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微生物形态学检验 细菌的形态与结构 细菌基本形态有三种 球菌 杆菌 螺形菌细菌基本结构包括 细胞壁 细胞膜 细胞质 核质细菌的特殊结构有 荚膜 鞭毛 菌毛 芽孢 真菌的形态与结构 真菌形态有两种类型 单细胞型 呈圆形或卵圆形 常见于酵母菌和酵母样菌多细胞型 多呈丝状 分支交织成团 称为丝状菌 通称霉菌真菌的基本结构 菌丝 由孢子生出芽管 逐渐延长呈丝状孢子 是真菌的生殖结构 真菌繁殖的微小单位 细菌形态学检查 不染色标本的检查 主要用于检查细菌动力及运动状况 包括湿片法 悬滴法 毛细吸管法染色标本的检查 观察细菌形态 大小 排列 染色特性 以及荚膜 鞭毛 芽孢 异染颗粒等结构 有助于细菌的初步认识或诊断 细菌分离培养及鉴定 细菌分离培养 使细菌在平板上分散生长 便于观察菌落特征 也易于挑取单个菌落进行生化鉴定或血清学试验细菌鉴定 形态与培养特性 形态 染色 培养特性和菌落特征是鉴定细菌的初步依据 细菌形态与染色特点 染色性 革兰阳性 阴性 抗酸染色阳性 阴性等形状 大小和排列 球菌 杆菌 螺形菌 菌体大小 单个 成双 短链 葡萄状等细菌特殊结构 芽孢大小 位置 鞭毛数目及位置等 细菌培养特性 营养要求 简单或复杂生长特性 快或慢气体环境 需氧 兼性厌氧或厌氧适宜生长温度 25 35 37 42 菌落特征 大小 一般可分为大 3mm 中2 3mm 小 2mm表面 光滑 粗糙 粘液样 皱纹 放射状 同心圆等透明度 透明 半透明 不透明外形 圆形 不规则等高度 扁平 凸起 脐形等边缘 整齐 锯齿状等光泽 有光泽 无光泽等色素 金黄色 白色 乳白色 绿色 紫色 黑色等气味 酸味 生姜味 恶臭味溶血性 完全溶血 不完全溶血 不溶血 革兰阳性球菌Gram positivecocci 基本特征 在血琼脂平板上生长 在麦康凯 伊红亚甲蓝 中国蓝琼脂平板上不生长基本鉴定试验要求 触酶试验 任何阳球先做触酶试验 挑取菌落时不宜碰到血琼脂 因红细胞内含有过氧化物酶可致假阳性凝固酶试验 是鉴定葡萄球菌的重要试验 少数金葡菌玻片法阴性 试管法阳性 是因该菌无结合凝固酶 有游离凝固酶 不能使用枸橼酸盐抗凝血浆 因有些细菌可分解枸橼酸盐致假阳性Optochin试验 鉴别肺炎链球菌与甲型链球菌的重要试验CAMP试验 鉴定B群链球菌 菌落特征 血平板上的溶血有助于一些细菌的初步鉴定 如金黄色葡萄球菌 链球菌属等镜下形态 单个 成双矛头状 链状 四链状 葡萄状根据菌落特征及镜下形态 结合一些基本试验可初步判断属于哪类细菌 再进一步做相应的生化试验即可确定细菌种属 金黄色葡萄球菌S aureus 形态与染色 阳性球菌 单个 双成 短链或不规则葡萄状排列 培养特性 在血平板上典型菌落为金黄色 周围有明显 溶血环 部分菌落也可以呈灰白色或柠檬色 化脓链球菌S pyogenes 形态与染色 阳性球菌 固体培养基上呈单个或成双排列 较少呈链状 肉汤中呈长链状排列 脓液标本直接涂片呈单个 成双或短链状 脓液 纯培养 增菌 培养特性 在血平板上形成较小 圆形 凸起 溶血的灰白色菌落 杆菌肽敏感实验 10cm 肺炎链球菌S pneumoniae 形态与染色 呈矛头状 成双或链状 有荚膜 荚膜染色 纯培养 痰液 培养特性 在5 10 二氧化碳环境中生长良好 