HIV抗体检测的标准操作程序(ELISA法和快速法).doc

HIV测定（ELISA法）标准操作规程1、检验目的 应用双抗原夹心酶联免疫法原理（ELISA）定性检测人血清、血浆标本中的HIV（1+2）型抗体的测定，用于HIV感染的辅助诊断，抗HIV药物治疗的效果的监测。2、原理采用夹心ELISA方法检测血清或血浆标本中人类免疫缺陷病毒HIV（1+2）型抗体，预包被高纯度基因重组HIV（1+2）型抗原，可与标本中的抗-HIV抗体反应，加入HRP标记HIV（1+2）型抗体抗原结合，形成抗原抗体酶标抗原复合物，然后加入TMB底物产生显色反应。通过酶标仪检测吸光度（OD值），根据OD值判断HIV抗体的存在与否。3、性能参数灵敏度高（0.5ng/ml）4、标本要求 （1）标本类型：血清，血浆。（2）标本采集：见标本采集手册（3）标本储存和运输：室温放置不超过8小时，2-8不超过72小时，-20可长期保存，应避免反复冻融（4）标本拒收状态：细菌污染，严重溶血或脂血标本不能作测定。 本文来自检验地带网 5、容器和添加剂类型6、试剂（1）试剂名称：人类免疫缺陷病毒HIV(1+2)型抗体诊断试剂盒。（2）试剂生产厂家：上海科华生物工程股份有限公司（3）包装规格： 96T/Kit（4）试剂盒组成：、HIV酶标板；、HIV酶标试剂；、HIV（1+2）型阳性及阴性对照血清；、显色剂A液和B液；、此外还有浓缩洗涤液、终止液、自封袋、封板膜、说明书等。 7、仪器设备：酶标仪：ZS板式，北京普朗生物技术有限公司，每年由计量单位进行一次校准。洗板机：DNM-9620型，北京普朗生物技术有限公司，每年由国家计量单位进行一次校准。移液器：上海求精，每年由国家计量单位进行一次校准。8、校准程序 9、操作步骤、配液：将50ml浓缩洗涤液用蒸馏水或去离子水25倍稀释至1000ml备用。、编号：将样品对应微孔按序编号，每板设阴性对照2孔、阳性对照3孔，空白对照2孔。、加样：分别在相应孔加入待检标本、阴性、阳性对照100l，用封板膜封板后置37温育60min。、洗涤：小心把封板膜揭去，用洗板机选择5次程序，洗板后在干净纱布上拍干。、加酶：每孔加酶结合物100l（空白对照孔除外），充分混匀，用封板膜封板后置37温育30min。、洗涤：小心把封板膜揭去，用洗板机选择5次程序，洗板后在干净纱布上拍干。、显色：每孔加入底物缓冲液50l，TMB 50l，轻轻振荡混匀，封板后置37避光显色10min。 、测定：每孔加终止液50l，轻轻振荡混匀。设定酶标仪波长为450nm（建议使用双波长的酶标仪比色，参考波长630 nm），空白调零，读取各孔OD值。、判断结果：计算临界值（cut-off）值。临界值=阳性对照值10%。（若阳性对照OD值2.5按2.5计算）正常情况下，阴性对照孔的OD值0.08。样品OD值临界值者为HIV抗体阴性。若1孔阴性对照的OD值0.08应舍弃，若有2孔或2孔以上阴性对照的OD值0.08，应重复实验。 本文来自检验地带网 正常情况下，阳性对照孔的OD值0.80。样品OD值临界值者为HIV抗体阳性。若1孔阳性对照的OD值0.8应舍弃，若有2孔或2孔以上阳性对照的OD值0.8，应重复实验。注意：对于筛查阳性标本，应重新取样双孔复试，复试阳性者应按照全国HIV检测管理规范送HIV确证实验室进行确证试验。10、质量控制：每块板设阴阳性及空白对照，并于每次试验用自制质控血清作质控，将质控血清孔OD值采用“即刻法”计算或标在质控图上，如质控有效，表明试验可靠；如失控，则要检查试剂效期、储藏温度、试验温度是否正常、操作步骤是否正确，直至重新试验使其在控。