CD105、CD146在大肠癌组织中的表达及对预后判断的价值.doc

CD105、CD146在大肠癌组织中的表达及对预后判断的价值河北省秦皇岛市肿瘤医院 康文喜 岳秀杰 单妍 王小聪 邮编：066001摘 要: 目的 探讨血管内皮标志物CD105、CD146在大肠癌中的表达及对肿瘤预后判断的意义。方法 用免疫组织化学染色（SP三步法）和流式细胞仪检测法联合检测200例大肠癌组织CD105、CD146的表达情况，分析大肠癌不同分期、不同分化程度以及与转移和判断预后的关系。结果 免疫组化法：CD105、CD146在大肠癌组织中的表达呈强（+），MVD计数：大肠癌组织CD105为47.335.54，CD146 为30.737.15，正常大肠组织CD105为4.911.37 ，CD146 为2.880.50，（P0.05）；流式细胞术检测法：CD105+CD146+在大肠癌组织中表达为21.374.79%，正常大肠组织中表达为5.731.99 ，P0.05；两种检测方法均显示，大肠癌组织中的CD105、CD146的表达明显高于正常大肠组织，而且在不同Dukes分期、不同分化程度的大肠癌中，CD105、CD146的表达亦有显著差异，（P0.05）结果有统计学意义。 结论 免疫组化法和流式细胞仪检测法联合检测大肠癌组织中CD105、CD146的表达可能是判断大肠癌患者转移及预后判断的重要指标。关键词： CD105 CD146 流式细胞仪 大肠癌 免疫组化SP法肿瘤血道转移是肿瘤患者死亡的重要原因，肿瘤实质内血管生成已经逐渐引起了人们的重视【1】。CD105、CD146表达于血管内皮细胞，是研究肿瘤新的重要抗体。本文收集大肠癌200例，通过免疫组化和流式细胞仪检测法联合检测CD105、CD146在大肠癌组织中的表达程度，探讨CD105、CD146在大肠癌组织中的表达及其与临床病理特征的关系，分析CD105、CD146在大肠癌发生发展及对预后判断中的重要价值。1.资料和方法1.1 临床资料 本组收集2008年3月-2010年12月我院外科住院患者，其中男性146例，女性54例，年龄2779岁，平均年龄49岁。200例中，盲肠16例、升结肠57例、横结肠23例、降结肠43例、直肠61例，同时取同源的正常大肠组织作对照。巨检：200例大肠癌中，隆起型36例、溃疡型75例、浸润型46例、胶样型43例。每例标本取组织块10-15块不等，组织学分型：高分化腺癌 115例，中分化腺癌65例，低分化腺癌20例。有淋巴结转移者124例，无淋巴结转移者76例。Dukes分期：Dukes期13例、 Dukes期63例、 Dukes期124例。1.2 主要仪器 流式细胞检测仪购自美国贝克曼库尔特公司。1.3 主要试剂 流式细胞检测所用的鼠抗人CD105-FITC、CD146-PE 、 CD45-PC5单克隆抗体购自美国贝克曼公司。免疫组化SP法试剂盒购自北京中杉公司。14 方法 所有组织块均采用10%福尔马林固定、常规石蜡切片、HE染色和免疫组化染色，普通光学显微镜观察。免疫组化采用SP三步法，在血管内皮细胞胞膜或胞浆中表达，阳性呈棕黄色颗粒。MVD 计数方法参照 Weidener 校正方法并作修改【2】，阳性显色的单个内皮细胞或细胞团,不管有没有形成管腔,只要与周围的微血管、肿瘤细胞和其它连接组织有一个清楚的界限,都认为是一个可计数的微血管，而有平滑肌壁及管腔直径约 8 个红细胞直径的血管需排除在外。在微血管最多的区域计数3个不同高倍镜视野下微血管数取其平均值，微血管数3个判断为阳性。流式细胞仪检测法，取手术后大肠癌组织和同源的正常大肠组织分别制备成单细胞悬液，调节细胞数为1106，分别加入CD105-FITC、CD146-PE各10ul避光孵育15min，加入2mlPBS，离心1500转沉淀5min，PBS洗2次，弃上清，混均后加入适量PBS上机检测。1.5统计学处理 所有数据均采用SPSS13.0统计软件进行， 定为P0.05有统计学意义。2.结果2.1 CD105、CD146在大肠癌组织及正常肠壁组织中均有表达，但大肠癌组织中表达数量增多，阳性表达的血管内皮细胞可为单个细胞，亦可几个细胞连接成条索状或团状，大部分阳性表达的血管结构不完整，管腔不规则，少数区域可见圆形或椭圆形血管腔。正常肠壁组织中血管表达数量少，血管结构大多数较完整，呈圆形、长条形，不规则形。免疫组化法：大肠组织CD105 CD146较正常大肠组织CD105 CD146增高，流式细胞检测法：大肠癌组织CD105+ CD146+较正常大肠组织增高，P0.0 5具有明显的差异。