血平板上形成细小 圆形 中央呈脐窝状 表面光滑 灰色 扁平 周围有草绿色溶血环 部分菌株与典型菌落不同 不是中央凹陷 而是湿润 透明的粘液样菌落 粪肠球菌E faecalis 形态与染色 阳性球菌 单个 成双或短链排列 培养特性 在血平板上形成较小 灰白色 湿润 凸起 有 或 溶血环的菌落 在麦康凯琼脂平板上形成较小 干燥 粉红色菌落 脑膜炎奈瑟菌N meningitidis 形态与染色 阴性双球菌 肾形或咖啡豆状 常成双排列 凹面相对 在脑脊液直接涂片中常位于中性粒细胞内 培养特性 初次分离需在5 10 二氧化碳环境中生长 血平板上形成灰白 光滑 湿润 有光泽 透明或半透明 边缘整齐 不溶血的菌落 在巧克力平板上形成圆形 凸起 湿润 有光泽 灰兰色的似露滴状菌落 淋病奈瑟菌N gonorrhoeae 形态与染色 阴双球菌 成双 肾形排列 生殖道分泌物直接涂片 急性期常位于白细胞内 慢性期位于白细胞外 培养特性 初次分离需在5 10 二氧化碳环境中生长 血平板上形成灰白 光滑 湿润 有光泽 透明或半透明 边缘整齐 不溶血的菌落 在巧克力平板上形成圆形 凸起 湿润 有光泽 灰兰色菌落 白喉棒状菌C diphteriae 形态与染色 革兰阳性 细长微弯 菌体一端或两端粗大 呈棒状 排列不规则 菌体一端或两端可见异染颗粒 培养特性 在血平板上形成较小 圆形 凸起 光滑 灰白色菌落 似干酪状 易碎成两半 无或狭窄溶血环 在亚啼酸钾血琼脂平板上形成黑色或灰黑色菌落 产单核细胞李斯特氏菌L monocytogenes 形态与染色 革兰阳性小杆菌 直或微弯 无芽孢 无荚膜 培养特性 在血平板上形成较小 圆形 光滑 而有 溶血环的菌落 在液体培养基中呈均匀浑浊生长 在半固体培养基中 动力字穿刺线向四周蔓延生长 呈倒伞状 红斑丹毒丝菌E rhusiopathiae 形态与染色 革兰阳性杆菌 菌体细长 有时呈长丝状 易被脱色而呈革兰阴性的杆菌 其间夹着革兰阳性颗粒 培养特性 在血平板上形成的光滑型菌落细小 光滑圆形 凸起有光泽 粗糙型菌落较大 表面呈颗粒状 周围有轻微溶血 在亚啼酸钾血琼脂平板上形成黑色菌落 炭疽芽孢杆菌B anthracis 形态与染色 为致病细菌中最大的革兰阳性杆菌 两端截平 体外培养后形成长链 排列呈竹节形 在体内常单个存在或短链 有荚膜 在人工培养基上可见芽孢 卵圆形并位于菌体中央 菌体不膨大 培养特性 在血平板上形成较大 灰白边缘不整齐菌落 在营养琼脂上形成灰白色 扁平 干燥而无光泽 不透明 边缘不整齐的菌落 对青霉素敏感 蜡样芽孢杆菌B cereus 形态与染色 革兰阳性大杆菌 卵圆形芽孢 位于菌体中央 菌体不膨大 培养特性 在血平板上形成较大浅灰色 似毛玻璃样菌落 在营养琼脂上形成灰白色 不透明 圆形 凸起的较大菌落 边缘常呈扩展状 迎光看似白蜡状 故名蜡样芽孢杆菌 枯草芽孢杆菌E subtilis 形态与染色 革兰阳性大杆菌 有芽孢 无荚膜 培养特性 在营养琼脂上形成较大 灰白色 不透明 锯齿状粗糙菌落 血平板上形成较大 扁平 溶血的菌落 星型奴卡菌N asteroides 形态与染色 革兰阳性 菌体为丝状 在培养早期菌体裂解为较多的球菌或杆菌状 分之状菌丝较少 培养后期可见丰富菌丝体形成 在临床标本中为纤细分支状菌丝 抗酸弱阳性 培养特性 在沙氏培养基或营养琼脂上培养5 7日可见菌落 