蛋鸡输卵管积液的诊断初报.doc

蛋鸡输卵管积液的诊断初报张 秀 美1,2 胡北侠1,2 黄艳艳1,2 李士娟31作者简介：张秀美（1956-），女，江苏徐州人，硕士，研究员。E-mail：.研究方向：禽病诊断与防治。基金项目：山东省十五科技攻关（项目编号：022020103）；国家十一五科技支撑计划（项目编号： 2006BAD06A16-2）。（1.山东省农科院畜牧兽医研究所，2.山东省畜禽疫病防治与繁育重点实验室， 3.济南市农业开发办公室，山东济南，250100）2006年11月，山东某肉种鸡场爆发了以产蛋下降，外观腹部膨大，走路如企鹅样，输卵管管壁变薄，管内积有大量澄清、透明的液体为特征的疾病，经综合诊断，确定为新城疫病毒感染。1.发病情况该场为新建种鸡厂，2006年4月20日和4月27日分两批引进罗斯父母代肉种鸡各3500套。第一批28周龄，第二批27周龄，在鸡群刚进入产蛋率80%时开始发病。29周龄死淘数量明显增多，发病率3-5%，产蛋率稍有下降，绝大部分病鸡外观发育良好，鸡冠红润，羽毛整洁光亮，精神、采食、饮水，粪便均正常。腹部日渐增大，站立行走呈“企鹅”姿势，腹部胀满，触摸有波动感。个别鸡精神沉郁，拉白色或黄绿色稀粪，采食下降，抗生素治疗无效。病鸡解剖后，病变基本一致。病鸡腹腔内被巨大的输卵管水性囊肿所侵占，输卵管壁菲薄透明如蝉衣，毛细血管清晰可见，刺破囊肿的输卵管取出来，放出700-1000毫升液体，透明清亮无味，病鸡卵巢发育正常，消化道、呼吸道及其它内脏器官均未见异常。2.实验室诊断2.1抗体检测：发病鸡翅静脉采血分离血清，共采集20份。2.1.1衣原体抗体检测：使用衣原体间接血凝试剂盒（购自兰州兽医研究所，批号：060901），同时设正常鸡群作为对照。2.1.2传染性支气管炎（IB）抗体检测：使用进口IBV ELISA抗体检测试剂盒（IDEXX）。 2.1.3禽流感(H5、H9)和新城疫抗体检测：禽流感、新城疫血凝抗原购自青岛动检所诊断液中心，血凝和血凝抑制试验（HA and HI test）按照规程进行。2.2衣原体病原检测：使用进口的乳胶标记衣原体免疫层析试纸条（Unipath有限公司，批号：S20040026）,检测材料为输卵管上皮和积液。支原体检测：使用支原体鉴定、计数和药敏试剂盒（珠海丽珠试剂有限公司，批号：20050017），检测材料为输卵管上皮和积液。2.3细菌分离：无菌取病鸡肝、脾和输卵管积液，分别涂布5%血清琼脂板、普通琼脂板和麦康凯平板，37温箱内培养24h。2.4病毒分离：分别取肝脏、脾脏（编号：A组）、输卵管（编号：B组）和输卵管积液（编号：C组）加无菌生理盐水匀浆处理后，-20反复冻融三次。8000rpm离心10分钟，取上清。无菌检验后接种911日龄SPF鸡胚。37温箱内孵至120h，其间每天照胚两次，弃去24 h内死亡鸡胚。收集24120h死亡、存活鸡胚尿囊液，测定HA效价。第一代无HA效价的尿囊液，无菌处理后继续接种911日龄SPF鸡胚传代，如此反复传至第四代。最后一代孵鸡胚至18日龄，观察鸡胚病变。2.5病毒鉴定：首先用禽流感（H5、H9）、新城疫阳性血清做HI试验。确定为新城疫病毒后，用鉴别NDV强弱毒株的RT-PCR方法进行初步鉴定，具体方法参考文献1。3.诊断结果3.1衣原体抗体检测结果： 衣原体抗体阳性率10%，不高于正常鸡群的抗体阳性率。3.2 IBV抗体检测结果见表1。3.3禽流感(H5、H9)和新城疫抗体检测结果见表1.3.4衣原体检测结果：输卵管上皮和积液衣原体抗原检测均为阴性。3.5支原体检测结果：输卵管上皮和积液支原体抗原检测均为阴性.3.6细菌分离结果： 病鸡肝、脾和输卵管积液细菌分离均为阴性。3.7病毒分离结果：A组（肝脏、脾脏）、B组（输卵管组织）经鸡胚盲传至第四代，尿囊液无HA效价，第四代鸡胚孵至18日龄无发育迟缓、卷缩等明显病变。B组（输卵管组织）、C组（输卵管积液）经鸡胚盲传至第12代，尿囊液无HA效价。经鸡胚盲传至第3代，尿囊液HA效价为79log2。表1 血清样品IBV、禽流感（H5、H9）和NDV抗体检测结果样品编号IBV抗体滴度（ELISA）HI抗体水平（log2）H5H9ND1757791010234811091238845810124115079914578148913670088121471287989989165710129693098121053057111111960651012125286911101355168101114238999915361091112166970910111774799101318128797715198447111011206871911113.8病毒鉴定结果：用禽流感（H5、H9）、新城疫阳性血清做HI试验，结果仅与NDV阳性血清反应阳性，与禽流感（H5、H9）阳性血清反应阴性，初步确定为NDV。RT-PCR鉴定结果为既有NDV强毒也有弱毒。4.分析与讨论：4.1国内自90年代开始有类似蛋鸡输卵管积液临床病例的报道，由于一直未能分离到病原，有的学者便根据个人的临床经验，加上简单的染色、镜检和血清学调查，认为是衣原体感染2,3,4,5。通过本研究，我们从病原学和血清学两方面进行诊断，认为衣原体感染不是该病的直接因素。4.2病毒分离结果表明病鸡输卵管组织和积液内存在新城疫病毒，但是肝脏、肾脏内均未分离到病毒，说明感染的NDV仅在病鸡体内有限的部位（输卵管内）复制，而且病毒滴度很低。这也许是长期以来未能分离的病原的原因之一。4.3抗体检测结果表明，鸡群体内NDV抗体水平较高。但是，已有的研究结果表明，高抗体水平下的免疫鸡群仍然能够感染NDV强毒，并且感染鸡群能够向外排毒，造成NDV强毒在鸡群中循环传播6,7,8。