实验二 可溶性蛋白质含量的测定(考马斯亮蓝G-250法).ppt_第1页
实验二 可溶性蛋白质含量的测定(考马斯亮蓝G-250法).ppt_第2页
实验二 可溶性蛋白质含量的测定(考马斯亮蓝G-250法).ppt_第3页
实验二 可溶性蛋白质含量的测定(考马斯亮蓝G-250法).ppt_第4页
实验二 可溶性蛋白质含量的测定(考马斯亮蓝G-250法).ppt_第5页
已阅读5页，还剩6页未读， 继续免费阅读

下载本文档

版权说明：本文档由用户提供并上传，收益归属内容提供方，若内容存在侵权，请进行举报或认领

文档简介

实验二植物组织中可溶性蛋白的测定 实验目的 植物体内的可溶性蛋白质大多数是参与各种代谢的酶类 测其含量是了解植物体总代谢的一个重要指标 在研究每一种酶的作用时 常以比活 酶活力单位 mg蛋白 表示酶活力大小及酶制剂纯度 因此 测定植物体内可溶性蛋白质是研究酶活的一个重要项目 实验原理 考马斯亮蓝G 250测定蛋白质含量属于染料结合法的一种 考马斯亮蓝G 250在游离态下呈红色 当它与蛋白质的疏水区结合后变为青色 前者最大光吸收在465nm 后者在595nm 在一定蛋白质浓度范围内 0 100 g ml 蛋白质与色素结合物在595nm波长下的光吸收与蛋白质含量成正比 故可用于蛋白质的定量测定 蛋白质与考马斯亮蓝G 250结合在2min左右的时间内达到平衡 完成反应十分迅速 其结合物在室温下1h内保持稳定 该反应非常灵敏 可测微克级蛋白质含量 所以是一种比较好的蛋白质定量法 实验器材和试剂 实验仪器 分光光度计分析天平样品容量瓶移液管试管 实验材料 植物叶片 实验试剂标准牛血清蛋白溶液染料试剂G 250 试剂的配制 牛血清白蛋白配成1000 g ml和100 g ml 考马斯亮蓝G 250 称取100mg考马斯亮蓝G 250溶于50ml90 乙醇中 加入85 W V 磷酸100ml 最后用蒸馏水定容至1000ml 此溶液在常温下可放置一个月 90 乙醇 磷酸 85 W V 实验步骤 1 标准曲线的绘制 1 0 100 g ml标准曲线的制作取6支试管 按表 1数据配制0 100 g ml血清白蛋白液各1ml 准确吸取所配各管溶液0 1ml 分别放入10ml试管中 加入3ml考马斯亮蓝G 250试剂 盖塞 混合均匀 放置2min后 在595nm下比色 绘制标准曲线 表 1配制0 100 g ml血清白蛋白液 实验步骤 2 0 1000 g ml标准曲线的制作另取6支试管 按表28 2数据配制0 1000 g ml牛血清白蛋白溶液各1ml 与步骤 1 操作相同 绘出0 1000 g ml的标准曲线 表 2配制0 1000 g ml血清蛋白血液 实验步骤 2 样品提取液中蛋白质浓度的测定取植物叶片0 1 0 2剪碎 用磷酸缓冲液研磨 倒入10ml离心管中 定容到10ml 10000pm离心 20min得上清液作为待测样品 取0 5ml提取液于试管中 加入0 5ml蒸馏水后摇匀 再加上3ml考马斯亮兰试剂并充分摇匀 在30摄氏度水浴20min 于595nm处测得OD值 可溶性蛋白质含量的计算 可溶性蛋白含量 g gFW 标准曲线上查得的蛋白质量 g 10 0 1或0 2 示意如下 注意事项 由于取的组织不同 所以O
人人文库> 全部分类> 应用文书 > 技术指导

温馨提示

  • 1. 本站所有资源如无特殊说明，都需要本地电脑安装OFFICE2007和PDF阅读器。图纸软件为CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.压缩文件请下载最新的WinRAR软件解压。
  • 2. 本站的文档不包含任何第三方提供的附件图纸等，如果需要附件，请联系上传者。文件的所有权益归上传用户所有。
  • 3. 本站RAR压缩包中若带图纸，网页内容里面会有图纸预览，若没有图纸预览就没有图纸。
  • 4. 未经权益所有人同意不得将文件中的内容挪作商业或盈利用途。
  • 5. 人人文库网仅提供信息存储空间，仅对用户上传内容的表现方式做保护处理，对用户上传分享的文档内容本身不做任何修改或编辑，并不能对任何下载内容负责。
  • 6. 下载文件中如有侵权或不适当内容，请与我们联系，我们立即纠正。
  • 7. 本站不保证下载资源的准确性、安全性和完整性, 同时也不承担用户因使用这些下载资源对自己和他人造成任何形式的伤害或损失。

最新文档

评论

0/150

提交评论