菌落表面有皱折 呈颗粒状 黄色或深橙色 在血琼脂平板上菌落较小 凸起 呈白色 肠杆菌科Enterobacteriaceae 基本特征 在血琼脂平板上生长 在麦康凯 伊红亚甲蓝 中国蓝琼脂平板上形成发酵和不发酵乳糖的菌落 在三糖铁或克氏双糖底层 上层产酸 产气 氧化酶试验阴性基本鉴定试验要求 氧化酶试验 用于鉴定肠杆菌科细菌 必做试验 大肠杆菌E coli 形态与染色 革兰阴性杆菌 粗短 多数有周鞭毛 培养特性 血平板上呈圆形 边缘整齐 灰白色 不透明的菌落 少数菌株 溶血环 麦康凯上形成不透明 粉红色菌落 部分不发酵乳糖菌株呈无色菌落 少数呈粘稠状菌落 伤寒沙门氏菌S typhi 形态与染色 革兰阴性杆菌 菌体细长 有周鞭毛 培养特性 在麦康凯上形成无色 透明菌落 SS平板上呈无色 透明菌落 但大部分菌落中央呈黑色 肺炎克雷伯氏菌K pneumoniae 形态与染色 革兰阴性杆菌 单个 成双或短链排列 荚膜染色可见外周有透明 环状荚膜 培养特性 在血平板上形成较大 圆形 凸起 灰白色 不溶血菌落 血平板上极少数菌株可出现较大 粗糙型 野菊花状菌落 麦康凯上形成隆起 大而粘液样 易融合的粉红色菌落 接种环挑取呈丝状粘连 普通变形杆菌P vulgaris 形态与染色 革兰阴性杆菌 多数为单个存在 也可见成对或短链状排列 周身鞭毛 培养特性 在血平板上蔓延生长 布满整个平板表面 纤徒现象 麦康凯上形成圆形 扁平 无色 不发酵乳糖 半透明菌落 霍乱弧菌V cholerae 形态与染色 革兰阴性 菌体弯曲呈弧形或逗点状 米泔样粪便直接涂片染色 可见头尾相接 平行排列的弧菌 悬滴法直接镜检可见活泼的运动 培养特性 具有耐硷性 pH9 2时仍能生长 硷性蛋白胨水增菌时液体浑浊 表面形成菌膜 在TCBS平板上形成较大 黄色菌落 非发酵阴性杆菌Nonfermentative 基本特征 在最初分离培养基上 如果有菌落生长并有下列三种情况之一 可认为有非发酵菌存在在血平板上生长而在麦康凯上不生长或生长很差 菌落呈无色 针尖大或完全看不到生长麦康凯上生长的无色菌落 不发酵乳糖 氧化酶试验阳性在三糖铁或克氏双糖培养基内 斜面与底层均不变色 表明该菌不分解葡萄糖与乳糖 提示为非发酵菌注意 不能在麦康凯 SS及其他含糖培养基上作氧化酶试验 而应在营养琼脂或半固体培养基上做氧化酶试验 因糖分解产酸会影响氧化酶试验结果 铜绿假单胞菌P aeruginosa 形态与染色 阴性杆菌 细长 菌体一端有单鞭毛 培养特性 在血平板上形成扁平 湿润 有金属光泽 蓝绿色 透明溶血环的菌落 有生姜味 在麦康凯上可形成5种不同菌落 1 典型型 菌落不规则 边缘呈伞状伸展 2 大肠菌样型 菌落圆形 凸起 无色透明 3 粗糙型 菌落呈纽扣状 表面粗糙 或菌落中央隆起边缘扁平 4 粘液样 菌落光滑 隆起 呈粘液状 嵌入培养基内 不易挑起 似肺克 铜绿假单胞菌特征 蓝绿色或荧光色素 有生姜味 动力和氧化酶试验阳性 5 侏儒型 生长缓慢 培养24h后才有小菌落生长 荧光假单胞菌P fluorescens 形态与染色 阴性杆菌 无芽孢 无荚膜 端鞭毛培养特性 在麦康凯上呈无色半透明菌落 在营养琼脂上形成荧光色的菌落 恶臭假单胞菌P putida 形态与染色 阴性杆菌 无芽孢 无荚膜 极端鞭毛培养特性 在麦康凯上呈较大无色 湿润菌落 在营养琼脂上形成黄绿色菌落 紫外线下可见荧光 