（见于表）表大肠癌组织与正常大肠组织果的比较 组 别 免 疫 组化 流式细胞检测 CD105 CD146 CD105+ CD146+ 大肠癌组织 47.335.54* 30.737.15* 21.374.79*正常肠组织 4.911.37 2.880.50 5.731.99注：*与正常组比较，t= 33.22, P 0.0 5; *与正常组比较，t=17.39, P 0.0 5;*与正常组比较，t=13.48, P 0.0 5。2.2 大肠癌患者在不同的组织分化程度中，低分化腺癌较高分化腺癌CD105、CD146增高，P0.05具有明显的统计学意义。表大肠癌不同分化程度中的比较 组 别 免 疫 组化 流式细胞检测 CD105 CD146 CD105+CD146+ 高分化腺癌 41.057.63 28.527.47 18.158.97中分化腺癌 52.854.12 37.341.32 23.475.36低分化腺癌 67.643.45 49.216.08 37.548.67注：高分化腺癌与低分化腺癌的比较P0.052.2 大肠癌患者在不同的Dukes分期中，Dukes较期CD105、CD146显著增高，其 P0.01结果具有显著的统计学意义。（见于表）表大肠癌Dukes分期中的比较 组 别 免 疫 组化 流式细胞检测 CD105 CD146 CD105+CD146+ Dukes 45.346.50 26.284.34 20.865.38Dukes 54.253.04 36.177.25 26.477.65Dukes 62.585.85 47.332.43 39.545.24注：Dukes较期P0.05图1 正常大肠组织CD105 图2正常大肠组织 CD146图3:大肠高分化腺癌CD105 图4:大肠低分化腺癌CD1463. 随访 本组病例通过门诊随访、信访和电话随访，例术后一年零三个月内死亡，3例术后存活三年，49例术后存活年以上。例目前正在治疗中。4.讨 论1971年Folkman1等提出，肿瘤生长有赖于自身血管生成。肿瘤自身血管的生成直接影响肿瘤的发生发展，用抗肿瘤血管生成的药物治疗肿瘤能达到控制肿瘤生长的目的。近年的研究发现，肿瘤发生早期可不依赖血管供给营养，而是直接从血液中获取所需营养成分，当肿瘤的直径大于1-2mm时，简单的扩散方式已经不能保证其生长所需的氧及营养供应。此时肿瘤细胞可以引起周围的血管内皮细胞增值、迁移，在肿瘤内形成新生的毛细血管，这样可以使肿瘤继续生长及转移。肿瘤新生血管的发生是血管生长因子作用的结果。可通过抑制肿瘤血管的产生来达到抑制肿瘤生长的目的。例如通过抑制肿瘤血管生长因子（TAF）的生成或直接靶向新生毛细血管内皮细胞，使肿瘤血供减少，阻止肿瘤细胞的生长3。以上结果说明肿瘤新生血管的生成在肿瘤发生、发展、浸润、转移的过程中起着重要的作用。CD105是转化生长因子-家族受体蛋白，主要在血管内皮细胞表达，是调节血管对TGF-反应的重要成分之一【4】。CD105在胚胎组织和恶性肿瘤组织中高表达，其标记的微血管密度（MVD）和生存率成反比，故可能成为肿瘤发生、发展及其预后的新指标。Akagi 等5 研究发现,在结直肠腺瘤由轻度、重度不典型增生至腺癌发展的过程中,CD105 标记的MVD 值逐渐升高,表明CD105 在预测结直肠腺瘤癌变中是一个重要指标。Henriksen 等6 发现肿瘤细胞表达CD105 的患者较不表达者生存期短;肿瘤组织血管内皮细胞表达CD105 的患者较不表达者生存期长。进一步研究发现，CD105 与肿瘤恶性程度有关。王玥等报导【4】CD105在不同Dukes分期的结直肠癌患者中表达量有明显差异，A-B期CD105的表达量为1.100.09，C-D期CD105的表达量为1.170.11，二者差异有显著的统计意义。以上结果说明随着肿瘤的恶性程度的升高，CD105的表达量也随之升高。CD146是一种钙非依赖性细胞黏附分子的膜糖蛋白,属于免疫球蛋白超家族 (immunoglobulin superfamily, Igsf)的成员，介导细胞与细胞之间或细胞与细胞外基质之间的相互作用，有助于局部粘连聚集、细胞骨架重组、细胞间相互作用、细胞形态的维持及细胞游走和增殖的调控。CD146在新生血管中选择性高表达，参与新生血管的生成，为肿瘤的生长和转移提供必要的营养。CD146同时表达于正常和肿瘤细胞，在许多恶性肿瘤组织中高表达，其表达程度与肿瘤临床阶段、分化程度、转移范围及P53的积累量高度相关。CD146能促进肿瘤生长、血行转移，与肿瘤侵袭和转移密切相关，可作为肿瘤侵袭与转移的相关标志物8-10。