11、干扰和交叉反应12、生物参考区间 正常人阴性。13、患者检验结果的可报告区间 阳性表示HIV病毒感染。14、临床意义 用于HIV感染的辅助诊断，抗HIV药物治疗的效果的监测。 15、其它：必须按规定使用经中国药品生物制品检定所检定并贴有检定合格防伪标签的试剂。 HIV测定（胶体金法）标准操作规程2010-12-28 来源:检验地带网 浏览:703次 转发至： 【字号：大 中 小】 核心提示：1、检验目的 用于体外、肉眼观察、定性的免疫分析，监测血清或血浆中的HIV-1和HIV-2抗体，用于帮助检测受感染个体的HIV-1和HIV-2抗体。本品检测阳性者，需进一步确证。 2、原理 利用双抗原夹心法检测HIV抗体。标本加入反应板，若标本中含有HIV抗体时，先与金1、检验目的用于体外、肉眼观察、定性的免疫分析，监测血清或血浆中的HIV-1和HIV-2抗体，用于帮助检测受感染个体的HIV-1和HIV-2抗体。本品检测阳性者，需进一步确证。2、原理利用双抗原夹心法检测HIV抗体。标本加入反应板，若标本中含有HIV抗体时，先与金标抗原反应，形成抗体-金标抗体复合物，在虹吸作用下向前移动，遇到包被抗原形成抗原-抗体-金标抗原复合物，并出现红色沉淀线。包被膜上同时带有一条质控包被线作为对照，所以当出现一条红色质控线和一条（或两条）红色反应线时判断为阳性。当待测标本中无HIV抗体时，只出现一条红色质控线则判断为阴性。作为质控，不管结果为阳性或阴性，都会出现一条红色质控线。如无红色质控线（或只有反应线）出现，则实验无效。本方法适用于血清标本检测，用于医院、海关及无偿献血员现场快速体检等。3、性能参数4、标本要求（1）标本类型：血清。（2）标本采集：见标本采集手册。（3）标本储存和运输：新鲜血清28贮存时间不超过72小时。 （4）标本拒收状态：细菌污染，严重溶血或脂血标本不能作测定。5、容器和添加剂类型6、试剂（1）试剂名称：人类免疫缺陷病毒（HIV-1+2）抗体诊断试剂（胶体金法）。（2）试剂生产厂家：天津中新科炬生物制药有限公司。（3）包装规格：1个测试/包装袋；25个测试/盒。（4）试剂盒组成：单人份包装测试板，每盒25人份。说明书一份。 7、仪器设备（请根据各实验室情况自行添加）8、校准程序9、操作步骤HIV-1+2抗体诊断试剂盒操作流程（1）、撕开包装有HIV-1+2抗体检测板的袋，取出检测板水平放置于实验台上。（2）、用塑料吸管吸2-3滴血清标本（70-100微升）加入标本孔中。（3）、15-30分钟内观察结果。10、结果判断（1）、阳性：出现两条或三条红线均为阳性反应。（2）、阴性：仅出现质控一条红线，则实验结果为阴性。（3）、无效：如无红线（或只有反应线）出现，表明实验无效，须重新检测。11、质量控制：阴性对照显示为阴性；阳性对照显示为阳性。12、干扰和交叉反应其他体液或混合样品可干扰反应，不可用EDTA抗凝的全血血浆。13、生物参考区间正常人为阴性14、患者检验结果的可报告区间阴性；阳性。15、临床意义： 监测血清或血浆中的HIV-1和HIV-2抗体，用于帮助检测受感染个体的HIV-1和HIV-2抗体。本品检测阳性者，需进一步确证。 16、其它：必须按规定使用经中国药品生物制品检定所检定并贴有检定合格防伪标签的试剂。 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