2、Pfizer肠球菌选择性琼脂（PSE琼脂）用途：用于粪链球菌的选择性分离和计数（SN标准） 配方：（g/L）蛋白胨 酵母浸粉 牛胆汁物 氯化钠 柠檬酸钠 柠檬酸铁铵 叠氮化钠 七叶苷 琼脂 pH值 20.0g 5.0g 10.0g 5.0g 1.0g 0.5g 0.25g 1.0g 15.0g 7.10.2 原理： 蛋白胨和酵母浸粉提供氮源、维生素和生长因子；氯化钠维持均衡的渗透压；细菌水解七叶苷与柠檬酸铁铵中铁离子反应形成黑色的6,7-二羟基香豆素；柠檬酸钠、牛胆汁物和叠氮化钠为选择性抑菌剂，抑制非链球菌的细菌；琼脂是培养基的凝固剂。用法： 称取本品57.75克，加热溶解于1000ml蒸馏水中，分装，121高压灭菌15分钟，备用。质量控制：质控菌株接种后，于350.5培养24h，菌 名 菌 号 生长状况 培养特征粪链球菌 CMCC(B)32223良好 棕黑色，具有棕色晕轮金黄色葡萄球菌ATCC6538被抑制 大肠埃希氏菌ATCC25922被抑制3、脑心浸液肉汤（BHI）用途：用于细菌的增菌培养 配方：（g/L）蛋白胨 脱水小牛脑浸粉 脱水牛心浸粉 氯化钠 葡萄糖 磷酸氢二钠 pH值7.40.210.0 12.5 5.0 5.0 2.0 2.5 25 原理： 蛋白胨、脱水小牛脑浸粉、脱水牛心浸粉提供氮源、维生素和生长因子；