鲍曼不动杆菌A baumannii 形态与染色 阴性杆菌 单个或呈双排列 有时呈现丝状或链状 培养特性 在血平板上形成圆形 光滑 边缘整齐的菌落 部分菌落呈粘液状 在麦康凯上形成粉红色菌落 48h后菌落呈深红色 部分菌落呈粘液型 紫色杆菌C violaceum 形态与染色 阴性杆菌 具有极端鞭毛和周鞭毛培养特性 在血平板上形成圆形 光滑 溶血 紫黑色菌落 在麦康凯上呈紫色菌落 放射根瘤菌R radiobacter 形态与染色 阴性杆菌 单个或成双 有周鞭毛培养特性 在血平板上形成灰白色 光滑 湿润 凸起 无溶血环的菌落 在麦康凯上呈无色 湿润 粘液样菌落 时间延长时呈淡粉红色 流感嗜血菌Haemophilus 形态与染色 阴性短小杆菌 两端钝圆 粘液型菌株有荚膜培养特性 在5 10 二氧化碳中可促进生长 生长需 两种因子 适宜培养基是巧克力平板 在巧克力平板上形成微小 无色透明似露滴状菌落 在血平板上形成极小 圆形 透明菌落 并有 卫星现象 产气荚膜杆菌C perfingens 形态与染色 革兰阳性粗大杆菌 两端钝圆 单个或成双 芽孢卵圆形 位于菌体中央或次极端 有荚膜 无鞭毛 培养特性 在厌氧血平板上形成圆形 光滑 边缘整齐的菌落 多数菌株有双圈溶血环 内圈完全溶血 外圈不完全溶血 卵黄琼脂平板上菌落周围出现乳白色浑浊圈 为卵磷脂酶分解卵磷脂所致 疱肉培养基中产生大量气体 肉渣呈粉红色 不被消化 牛乳培养基中分解乳糖产酸 使酪蛋白凝固并产生大量气体 称为 汹涌发酵 产气荚膜杆菌特征 阳性粗大杆菌 芽孢位于菌体中央或次极端 厌氧血琼脂平板出现双圈溶血 牛乳中 汹涌发酵 真菌 按菌落形态分为三类酵母菌 由圆形 卵圆形或长形的细胞组成 如念珠菌 隐球菌 霉菌 由多核菌丝组成 如曲霉菌 白霉菌 双相真菌 能够以菌丝 酵母菌样的单细胞形式存在 如组织胞浆菌 申克孢子丝菌 按致病特点分为两类 白色念珠菌 镜下形态 呈革兰氏阳性 但着色不均 菌体呈卵圆形 薄壁 在玉米 吐温80培养基上培养3日 可见顶端圆形厚壁孢子 糖原染色 菌丝 孢子均为红色 SDA上培养 革兰染色 吐温80培养基 亚甲蓝染色 阴道分泌物中白念珠菌菌丝与芽孢 念珠菌属 白色念珠菌 培养特性 25 或37 时均可生长 在SDA培养基上37 培养 形成奶油色 表面光滑菌落 带有酵母气味 在血琼脂平板上24 48h呈乳白色 凸起 表面光滑 边缘整齐菌落 在显色培养基上呈绿色菌落 SDA上菌落 显色平板上菌落 念珠菌属 白色念珠菌 芽管试验 于0 5ml人或兔血清中 加入少许菌落 混匀 置37 水浴2 3h 取出一接种环菌液湿片镜检 有芽管产生为白念珠菌 念珠菌属 克柔念珠菌 镜下形态 在玉米粉 吐温80培养基上培养3日 假菌丝对称分枝 有细长的芽生孢子 可见圆柱形或卵圆形细胞 临床意义 克柔念珠菌可引起致死性系统性念珠菌病 常威胁先天性免疫缺陷患者 也可发生在大量接受抗生素治疗患者 该菌对氟康唑天然耐药 念珠菌属 克柔念珠菌 培养特性 在SDA培养基上25 培养1周 呈柔软 光滑灰黄色菌落 在血琼脂平板上菌落较小 不规则 呈灰白色 在显色培养基上菌落呈粉红色 SDA上菌落特征 显色平板上菌落特征 念珠菌属 近平滑念珠菌 镜下形态 在不同培养基上显示不同形状 通常呈卵圆形或长倒卵形 在玉米粉 吐温80琼脂上形成细长假菌丝和小分生孢子 培养特性 在SDA培养