市售蜂蜜真假鉴定——离子色谱脉冲安培法.doc

市售蜂蜜真假鉴定离子色谱脉冲安培法摘要：本文以CarboPacTM PA200阴离子交换柱为分离柱，以 NaOH+ CH3COONa梯度洗脱，Au工作电极，脉冲安培检测法，并以5%的果葡萄糖浆为阳性对照品，对市售蜂蜜进行测定，研究结果表明，离子色谱脉冲安培检测法用于蜂蜜产假的检测，是一种灵敏快速的检测方法。 关键词：离子色谱脉冲安培检测法；蜂蜜；掺假 蜂蜜是蜜蜂采集植物的花蜜、分泌物或蜜露，与自身分泌物结合后，经充分酿造而成的天然甜物质。天然蜂蜜因其含有丰富营养成分及多种生理活性而备受人们的喜爱。然而，由于蜂蜜中主要成分是果糖和葡萄糖，是很容易造假的食品，在利益的驱动下，有不少不法厂家及商贩向蜂蜜中添加葡萄糖、麦芽糖、葡萄糖浆、果葡糖浆等原料，辅助添加色素、蜂蜜香精等进行造假来谋取暴利使得某些假蜂蜜的感官指标和部分理化指标与天然蜂蜜极为相似，难以辨别其真假。 本文以CarboPac PA200阴离子交换柱为分离柱，以 NaOH+ CH3COONa梯度洗脱，Au工作电极，脉冲安培检测法，并以5%的果葡萄糖浆为阳性对照品，对市售蜂蜜进行测定，研究结果表明，离子色谱脉冲安培检测法用于蜂蜜产假的检测，是一种灵敏快速的检测方法。 1 实验部分 1.1 仪器和试剂 ICS-600型离子色谱仪(美国，Dionex)：四元梯度泵；ED50电化学检测器，Au工作电极，Ag/AgCl参比电极；Chromeleon 6.50 色谱工作站；Milli-Q Advantage A10超纯水机(美国，Millipore)；0.45m水溶性滤膜(美国，Dionex)；Bio-Gel .P-2 Polyacrylamide Gel；麦芽糖、麦芽三糖、麦芽四糖、麦芽五糖、麦芽六糖、麦芽七糖的标准储备液1000 mg/L；蜂蜜和果葡萄糖浆采购于市场。 1.2 样品前处理 1.2.1 凝胶层析柱 称取6g Bio-Gel .P-2 Polyacrylamide Gel放入100ml烧杯中，加入48ml超纯水，室温下水化4h，脱气10min，静止30min。将聚丙烯酰胺凝胶湿法装柱，上端保持1-2cm水层，避免干涸。 1.2.2 蜂蜜前处理 称取2g蜂蜜，加入20ml水，0.45m水溶性滤膜过滤，滤液备用。将层析柱中的水放尽，至下端无水流出时，将2ml滤液沿柱壁慢慢加入，待凝胶上方无液时，加入3ml水冲洗内壁，又至凝胶上方无液时，加入5ml水，冲洗凝胶，弃去以上收集液。再加入2ml水收集测定。 1.2.3 阳性对照品前处5%葡萄糖浆阳性对照品处理方法同1.2.2 1.3 离子色谱条件 色谱柱：CarboPacTM PA200 3mm250mm + CarboPacTM PA200 350 mm（保护柱） 进样量：20l 柱温： 30 流动相：A：100%水；B:200mmol/L NaOH + 200mmol/L CH3COONa。梯度洗脱条件见下表1 表1 梯度洗脱条件检测器：电化学检测器；Au工作电极；Ag/AgCl参比电极。检测池温度30。检测波形电位见下表2 表2 波形电位1.4 麦芽糖混标 准确移取麦芽糖、麦芽三糖、麦芽四糖、麦芽五糖、麦芽六糖、麦芽七糖的标准储备液0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、1.00，定容到10ml，得到浓度为10、20、30、40、50、100ppm混标，进入离子色谱测定。 2 结果讨论 2.1糖的离子色谱-脉冲安培检测法测定原理 糖类化合物是一种多羟基醛或酮,在高pH值的洗脱液中(pH11.512.0),例如1020 mmolL-1的氢氧化钠溶液中,它们会部分或全部以阴离子形式存在,能在阴离子交换柱上被保留并得到分离, 阴离子交换分离是在碱性条件下完成的，检测方法必须与此相匹配金电极的脉冲安培检测器适合这个条件。金电极的表面可为糖的电化学氧化反应提供一个反应环境1（见图1）。 图1脉冲安培检测中葡萄糖在金电极上的氧化作用糖分子中含有多个羟基,用恒电位安培检测法检测糖时,糖可以在贵金属(金、铂等)工作电极上被氧化,但其氧化反应产物会覆盖在电极的表面上,抑制对被测物的进一步检测。脉冲安培检测法用多电位波形,选择不同的施加电位对电极表面进行清洗与活化,使电极能够连续工作,克服了金电极在恒电位条件下测定糖类化合物时易被污染的缺点。目前脉冲安培检测糖的波形主要有两种波形2，一种是四电位波形，一种是三电位波形（见下图2）。三电位波形(见图2a)。这种波形分为3个区:测定区、氧化区和还原区,分别由3个不同的电位组成。测定区由延迟与积分两部分组成,延迟的作用是消除双电层充电电流、降低噪声;氧化区将吸附在电极表面的化合物通过在电极表面形成氧化膜而除去;还原区将电极表面的氧化物还原。四电位波形与三电位波形不同点在于，它是先还原清洗，后氧化清洗。四电位波形降低了电极的损耗,延长了电极的使用寿命和长期使用的重现性。本实验选择四电位波形。 2.2 蜂蜜真假判定原理 天然蜂蜜中不含五糖以上的寡糖，而各种淀粉糖浆中均含五糖以上的寡糖，使用凝胶体积排阻法去除样品中的果糖、葡萄糖，将寡糖富集后直接经离子交换色谱-电化学检测，将五糖以上的寡糖作为蜂蜜中淀粉糖的判定指标（见图3-6），真蜂蜜在麦芽五糖至麦芽六糖和麦芽六糖至麦芽七糖，及麦芽七糖后没有色谱峰。任一掺入果葡糖浆的蜂蜜样品，在麦芽五糖至麦芽六糖和麦芽六糖至麦芽七糖之间有典型的“指纹峰”P1和P2.，根据这两个峰的出现课判断蜂蜜中掺入果葡糖浆。任一掺入麦芽糖浆的蜂蜜样品，在麦芽五糖至麦芽六糖和麦芽六糖至麦芽七糖，及麦芽七糖后，有三个典型的指纹峰P1、P2和P3，根据这三个峰的出现可判断蜂蜜中掺入麦芽糖浆。 图3麦芽糖混标色谱图图4 麦芽糖和纯蜂蜜色谱图图5麦芽糖和含5%果葡糖浆色谱图图 6 麦芽糖和含5%麦芽糖浆色谱图3.市售蜂蜜的测定 将上述方法测定了浙江地区市售蜂蜜产品，在所检测的20种蜂蜜中，有10种蜂蜜检测出掺加麦芽糖浆，色谱