苹果的组织培养.doc

苹果的组织培养苹果的组织培养是采用无菌培养技术, 将来自优良植物的茎尖、腋芽、叶片、等器官以及他们的组织切片进行离体培养, 使之在短期内获得大量遗传性一致的个体的方法。1973年Jones等培育苹果砧木M-26和M-9 的茎尖获得成功, 之后美国的Button等利用此技术大量繁殖了英国东茂林试验站育成的苹果砧木M-27 , 促进了其推广应用。我国在这方面也进行了大量工作, 加速了苹果新品种的推广应用。另外, 由于离体技术处理严格, 所以很容易脱除昆虫、一般真菌病害和一些细菌病原及病毒, 是复壮品种的有效措施。已成功脱除的病毒和病害有苹果褪绿叶斑病毒、花叶病病毒、轮纹病等。1苹果矮化砧组织培养 （1）材料方法： 苹果矮化砧GM256，春季芽萌动后取田间的枝条, 将萌发的新芽, 用自来水冲洗后75%酒精0.51 min,0.1%升汞5 min, 然后剥取0.5 mm 左右长的茎尖, 接种于诱导培养基上。以MS 为基本培养基,pH 值为5.8, 培养室温度24, 湿度60%左右。将初代培养出的芽接种到增殖培养基上, 连续继代(每次2530 d)2 次。 将长至2 cm 左右的试管苗接入生根培养基中诱导生根。 （2）结果： 外植体诱导。外植体接种到诱导培养基中,在正常的光照培养条件下均不能诱导出芽,暗培养20 d 和30 d 的黄化苗经光照后很快变绿, 正常生长。而暗培养40 d 的黄化苗玻璃化严重, 经光照后也很难正常生长。诱导培养基中,60d后，当BA浓度低于2 mg/L,NAA浓度高于1mg/L 时不利于矮化砧芽的诱导。IBA也不适宜矮化砧芽的诱导。适宜的浓度和种类是: MS+BA2 mg/L + NAA0.1 mg/L。 增殖。诱导培养出的芽接种到增殖培养基上连续继代(每次2530 d)2 次,在MS+BA2.0 mg/L + NAA0.05 mg/L和,MS+BA3.0mg/L+ NAA 0.10mg/L上苗生长健壮, 增殖快, 可增殖56倍。BA 浓度为1.0 和1.5, NAA 浓度为0.1 mg/L 时试管苗增殖少, 只增殖12 倍, 有叶片黄化, 玻璃化苗现象。 生根培养。将长至2 cm 左右的试管苗接入接入生根培养基中诱导生根，20d后，1/2MS+IBA0.5 mg/L对生根效果最好, 生根快, 生根数多,平均5.8条/苗， 生根率可达86.3%, 浓度超过2mg/L 则抑制生根, 只形成愈伤组织。 暗培养和光培养对生根无明显差别。2 苹果抗寒砧木组培（1）材料方法： 砧木品种：珠美海棠、小金海棠、77-34。在春季植株萌发后，切取嫩芽0.5-1.0cm清水冲洗，先用75%I酒精浸泡15s，再用0.1%升汞浸4-5min，无菌水冲洗干净。以,MS为基本培养基，蔗糖浓度为3%，琼脂0.7%，附加不同种类、浓度激素。（2）结果： 芽绣导。不同砧木品种的芽绣导对激素的要求是有差异的，30d后，MSBA0.7mg/LIBA0.3mg/L 是小金海棠最适培养基，幼苗粗壮，萌发芽为3.8倍；MSBA0.7mg/LIBA0.5mg/L 是77-34最适培养基，萌发芽也是3.8倍；MSBA0.7mg/LIBA0.1mg/L是珠美海棠最适培养基，萌发芽为4.1倍。 生根培养基。1/2MS+IBA1.0mg/L为小金海棠、77-34、珠美海棠的最适生根培养基，生根率均达94%左右，平均达2.6条根/苗左右； 生根苗移栽。选取生长健壮、苗高1.5-2cm、茎粗大于1mm根系较多的试管苗，经半开瓶锻炼苗7d后，转移至盛有蛭石的营养钵中，252，保湿15d，再将营养钵转入温室中，在遮光、保湿条件下放置5-20d移入大田。移栽成活率55-60%。3苹果脱毒组培（1）材料方法： 材料：早春，将上年芽接或切接的盆栽长富2号苹果苗移人温室，待新梢长出35片新叶时，放人热处理箱中，37恒温热处理30 d或32与37每8 h变换一次，变温热处理60 d。脱毒率可达80以上。热处理结束后，从盆栽苗嫩梢上采集生长旺盛、长约23 cm顶梢，流水冲洗510 min，去掉小叶。70乙醇浸泡30 S，蒸馏水冲洗后放人01HgCl2中消毒10 min，无菌水冲洗35次，解剥镜下迅速剥取10 mm的茎尖进行分离培养，接种于起始培养基上。 培养基：起始培养基以Ms为基本的培养基，附加6一BA和NAA，白糖3，琼脂036，pH58。培养条件温度2630，光照强度1 500 2 000 Lx，10 hd。（2）结果： 芽诱导。适宜苹果芽诱导培养基为：MS+6-BAl0 mgL+NAA01 mgL。诱导的芽生长正常可卡发育成新梢。 继代培养。选择诱导的芽丛切割成单芽茎段，转接于设计的继代培养基上，适宜的苹果继代培养基为：MS+6一BAl0 mgL+NAA005mgL。自糖4，琼脂036 mgI。培养条件为光照强度2 000 2 500 Lx，光照时间为1416 hd，适宜温度为2520。40d后增殖6.1倍。 生根培养。选择生长正常的继代培养苗，剪成单芽茎段，插入生根培养基中，苹果适宜的生根培养基为：l2MS+IAAl5 mgL。白糖25，琼脂036。培养30 d后，平均4-6条根/苗，长达0510cm根白且粗，多直接生于茎基部。 炼苗、移栽。强光闭瓶锻炼生根培养2025 d，不定根长至10 cm时，将培养瓶移至20351000lx强光下，不去封口膜继续培养20 d左右，使试管苗幼茎更加充实健壮。光强时可遮荫控制温度在35以下。闭瓶锻炼后开瓶锻炼，除去封口膜，继续锻炼25d，使试管苗适应低湿环境。 过渡移栽。从瓶内取出经过锻炼生根的试管苗，冲去根部的培养基，移栽于营养钵中(其基质为园土：腐熟发黑锯末：河沙=1：2：1混和配制)，于温度25的塑料大棚中培育。将营养钵小苗放在塑料大棚内加盖有薄膜的小拱棚内，早晚各洒水1次，13 d保持空气相对湿度在85以上，基质水分不宜过多。1周后开始逐渐揭膜放风，直至完全除去薄膜。过渡移栽30 d左右，地上部分生长到10 cm左右时可移至大田。4 苹果茎尖培养 品种为新红星等。春季田间取一年生枝单芽茎段经0.1%升汞表面消毒后，将萌动之腋芽（露出4-5片小叶），剥取1.0-2.0mm茎尖接入改良培养基C17（大量元素同C17其它同MS）BA0.5mg/LIBA0.2mg/LCH300mg/L，蔗糖30g/L，琼脂6g/L，pH5.8，温度253，先光培养7d（1000-2000lx,14h/d），再暗培养7d（不见光）诱导率最好，达到78.13%。（附：C17配方（g/L）KNO 1400，NH4N03 300，(NH4)2SO4 -KH2PO4 400 ，CaC122H 2O 150，MgS04.7 H20 150，FeSO47H20 27.8，Na2-EDT