血管紧张素1.doc

血管紧张素I药盒组成、试剂配制及贮存条件1.A1标准品 7瓶,冻干品2. 125I-AI(125I血管紧张素I) 1瓶,冻干品(红色)3AI抗体 1瓶,冻干品(兰色,免抗)4温育液 1瓶。5分离试剂 1瓶，悬浮液。6.EDTA(抗凝剂)1瓶7.酶抑制剂 2瓶操作步骤1冰冻的血浆样品在流动的冷水中快速融化，快速取二份样品，一份作对照管，放冰水浴中，一份作待测管，在37。C水浴中保温一个小时，取出后放冰水浴中。2待试剂充分溶解，即按下表顺序加样及操作。AI放免分析操作程序表单位：ul 试剂 管别T管非特异管标准管对照管待测管温育液200AI标准100待测血浆100100125I-AI100100100100100AI抗体100100100充分摇匀，2-8。C温育15小时以上分离试剂500500500500充分摇匀，室温放置15分钟后，3500转/分离心20分钟，弃上清液，测各管放射性计数60秒。结果计算非特异结合率（NSB/T%）=NSB管（CPM）-本底（CPM） *100% T管（CPM）-本底（CPM）零管结合率（B。/T%）=零标准管（CPM）-NSB管（CPM） *100% T管（CPM）-本底（CPM）B/B。%=标准管或样品管（CPM）-NSB管（CPM） *100% 零标准管（CPM）-NSB管（CPM）以标准品浓度为横座标，B/B。为纵座标，在半对数纸上绘制标准曲线，根据血浆样品的B/B。从标准曲线上查得样品中AI的含量。也可根据仪器程序自动计算出血浆样品AI的含量，建议最好使用四参数方法处理。 PRA pg/ml/hr=待测管AI浓度-对照管AI浓度技术指标1灵敏度 50Pg/ml2精密度 批内变异系数10% 批间变异系数15%3非特异结合率30%5标准曲线ED25:1420pg/ml；ED50:497pg/ml；ED75:174pg/ml（供参考），相对系数绝对值0.9900.血浆样品采集和保存 取双份血浆，一份血浆在37。C温育一小时，使肾素作用于血管紧张素原产生AI作为待测管，另一份血浆在4。C放置作为对照管。应用放射免疫分析法直接测定血浆中血管紧张素I的浓度。待测管AI的浓度减去对照管AI的浓度，除以温育时间，则为单位时间内AI产生的速率，称为肾素活性。1 待病人脉搏稳定后，坐姿采集肘静脉血2ml，迅速注入在冰水浴中冷却的含20ulEDTA的试管中，摇匀，放冰水浴中冷却后以1000转/分离心5分钟（最好在4。C离心），分离血浆。取血浆1ml放入另一管已预冷的含有10ul酶抑制剂1和20ul酶抑制剂2的试管中摇匀，立即测定或置-20。C冰箱保存，可保留二周。2 激发试验，病人在基础状态采血后，给肌肉注射速尿（0.7mg/kg）。总剂量不超过50mg，保持立位，不饮水，2小时后坐姿采血。注意：注射速尿后两小时内随尿排出的水电解质较多，如病人血钾过低，采血前应适当给予补充。试验过程中病人可能出现口渴、无力、出汗等，一般不重，如过重，应酌情终止试验。让病人平卧，并给予糖盐茶水。3 B-阻断剂，血管扩张剂、利尿剂及甾体激素、甘草等影响体内肾素水平，一般在停药后二周测PRA。利血平等代谢慢的药物应在停药后三周测定。不适停药的病人应改服胍乙啶等影响PRA较小的降压药。4 钠摄入量影响机体PRA水平，病人测定PRA三天前应适当减少食盐摄入量。病人应测定取血前24小时的尿钠含量，以供分析PRA结果时参考。测定原理 本药盒采用竞争性放射免疫分析方法测定人血浆或组织中AI的含量变化，通过和对照比较单位时间内AI的含量变化，获得AI产生的速率-血浆肾素活性。待测血浆（组织）、标准品中的AI和125I-AI与有限量的抗体竞争结合，125I-AI一部分与抗体结合为复合物，另一部分游离。加入分离试剂，离心使复合物部分沉淀与游离部分分离，弃去上清液，测定沉淀物的放射性计数，待测血浆（组织）和标准中的AI含量与复合物的放射性强度呈负相关，用一系列不同浓度的AI做标准，可获得标准曲线，从标准曲线上可查出血浆中AI含量。临床意义本药盒通过测定人血浆中血管紧张素I（AI）产生的速率来测定血浆肾素活性。肾素是由肾脏近球体细胞产生的分子量为40000的一种羧基蛋白水解酶。它作用于血管紧张素原产生血管紧张素I（AI，10肽）。AI在转化酶的作用下形成血管紧张素II（AII，8肽）。 肾素-血管紧张素系统有多种生理功能。在调节人体血压、水和电解质平衡代谢过程中起着重要作用。另外，它与一些肾脏疾病及与肾脏有关的一些疾病有密切关系。如肾素瘤、肾动脉狭窄、Bartte,s综合症，Liddle综合症等。 血浆肾素活性（PRA）和AII浓度的测定已成为原发性和继发性高血压分型诊断、治疗及研究的重要指标。对一些有关肾脏疾病的辅助诊断、治疗以及发病机理的探讨有着重要意义。血浆肾素活性（PRA）的测定是以血管紧张素I产生的速率来表示的。血浆中加入酶抑制剂来抑制转化酶和血管紧张素酶的活性，AI不再进一步降解，使测定结果准确。临床常见病PRA和AII浓度变化情况1 增高原发性高血压肾素型 Bartte,s综合症恶性高血压 肾血管性高血压妊娠 钠缺乏肾小球旁细胞瘤 口服避孕药肾动脉狭窄伴高血压 肝硬化2 减低原发性高血压 原发性醛固酮增多症低肾素型 过量服用甘草药物Liddle综合症 注意事项1收到药盒后，尽快存放在2-8。C。2应避免各种试剂包括待测样品的反复冻融。3在加分离试剂前，将分离试剂充分摇匀。4血浆样品的采集必须在冰水中进行。5待测血浆样品浓度若超出曲线范