2014分子生物学简答题整理(南京中医药大学).docx

DNA合成的特点 以原来的DNA母链为模板，四种脱氧核苷三磷酸为前体，还需要Mg2+。根据碱基互补配对原则复制产生新的子链。2.需要解链3半保留复制4.需要引物5.复制方向536.复制起始于特定的区域，但终止位置不固定7.双向复制8.半不连续9.具有高度的忠实性DNA合成的过程DNA复制过程分三个阶段；起始：从DNA上控制复制起始的序列即起始点开始复制，形成复制叉，复制方向多为双向，也可以是单向，若以双向进行复制，两个方向的复制速度不一定相同。由于DNA聚合酶不能从无到有合成新链，所以DNA复制需要有含3-OH的引物，引物由含有引物酶的引发体合成一段含310个核苷酸的RNA片段；延长：DNA复制时，分别以两条亲代DNA链为模板，当复制叉沿DNA移动时，以亲代35链为模板时，子链的合成方向是53，可连续进行；以亲代53链为模板时，子链不能以35方向合成，而是先合成出许多53方向的冈崎片段，然后连接起来形成一条子链；终止：当一个冈崎片段的3-OH与前一个冈崎片段的5-P接近时，复制停止，由DNA聚合酶切除引物，填补空隙，连接酶连接相邻的DNA片段。参与DNA合成的酶有哪些参与DNA复制的主要酶和蛋白质有DNA聚合酶、解链酶、SSB、引发酶、拓扑异构酶、连接酶和端聚酶等。参与DNA逆转录的酶有逆转录酶。原核细胞中有哪些DNA聚合酶？分别有哪些功能和作用有5种DNA聚合酶。DNA聚合酶I具有53聚合酶活性、5核酸外切酶活性、3核酸外切酶活性，可催化单链或双链DNA 的延长并自我校对；DNA聚合酶II具有聚合酶活性、3核酸外切酶活性，可能参与DNA修复；DNA聚合酶III有5到3聚合酶活性、3核酸外切酶活性，是促进DNA链延长的主要酶。DNA聚合酶和参与DNA修复合成。PCR的基本原理？你认为分子生物学近十年有哪些进展？类似于DNA的天然复制过程，其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。PCR由变性-退火-延伸三个基本反应步骤构成：模板DNA的变性：模板DNA经加热至93左右一定时间后，使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离，使之成为单链，以便它与引物结合，为下轮反应作准备；模板DNA与引物的退火(复性)：模板DNA经加热变性成单链后，温度降至55左右，引物与模板DNA单链的互补序列配对结合；引物的延伸：DNA模板-引物结合物在TaqDNA聚合酶的作用下，以dNTP为反应原料，靶序列为模板，按碱基配对与半保留复制原理，合成一条新的与模板DNA链互补的半保留复制链重复循环变性-退火-延伸三过程，就可获得更多的“半保留复制链”，而且这种新链又可成为下次循环的模板。重组有哪些类型DNA重组是指发生在DNA分子内或DNA分子之间核苷酸序列的交换、重排和转移现象，主要包括同源重组、位点特异性重组和转座重组。同源重组是两个DNA分子的同源序列直接进行交换。细菌的接合、转导、转化和真核细胞的同源染色体之间的交换等都属于同源重组。位点特异性重组是指在DNA特定位点上发生的重组，需要专门的蛋白质识别发生重组的特异性位点并催化重组反应。转座重组是指DNA上的核苷酸序列从一个位置转位或跳跃到另外一个位置的现象，在原核生物和真核生物的基因组内均可以发生，发生转位或跳跃的核苷酸序列被称为转座子。同源重组的条件和分子机制同源重组的条件：（1）两个DNA分子序列同源；（2）不同物种同源重组所需的最小的同源序列不同；解释同源重组的分子机制的模型：（1）断裂重接模型；（2）模板选择复制模型；（3）Holliday模型；（4）Meselon-Radding模型；同源重组分子机制简述：主要是利用DNA序列间的同源性来识别，而负责配对和重组的蛋白质因子并无碱基序列特异性。