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粗提技术论文：坛紫菜R-藻红蛋白的分离纯化工艺与分析鉴定【中文摘要】藻红蛋白作为坛紫菜中的一种重要生理活性物质,已广泛应用到食品、轻工业、化妆和医药等行业,具有很高的经济价值。目前藻红蛋白主要是从红藻中分离提取获得,现已报道的分离纯化工艺多为破壁粗提,盐析沉淀粗分离再结合多步色谱层析纯化获得,这种工艺存在多种问题,比如细胞破碎不充分,提取效率较低、盐析沉淀操作步骤繁琐、多步柱层析成本较高等等,使得藻红蛋白生产难以工业化,高纯度藻红蛋白价格十分昂贵,极大限制了藻红蛋白的广泛应用。故本文针对坛紫菜R-藻红蛋白分离纯化存在的一系列问题,对比了多种破壁粗提技术并加以条件优化,结合两步色谱层析,建立了坛紫菜R-藻红蛋白分离纯化新工艺,为藻红蛋白大规模开发和利用提供了理论基础和科学依据。(1)坛紫菜R-藻红蛋白是胞内蛋白,破壁技术作为藻红蛋白提纯的第一步直接关系到原料的利用率和藻红蛋白的生产成本,具有十分重要的意义。故本研究比较了4种具有大规模提取应用前景的粗提技术溶胀法、化学处理法、超声波法和搅切法对坛紫菜R-藻红蛋白的提取效果,以R-藻红蛋白提取得率、纯度和提取时间为参数,确定搅切法为最佳粗提技术,并对这种方法的物料比、搅切转速和搅切时间进行了优化,结果表明当物料比为1：.【英文摘要】As an important physiological active substance of Porphyra haitanensis, R-phycoerythrin is widespread applied in food, cosmetics and pharmaceutical industry with a very high economic value. At present phycoerythrin is mainly separated from the red algae. There are many reports of the separation and purification about it at home and abroad.Conventional protein purification procedures involve three steps:pretreatment of the sample to allow the intracellular material to become liberated, making a crude extract.【关键词】粗提技术 离子交换色谱 凝胶过滤色谱 坛紫菜R-藻红蛋白 分离纯化【英文关键词】Extraction and Purification Ion Exchange Chromatography Gel Filtration R-phycoerythrin Analysis【目录】坛紫菜R-藻红蛋白的分离纯化工艺与分析鉴定摘要4-6Abstract6-7目录8-11引言11-121 文献综述12-241.1 藻红蛋白的概论12-171.1.1 藻红蛋白与藻胆蛋白12-131.1.2 藻红蛋白的结构与组成13-151.1.3 藻红蛋白的分类15-161.1.4 藻红蛋白的理化性质16-171.2 藻红蛋白的应用17-191.2.1 在免疫荧光技术方面的应用17-181.2.2 在食品行业和精细化工方面的应用181.2.3 在医药保健药物开发方面的应用18-191.3 藻红蛋白的提取与粗分离19-211.3.1 破壁粗提19-201.3.2 粗制方法20-211.4 藻红蛋白的分离纯化21-221.4.1 吸附层析21-221.4.2 离子交换层析221.4.3 凝胶柱层析221.5 本文研究内容及技术路线22-242 坛紫菜R-藻红蛋白的粗提技术的比较24-362.1 材料与方法24-252.1.1 材料与试剂242.1.2 仪器及设备242.1.3 细胞破碎方法24-252.1.4 坛紫菜R-藻红蛋白得率和纯度的计算252.2 结果与讨论25-352.2.1 溶胀法25-272.2.2 化学处理法27-292.2.3 超声破碎法29-322.2.4 搅切法32-352.3 本章小结35-363 坛紫菜R-藻红蛋白的分离纯化工艺的建立36-553.1 材料与方法36-383.1.1 材料与试剂363.1.2 仪器与装置36-373.1.3 实验方法37-383.2 结果与讨论38-533.2.1 离子交换介质种类的选择39-403.2.2 缓冲液种类的选择40-423.2.3 起始缓冲液pH的优化42-443.2.4 洗脱液盐浓度的优化44-473.2.5 上样体积的优化473.2.6 洗脱流速的优化47-483.2.7 离子交换层析的放大48-493.2.8 不同孔径超滤膜的选择49-503.2.9 凝胶过滤层析50-533.3 本章小结53-554 坛紫菜R-藻红蛋白的分析鉴定55-654.1 材料与方法55-584.1.1 材料与试剂554.1.2 仪器与设备554.1.3 实验方法55-584.2 实验结果58-634.2.1 紫外可见吸收光谱分