沙棘籽渣黄酮对糖、脂代谢的调控及机理探讨.doc

沙棘籽渣黄酮对糖、脂代谢的调控及机理探讨【摘要】：沙棘(HippophaerhanmoidesL.)系胡颓子科(Elaeagnaceae)沙棘属植物,不仅具有良好的改良土壤和水土保持功能,而且有很高的药用价值。沙棘籽渣是沙棘籽榨油后的残渣,也是沙棘初级利用后的弃物,沙棘籽渣黄酮(flavonoidsfromseedresiduesofHippophaerhamnoidesL.,FSH)是其所含的生物活性成分之一。课题组前期研究显示FSH具有干预糖、脂代谢异常的生物学活性,本文在此基础之上,通过观察FSH对脂肪细胞糖代谢及分化的影响,结合高脂饮食小鼠模型,进一步探讨了FSH调节糖、脂代谢的作用机理及靶点。研究首先分离大鼠脂肪细胞,通过检测细胞葡萄糖消耗量,对实验室几种植物有效成分进行了筛选,结果显示FSH促进大鼠脂肪细胞消耗葡萄糖的作用最为明显,200-1000g/mL的FSH均可显著促进脂肪细胞消耗葡萄糖,并且FSH与胰岛素联合作用时,细胞葡萄糖消耗量显著高于胰岛素单独作用。根据上述结果,实验进一步观察了FSH对3T3-L1脂肪细胞糖代谢的影响。结果显示,10-1000g/mL的FSH对前脂肪细胞消耗葡萄糖的能力无明显影响,但200-800g/mL的FSH能显著促进经诱导分化成熟的脂肪细胞消耗葡萄糖。同时FSH在200g/mL浓度下可有效提高GLUT4mRNA的表达,提示FSH可能通过上调GLUT4mRNA的表达来促进脂肪细胞消耗葡萄糖。另外,通过油红O染色和甘油三酯含量测定观察FSH干预脂肪细胞分化的程度。结果显示,50和100g/mL的FSH能够显著降低油红O洗脱液吸光度值,25、50和100g/mL的FSH可使脂肪细胞内甘油三酯含量显著降低,说明FSH能够抑制3T3-L1脂肪细胞的分化。同时,MTT实验结果显示,5-100g/mL的FSH可对3T3-L1前脂肪细胞的增殖产生抑制作用。以上细胞试验结果表明,FSH具有促进脂肪细胞消耗葡萄糖,抑制脂肪细胞分化及前脂肪细胞增殖的作用,提示脂肪细胞可能是FSH发挥作用的潜在靶细胞,FSH在体内的降糖调脂活性可能是通过对脂肪细胞功能的调节而实现的。为进一步验证和探寻FSH发挥药效的作用途径,本研究利用高脂饮食小鼠模型观察FSH对模型鼠糖、脂代谢的影响并探索其作用机理及靶点。结果显示：连续灌胃FSH(50、100和150mg/kg剂量)12w,与高脂对照组相比,模型小鼠体重、肝脏系数、附睾处脂肪垫系数下降,但平均饮食量和饮水量、心脏系数、脾脏系数、肾脏系数无明显变化：血清TC、LDL-C、LDL-C/TC和血糖水平降低,HDL-C/TC升高,口服糖耐量得到改善,而胰岛素水平和胰岛素敏感指数无显著性变化。FSH处理组小鼠肝脏TC、TG含量降低,透射电镜观察显示FSH组小鼠肝细胞中脂滴数量减少,而骨骼肌中TC、TG含量无明显变化。此外,FSH组小鼠肝脏LPL和HL活性及骨骼肌LPL活性均无显著性差异,而脂肪组织LPL活性显著降低。同时,FSH组小鼠肝脏GSH-PX和SOD活性提高,GSH、MDA和T-AOC无明显变化。根据上述实验结果并结合细胞试验,推测肝脏和脂肪组织可能是FSH发挥药效作用的主要靶组织,因此试验进一步检测了肝脏和脂肪组织中与糖、脂代谢相关基因表达的变化。结果显示,与高脂对照组相比,FSH组小鼠肝脏组织中LDLR和PPARmRNA表达量增加,G-6-PasemRNA表达下降,并且低剂量的FSH(50mg/kg)能够增加GKmRNA的表达。在脂肪组织中,高剂量的FSH(150mg/kg)提高了GLUT4和PPARmRNA的表达,另外,FSH降低IRS-2mRNA表达,但能不同程度的增加IRmRNA和PI3K、Akt蛋白的表达。综上所述,FSH能够降低高脂饮食小鼠的血脂血糖水平,肝脏和脂肪组织是FSH调节糖、脂代谢的主要靶组织。FSH提高肝脏LDLR和PPARmRNA的表达可能是FSH调节血脂水平的部分机理,而FSH对前脂肪细胞增殖和分化的抑制作用可能是其减轻体重的关键机制。FSH的降血糖作用一方面可能与降低肝脏G-6-PasemRNA表达而升高GKmRNA表达有关,另一方面,可能是通过增加脂肪组织GLUT4、PPAR、IRmRNA和PI3K、Akt蛋白的表达,促进脂肪细胞消耗葡萄糖来实现的。此外,FSH能降低脂肪组织LPL活性,减少脂质在组织中的积累,也可能是FSH维持糖、脂代谢稳定的一个重要原因。【关键词】：沙棘黄酮脂肪细胞葡萄糖消耗分化高脂饮食高血糖高血脂【学位授予单位】：华东师范大学【学位级别】：博士【学位授予年份】：2011【分类号】：S793.6【目录】：摘要6-8Abstract8-12前言12-15第一章几种植物有效成分对大鼠脂肪细胞糖代谢的影响15-261材料15-162方法16-193结果与分析19-234讨论23-26第二章沙棘籽渣黄酮对3T3-L1脂肪细胞糖代谢的影响26-401材料26-272方法27-303结果与分析30-364讨论36-40第三章沙棘籽渣黄酮对3T3-L1脂肪细胞分化的影响40-491材料40-412方法41-423结果与分析42-474讨论47-49第四章沙棘籽渣黄酮对高脂饮食小鼠糖、脂代谢的影响及机理探讨49-841材料