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文档简介

实验五多酚氧化酶活性的测定一 实验目的 通过实验掌握测定多酚氧化酶活性的方法及原理 理解诸如 果实受伤 组织变褐的原因等 二 原理与方法多酚氧化酶 PPO 催化各种酚与O2氧化为醌 本实验是采用邻苯二酚为底物 在0 2M磷酸氢二钠 0 1M柠檬酸缓冲液PH6 0的反应体系中 PPO催化邻苯二酚形成褐色的醌 在分光光度计410nm处使反应体系的OD值产生变化 通过OD值上升的读数变化确定PPO的酶活大小 三 实验材料 仪器与试剂1 材料 马铃薯 2 仪器 恒温水浴 分光光度计 试管等 3 试剂 0 5 邻苯二酚溶液 0 2M磷酸氢二钠 0 1M柠檬酸缓冲液 PH6 0 四 实验方法 1 设计样品 自购 的不同贮藏条件 提前贮藏样品以进行测定 2 酶液的制备 称取样品5 0g 用预冷蒸馏水研磨匀浆 定容至100ml 在18 20 下浸提30分钟 中间摇动数次 过滤备用 3 测定 1 对照 在含有6mLpH6 0的0 2M磷酸氢二钠 0 1M柠檬酸缓冲液试管中加入1mL0 5 邻苯二酚溶液 在30 恒温水浴中预热后加入1mL灭酶后的酶液 2mL蒸馏水 以此调零 2 样品测定 在含有6mLpH6 0的0 2M磷酸氢二钠 0 1M柠檬酸缓冲液试管中加入1mL0 5 邻苯二酚溶液 在30 恒温水浴中预热后加入1mL酶液 2mL蒸馏水 反应5分钟 加热灭酶以终止反应 以5000r min离心10分钟 取上清液备用 在410nm下测定吸光度 五 实验结果记录及分析 以每分钟A410变化0 01为一个多酚氧化酶活性单位 u 式中 A410 反应时间内吸光度的变化 W 样品鲜重g t 反应时间min 本
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