Kang等11研究证明CD146促进内皮细胞的黏附、增殖、迁移，提示其在血管新生过程中可能起重要作用。Zheng等12研究发现，CD146参与肿瘤的血管新生过程，不仅作为细胞黏附分子，而且作为膜信号转导分子。CD146阳性的肿瘤血管内皮与肿瘤细胞上的CD146配体结合，并能相互作用引起肿瘤细胞云集，形成细胞簇，使血管堵塞，继而粘附于血管内皮，使肿瘤细胞进一步侵入周围组织13。动物试验发现，抗CD146抗体能够抑制新生血管生成并抑制多种肿瘤的生长和转移7。上述研究结果提示，CD146在肿瘤血管生成、发生、发展和转移中起重要作用。并可能成为肿瘤预后判断的参考指标。CD146调节肿瘤血管生成的可能机制是激活基质金属蛋白酶2（MMP-2），基质金属蛋白酶2能降解基底膜和细胞外基质，激活生长因子，主要是血管内皮细胞生长因子（VEGF），这种作用有利于肿瘤血管生成和肿瘤转移14。本文研究发现，CD105在大肠癌的表达为 47.335.54，在正常大肠粘膜中的表达为4.911.37；CD146在大肠癌中的表达为30.737.15； 在正常大肠粘膜中的表达为2.880.50。流式细胞仪检测，CD105+ CD146+在大肠癌的表达为21.374.79，在正常大肠粘膜中的表达为5.731.99。以上结果表明免疫组织化学法和流式细胞仪法检测均显示CD105、CD146在大肠癌中的表达明显高于正常大肠组织，两者之间有明显差异，具有统计学意义（P0.05）。在不同分化程度的大肠癌组织中，CD105和CD146的表达亦有明显的差异，高分化腺癌中CD105为41.057.63；CD146为28.527.47 ，CD105+CD146+为18.158.97；在低分化腺癌中CD105为67.643.45 ；CD146为37.341.32，CD105+CD146+为37.548.67，两者相比，低分化癌CD105、CD146的表达明显高于高分化腺癌，（P0.05）两者差异具有明显统计学意义。在不同Dukes分期的病例中，Dukes期CD105为45.346.50 ，CD146为26.284.34 CD105+CD146+为20.865.38； Dukes期CD105为62.585.85，CD146为39.545.24，CD105+CD146+为39.545.24 , （P0.05）两者差异有明显的统计学意义。本研究结果表明，CD105、CD146在大肠癌组织中高表达，证明在大肠癌组织中有新生血管形成，这些新生血管在大肠癌的发生、发展和血道转移的过程中起到直接提供条件的关键作用。CD105、CD146的表达与肿瘤的分化程度及Dukes分期有关，而后者与肿瘤的预后密切相关，提示CD105、CD146的表达可能是判断大肠癌患者预后及转移的重要指标。肿瘤的生长和扩散转移与其微血管的生成和数量增加关系密切。无论是原发肿瘤还是继发转移性肿瘤在生长扩散过程中都依赖血管的生成。CD105 CD146 参与血管生成过程,但两者在血管内皮细胞中的表达程度有所不同，CD105的表达高于CD146的表达，提示CD105今后可能在恶性肿瘤的诊断和治疗方面发挥着重要的作用。目前,有关CD105 CD146的功能和作用还未完全弄清，尚需进一步深入研究，随着分子生物学的发展，利用免疫治疗和基因技术抑制肿瘤组织内皮细胞抑制转入靶点，将可能成为肿瘤研究的新思路。参 考 文 献1Folkman J.Tumor angiogenesis:therapeutic implications.N Engl J Med,1971,285(21):1182-1186。2Weidner N.Folkman J.Pozza F .et al.Tumor angiogenesis:a new significant and independent prognostic indicator in early-stage hreast carcinoma J .J Natl Cancer Inst,1992.84(24):1875-1887.3谢伯剑，曹飞麟，等。CD105在恶性肿瘤诊治及预后中的意义J.中国全科医学,2007,2:756-758。4王玥，刘爱东，等。结直肠腺癌中CD105的表达及其意义J.唐山职业技术学院学报，2009,2:45-47. 5 Akagi K, Ikeda Y, Sumiyoshi Y, et al . 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