同源重组可以双向交换DNA分子，也可以单向转移DNA分子，后者又被称为基因转换。同源重组是将外源基因定位导入受体细胞染色体上的方法，因为在该座位有与导入基因同源的序列，通过单一或双交换，新基因片段可替换有缺陷的基因片段，达到修正缺陷基因的目的。举一个位点特异性的例子噬菌体定点插入。噬菌体DNA能通过重组作用整合进E.coli染色体的特异位点，成为前病毒。噬菌体整合反应发生时，即在attP和attB处发生交叉重组，产生两个较小的环状DNA。整合反应由整合酶催化，其步骤是彼此偶联的：四条链同时被切断、交叉和重新连接起来，其间没有发现任何稳定的中间产物。DNA双链同时被切断，然后磷酸二酯键又重新连接起来，并不需要ATP供应能量。故整合酶实际上能起拓扑异构酶的作用，可使带有att位点（或类似序列）的超螺旋松弛。并且和拓扑异构酶一样，整合酶也产生交错的断裂，有七个核苷酸的单键尾端，形成所谓粘性末端。试介绍玉米的Ac-Ds系统玉米的控制元件可分为两类：一类是可以自主移动的调节因子，能合成转座酶，并支配受体因子移动，如Ac-Ds系统中的Ac；另一类为非自主移动的受体因子，不产生蛋白质，如Ac-Ds系统中的Ds。Ac和Ds这两个因子都位于玉米第9号染色体短臂，在色素基因C的附近。当C基因附近有Ac而没有Ds时，C基因处于活化状态，玉米籽粒内有色素生成，籽粒是有颜色的。当Ds因子插入基因C并且Ac也存在的情况下，虽然Ds抑制基因C的活性，但由于在玉米胚乳发育期间有些细胞里的Ds因Ac存在而切离转座，所以这些细胞仍能合成色素，因而玉米籽粒出现色素斑点。当Ac不存在时，Ds固定在C基因处，C不再合成色素。玉米籽粒就没有颜色。试述复制和转录有何异同相同点: 都以核苷酸为原料，都是酶促的核苷酸聚合过程以DNA为模板 遵循碱基配对原则 都需依赖DNA的聚合酶 聚合过程都是生成磷酸二酯键新链合成方向为53都在细胞内进行不同点： 模板不同：复制两股链均复制 , 转录仅模板链转录（不对称转录） 原料不同：复制的原料为dNTP;转录的原料为NTP 酶不同： 复制用的是 DNA聚合酶 转录用的 RNA聚合酶（RNA-pol） 产物不同：复制的产物为子代双链DNA（半保留复制），转录产物为 mRNA ,tRNA 和rRNA 碱基配对不同：复制配对为A-T , G-C 转录配对为 A-U , T-A , G-C简述原核生物转录终止的方式原核生物转录的终止有两种机制。一是需要蛋白质因子（Rho）的参与，因子能与转录中的RNA结合，启动因子ATP酶活性，并向RNA的3端滑动，划至RNA附近时，RNA聚合酶暂停聚合活动，使RNA:DNA解链分离转录的RNA释放种植转录。另一是在立体系统中发现的，纯化的的RNA聚合酶不需要其他蛋白质因子的参与，可使转录终止，即不依赖因子的转录终止机制，模板DAN在转录终止点附近有特殊核苷酸序列可以形成颈环结构影响RNA聚合酶的构象使转录暂停，DAN与RNA双链不稳定分离，转录终止。简述真核生物mRNA转录后的加工过程（1）前体mRNA在5-末端加入“帽”结构：大多数真核mRNA的5-末端有7-甲基鸟嘌呤的帽结构。这个真核mRNA加工过程的起始步骤由两种酶，加帽酶和甲基转移酶催化完成。（2）前体mRNA在3-端特异位点断裂并加上多聚腺苷酸尾: 尾部修饰是和转录终止同时进行的过程。poly A的有无与长短，是维持mRNA作为翻译模板的活性，以及增加mRNA本身稳定性的因素。一般真核生物在胞浆内出现的mRNA，其poly A长度为100至200个核苷酸之间，也有少数例外。前体mRNA分子的断裂和加多聚腺苷酸尾